甲状腺激素干预H-ras12V转基因肝癌小鼠对肝肿瘤的影响研究

白云，巩方明，田兴松

有研究[1]发现，随着人年龄不断增长，发生肿瘤的几率也增长。甲状腺激素（THs）是具有调节机体发育、细胞增殖与分化、维持内环境稳定等多种作用的一类激素。老年人体内TH水平要明显低于年轻人，TH水平与年龄的增长呈负相关[2]。肿瘤细胞抑制TH的生物学功能有多种分子机制，Ras癌基因可以通过上调Cyclin D1或经过磷酸化维甲酸受体（RXRα）抑制THs/TR信号通路。有学者[3]提出，TH对肝脏、肺和结直肠类肿瘤发生有抑制作用，但尚无定论，TH的作用机制亦不明确。本研究在H-ras12V转基因肝癌小鼠探讨了TH水平对小鼠肿瘤的影响。

1 材料与方法

1.1 动物、药品和设备 3月龄SPF级雄性H-ras12V转基因肝癌小鼠45只【辽宁实验动物中心，生产许可证号为SCXK（辽）2013-0004，饲养于我院第一附属医院动物实验中心】，体质量为24～32 g。宇宙甲状腺素片由上海长城药业有限公司生产（国药准字H31022151），丙硫氧嘧啶片由上海信谊药厂有限公司生产（国药准字H19983194）。北京亚欧德鹏科技有限公司生产的DP-3401型游标卡尺，上海巴玖实业有限公司生产的SAF-680T型酶标仪，美国贝克曼库尔特有限公司生产的Avanti JXN-30/26智能型高效离心机。

1.2 肝癌模型小鼠的制备 取小鼠45只，正常饲养1 w，随机分为甲状腺机能亢进症组、甲状腺机能减退症组和对照组，每组15只，分别给予甲状腺素片28.57 mg.kg-1·d-1、丙硫氧嘧啶片171.4 mg.kg-1·d-1和蒸馏水灌胃。待小鼠达到7 m后，称量体质量。经眼球取血，静置于离心管10～15 min，3000 r/m离心15 min，保留血清。取肝脏，称质量。将肝组织剪切成约1 cm3大小组织块，置于冷冻管中，-80℃保存[4]。

1.3 血清和组织TH检测 采用ELISA法检测血清T3和T4（北京百奥莱博科技有限公司）和游离组织T3和T4（上海钰博生物科技有限公司）[5]。

1.4 小鼠肿瘤生长情况检测 将小鼠肝脏摘取后，使用游标卡尺测量肉眼所见的肿瘤直径，记录不同直径的肿瘤个数。

1.5 统计学方法 应用SPSS 20.0软件进行分析，对符合正态分布的计量资料以（±s）表示，采用独立样本的t检验。以P＜0.05为存在统计学差异。

2 结果

2.1 各组小鼠TH水平比较 甲状腺机能亢进症（A）组小鼠血清T3和T4水平显著高于甲状腺机能减退症组（P＜0.05）；甲状腺机能亢进症（B）组小鼠游离T3和T4水平显著高于其他两组小鼠，甲状腺机能减退症组小鼠游离组织T3水平显著低于对照组（P＜0.05，表1）。

表1 各组小鼠血清和游离TH水平（±s）比较

表1 各组小鼠血清和游离TH水平（±s）比较

与对照组比，①P＜0.05；与甲状腺机能亢进症组比，②P＜0.05

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2.2 各组小鼠肝肿瘤生长情况比较 见表2。

表2 各组小鼠肝肿瘤生长情况（±s）比较

表2 各组小鼠肝肿瘤生长情况（±s）比较

与对照组比，①P＜0.05；与甲状腺机能亢进症组比，②P＜0.05

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3 讨论

有学者发现，在经Ras癌基因诱导的肝肿瘤动物，其肝癌病灶细胞RXRα的磷酸化水平显著增高[6，7]，THS/TR通路信号传导被抑制[8-10]。临床上发现，肝癌患者常会有正常甲状腺机能的高甲状腺素血症发生[11-13]。动物实验[14-17]发现，转基因肝癌小鼠血清THs显著升高。因此，推测体内TH水平与肿瘤细胞的繁殖、分化存在关联[18，19]。

本研究发现甲状腺机能亢进症组小鼠血清和游离组织TH水平明显高于对照组或甲状腺机能减退症组，而肝组织肿瘤个数和肝/体质量比亦高于其他两组，说明甲状腺机能亢进症组小鼠甲状腺功能增强，对肿瘤生长起了抑制作用。张敏[20]等也曾在Ras基因诱导的肝肿瘤小鼠研究发现，甲状腺素可有效抑制肝脏肿瘤的生长。

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