鸡血液样品的采集与制备

唐玉香

（四川省中江县畜牧局，四川 中江 618100）

1 采血用品

5mL一次性注射器、试管、试管架、75%酒精棉球、干棉球、标签、记号笔、采样箱、冰袋、冷藏容器、相关表格及个人防护用品等。

2 采血方法

采血部位与采血方法应根据试验方法、检测项目、所需血量以及鸡的日龄等确定。

用血量较少的，如制血液涂片，可刺破鸡冠，以吸管或毛细吸管直接取血；采中等血量可从鸡翼下静脉血管采血，如检测血清中禽流感、新城疫抗体效价；采血量较多的，可从心脏采血，如配制鸡红细胞悬液。

2.1 鸡冠采血法 用针头刺破鸡冠后吸取血液或剪去鸡冠尖端后取血。吸取血液时需挤压鸡冠，一次可吸取30～80μL血液。采鸡冠血时要注意用浓碘酒涂抹采血部位，以防感染。

2.2 颈静脉采血法 鸡左侧颈静脉较细，故常于右侧颈静脉采血。

鸡颈部皮肤上的一个无毛沟处是右侧颈静脉所在位置。采血者左手食指和中指夹住鸡的头部，使头偏向左侧，无名指、小指和手掌握住鸡的躯干，拇指轻压鸡颈椎部使静脉怒张。采血部位消毒后，采血者右手持注射器抽取血液。采血完毕压迫伤口止血。15～45日龄的雏鸡可采用此法采血，成年鸡单人操作较难，且成年公鸡皮色较深不易找到血管，故不采用此法采血。应注意的是鸡颈部皮肤松弛，静脉游离性大，采血后易形成血肿。

2.3 翅静脉采血法 翅静脉采血法是常用的一种采血方法，此法适用于30日龄以上的鸡，尤其是成鸡。雏鸡翅静脉较细，若拔去绒羽采血会造成毛细血管渗血而不易看清静脉位置，另外雏鸡翅内侧皮肤松软，采血时容易滚针，造成瘀血，故雏鸡不宜用此法采血。

采血时由助手保定鸡只，使其翅膀展开，露出腋窝部，并拔掉该处羽毛，拔羽后即可见到一条较粗的静脉，其远心端则是翼下静脉。采血者左手拇指压迫血管近心端，待血管怒张后，用装有针头的注射器由翼根向翅膀方向平行刺入静脉，见血液回流后，慢慢回抽针芯抽取血液。抽血动作应缓慢，静脉血管回血流速较慢，若抽血过快容易导致血管壁塌陷而阻塞针头，影响采血。采血时进针不宜过深，针头切口面应向上刺入皮下再刺入血管。采血完毕，采血局部消毒并按压30 s。如需反复采血，应自远心端开始采血，以免发生栓塞而影响整条静脉的采血。

采血前要用酒精棉球消毒采血部位，酒精有扩张血管的作用。采血完毕应用干棉球压迫采血部位。酒精会引起溶血，造成血液凝固不良，故不宜用酒精棉球压迫止血。

2.4 心脏采血法 心脏采血对心脏损伤较大，如操作不慎，易引起大出血，特别是雏鸡，其常因针头刺破心脏和肝脏而死亡。同时心脏的修复能力差，若采血操作不当对鸡的生长影响较大。此法多用于剖检前的血液采集，常规免疫监测中较少使用。心脏采血虽有难度，但采血速度快、采血量多，尤其适用于需血量较多时。

2.4.1 采雏鸡心血 采血可由一人独立完成。鸡仰卧保定，采血者左手抓鸡，右手持采血针平行颈椎从胸腔前口插入针头，回抽注射器见回血时，即将针芯向外拉，使血液流入采血针。

2.4.2 采成年鸡心血 侧卧法：助手抓住鸡的两翅及两腿右侧卧保定，采血者在心搏明显处，或胸骨脊前端至背部下凹处连线的1/2处消毒后，垂直进针2～3cm，回抽针管见有回血时，针芯外拉收集血液。仰卧法：鸡仰卧保定，拔去胸上部少许羽毛，用手指在胸骨上方、嗉囊下方摸得一凹窝后，右手持针自胸骨上方凹窝斜向前下方心脏方向刺入，边刺边抽动活塞，若刺入心脏，便有血液涌入注射器。采血完毕，局部消毒。

心脏采血在鸡嗉囊空虚时进行较好，一般大鸡取30mL心血不致造成死亡。

3 注意事项

3.1 采血前12h鸡不要饲喂。

3.2 采血前注射器或盛血容器等应消毒、干燥处理。

3.3 采血人员要严格按消毒、防疫规定操作，口罩、乳胶手套、防护鞋帽等穿戴整齐后方可入场。

3.4 采血部位要剪毛、清拭并用酒精棉球消毒。采血完毕应用干棉球按压止血。

3.5 做好现场记录，规范填写采血表格，包括鸡场名称，鸡的品种、日龄，样品数量和免疫情况等。样品做好标记，并核对瓶签，严防瓶签损失、混淆和污染。

3.6 应根据检测要求采血，一般采血量为2～5mL，有特殊要求的可多量采取。需抗凝的要预先加入抗凝剂，需分离血清的，试管要静置、斜放，以便血清析出。

3.7 样品布点应合理，有代表性。一般一个批次采集15份样品，每份样品2～5mL。

3.8 采样时应做好个人防护，避免被鸡抓伤和感染人畜共患病。

3.9 采血留下的废弃物应进行焚烧或深埋处理。

4 血液样品制备

4.1 抗凝血制备 采血前真空采血管或其他容器内按每10 mL血液预加入0.1%肝素或3.8%柠檬酸钠1 mL，或EDTA（乙二胺四乙酸）20mg。血液注入容器后，立即与抗凝剂充分混合，防止溶血和凝固。采集的血液密封后贴上标签冷藏送检。必要时，可在每毫升血液中加入青霉素和链霉素各500～1000国际单位。抗凝血经过静置或2000～3000r/min离心10min后，其上清液为血浆。

4.2 非抗凝血制备 即不加抗凝剂，等血液凝固后析出血清，非抗凝血一般用于血清学试验。

血清分离方法：将采集的全血转入盛血试管后，于室温（20～25℃）下倾斜 45°～60°放置 2～4h，血液凝固后自然析出血清，或将血液静置0.5 h后，2000～3000r/min 低速离心 5～10min，其上清液即为血清。如离心后有轻微溶血，可挑出血凝块，将混有红细胞碎片的血清再次离心，收集血清，如血清溶血严重，应剔出样品。也可将凝固的血液倾斜放置于冰箱（4℃，约4～8 h），待大量血清析出时吸出血清，必要时3000～4000r/min离心3～5min后，吸出血清到另外的离心管中。

每份血清样品不能少于0.5 mL，样品应封口，贴上标签。

5 血样保存与送检

5.1 样品保存 3d内测定的血清样品可放置于4℃的冰箱中冷藏保存，待检时间超过3 d的样品，需-15℃以下冷冻保存。检验前，样品须达到室温，并颠倒数次，使血液充分混匀。解冻血清不宜反复冻融，反复冻融会使血清中的脂蛋白和纤维蛋白变性，导致絮状沉淀物出现。

5.2 血样送检 分离到的血液样品最好在24 h内送检。24 h内不能送检的应冷冻。送检时要详细填写样品记录，样品要密封并加冰袋运送。