肝细胞癌组织miRNA-155水平变化及其对预后的影响

2018-03-13 06:44左芳朱中梁汪宏良
实用肝脏病杂志 2018年1期
关键词:高水平肝细胞肝癌

左芳,朱中梁,汪宏良

本文通过检测HCC癌组织miRNA-155水平,分析了不同miRNA-155水平患者的预后情况,以探讨检测肝癌组织miRNA-155对HCC患者预后的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2013年1月~2014年5月我院收治的50例HCC患者,男28例,女22例;年龄为38~78岁,平均年龄为(57.92±8.16岁)。符合2005年世界卫生组织(WHO)发布的HCC诊断标准[1]。对手术切除的肝癌组织进行病理学检查,根据Edmondson分级标准[2],Ⅰ级10例,Ⅱ级15例,Ⅲ级12例,Ⅳ级13例。另取50例正常肝组织(肝血管瘤32例,肝破裂18例)作为对照组,男30例,女20例;年龄42~75岁,平均年龄(56.28±8.16岁)。

1.2 肝组织miRNA-155检测 采用荧光定量PCR法检测。Trizol试剂(广州国奥生物技术有限公司);qRT-PCR试剂盒miScript system(美国 Qiagen公司);ABI7700定量PCR仪(美国PE公司);氯仿、异丙醇、无水乙醇等未特殊说明的试剂均为Sigma公司产品。PCR方法[3]:采用液氮碾磨所需肝组织标本,采用Trizol试剂一步法提取组织总RNA。使用紫外分光光度计检测总 RNA的A260/A280比值在1.8~2.0。依据hsa-miR-155 miScript system试剂盒说明书进行RT-PCR实验。逆转录体系为20μl,按下列条件进行逆转录:37℃ 60 min,95℃ 5 min。PCR反应体系也为20μl,按以下条件在ABI7700定量PCR仪上进行反应:起始激活 95℃15 min;94℃15 s,55℃30 s,70℃30 s,共 30 个循环。RNA U6作为内参,反应条件同上。实验重复3次,所得数据运用RQ=2-△△Ct方法进行分析。

1.3 统计方法 应用SPSS 18.0软件处理,计量资料以(±s)表示,采用 t或方差检验,计数资料采用 x2检验,绘制ROC曲线确定miR-155对HCC预后的预测价值的最佳截断点,采用 Kaplan-Meier法进行生存分析,采用 Cox回归行多因素分析。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同分级HCC和正常肝组织miRNA-155水平比较 癌组织miRNA-155水平明显高于正常肝组织,且随着HCC分级的增高其miRNA-155水平也升高,组间差异均具有统计学意义(P<0.05,图1、表1)。

2.2 ROC曲线分析 根据术后患者生存情况绘制miR-155判断HCC患者预后的ROC曲线,结果显示以miR-155=2.5为截断点,其AUC为0.919,判断患者生存的敏感性、特异性、阴性预测值和阳性预测值分别为91.3%、93.5%、85.3%和88.6%(图2)。

2.3 肝细胞癌患者生存情况 对50例HCC患者随访2年,平均生存时间为20.6±4.6个月,2年生存12例(24.0%);17例肝组织miRNA-155在2.5以上者平均生存期为9.4±2.8个月,2年仅生存3例(10.71%),则表明肝组织miRNA-155高水平患者其生存率明显低于miRNA-155低水平患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。

图1 肝组织miR-155水平

泳道1:对照组;2:HCCⅠ级;3:HCCⅡ级;4:HCCⅢ级;5:HCCⅣ级

表1 不同分级HCC组织与正常肝miRNA-155水平(±s)比较

表1 不同分级HCC组织与正常肝miRNA-155水平(±s)比较

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与对照组比,①P<0.05;与 HCC Ⅰ级比较,②P<0.05;与HCC Ⅱ级比较,③P<0.05;与HCC Ⅲ级比较,④P<0.05

2.4 影响HCC患者预后的单因素分析 通过单因素Cox回归分析,发现不同HCC分级、不同肿瘤大小、肿瘤是否转移、是否静脉侵犯、不同肿瘤分化程度和高低肝组织miRNA-155水平患者间生存期均存在统计学差异(P<0.05,表2)。

2.5 影响HCC患者预后的多因素分析 通过多因素Cox回归分析,发现肿瘤体积大、肿瘤转移、静脉侵犯、肿瘤高分化和癌组织miRNA-155高水平为影响HCC患者预后的独立危险因素(P<0.05,表3)。

图2 miR-155对HCC预后预测的ROC曲线

表2 影响HCC患者预后的单因素分析

表3 影响HCC患者预后的多因素分析

3 讨论

本文通过多因素Cox回归分析发现肿瘤直径>5 cm、发生肿瘤转移、静脉侵犯、肿瘤细胞呈高分化和肿瘤组织miRNA-155高水平均为影响HCC患者预后的独立危险因素。

miRNA-155是一种典型的多功能基因,属于一种潜在的致癌或抑癌基因,其下游基因可介导如炎症、免疫造血细胞的分化及心血管疾病等多种病理生理过程[4-8]。既往研究表明,乳腺癌组织miRNA-155水平与正常乳腺组织存在明显差异,结果提示miRNA-155水平与肿瘤的病理特征和生物学特征相互联系[9]。也有研究者证实miRNA-155在胰腺癌组织和胰腺癌细胞株高水平存在,随后还发现其可作为诊断早期胰腺癌的重要标志物之一[10-12]。除此之外,也有资料报道[13-17],在肾透明细胞癌患者的癌组织及头颈部和甲状腺癌组织miRNA-155也较正常组织明显升高。由此看来,miRNA-155与肿瘤的发展有着密不可分的关系,并可在一定程度上促进肿瘤的发展。但是,在目前研究领域,关于miRNA-155在HCC组织中的水平及其与HCC患者预后的关系尚未完全清楚,也缺乏足够大量的研究报道[18]。本研究结果提示正常肝组织miRNA-155水平明显低于肝癌组织,与既往研究一致[19]。在肺癌研究中,发现miRNA-155与肺鳞癌患者预后密切相关。随着miRNA-155水平的升高,肺腺癌A549细胞和非鳞癌H157细胞增殖加快,表明miRNA-155可促进肺癌的发展[20]。本研究采用ROC曲线分析发现,当miR-155相对水平在2.5时对HCC患者预后具有较高的预测价值。本研究显示,miRNA-155较低水平(<2.5)的 HCC患者其术后2 a生存率明显高于miRNA-155高水平(<2.5)的HCC患者,且通过多因素Cox回归分析得知miRNA-155高水平属于HCC患者预后差的独立危险因素之一。我们的研究发现miRNA-155在术前高水平患者术后生存率显著低于术前低水平者。由此,我们推测miRNA-155对HCC患者的预后有一定的意义,其高水平可促进HCC的发展。我们还发现,肿瘤大小、肿瘤分化和肿瘤转移等均是影响患者术后生存的独立危险因素,我们认为,这些因素对miR-155的表达可能有影响,可以进一步作深入研究。

综上所述,肝癌组织miRNA-155水平明显高于正常肝组织,且高水平的miRNA-155为HCC患者预后差的独立危险因素。肝癌组织miRNA-155水平高低可评估HCC患者的预后,是否可考虑将其作为评估HCC患者预后的独立预测因子,尚需进一步研究。

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