高效液相法快速检测降血脂类中成药中非法添加化学成分

汤珺+龙玉琼

[摘要]目的 建立快速筛查降血脂类中成药中非法添加普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀的分析方法。方法 采用十八烷基硅烷键合硅胶柱（Anglient ZORBAX SB-C18，5 μm，4.6 mm×150 mm），甲醇0.03 mol/L、磷酸二氢钾（磷酸调pH至3.5）（75∶25）为流动相，流速1.0 ml/min，柱温30℃，检测波长238 nm。结果 普伐他汀钠的线性方程为Y=2933.12927X+153.32226（r=0.99971），阿托伐他汀钙的线性方程为Y=2382.54405X-38.16470（r=0.99998），洛伐他汀的的线性方程为Y=2166.75981X+84.99321（r=0.99993），辛伐他汀的线性方程为Y=1784.69863X+147.95365 （r=0.99981），峰面积呈良好的线性关系；普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀平均回收率（n=6）分别为103.3%（RSD=0.9%）、108.3%（RSD=0.7%）、99.6%（RSD=0.6%）、95.6%（RSD=0.7%）。结论 经方法学验证，此方法快速、简便，可以作为分析降血脂类中成药中非法添加的快速有效筛查方法。

[关键词]高效液相法；降血脂类中成药；非法添加；化学成分；普伐他汀钠；阿托伐他汀钙；洛伐他汀；辛伐他汀

[中图分类号] R951 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）1（c）-0004-03

High performance liquid chromatography method for rapid detection of cholesterol-lowering type of proprietary Chinese medicine illegally added chemicals

TANG Jun1 LONG Yu-qiong2

1.Bioinstrumentation Laboratory，Ji′an Center for Food and Drug Control in Jiangxi Province，Ji′an 343000，China；2.Chemical Laboratory，Ji′an Center for Food and Drug Control in Jiangxi Province，Ji′an 343000，China

[Abstract]Objective To establish a quick，sensitive method for analysis of Prefvastatin Sodium，Atorvastatin Calcium，Lovastatin and Simvastatin illegally added into cholesterol-lowering type of proprietary Chinese medicine.Methods Anglient ZORBAX SB-C18 （5 μm，4.6 mm×150 mm） column was used，mobile phase consisted of methanol and 0.03 mol/L phosphate （PH to 3.5） （25：75）with flow rate 1.0 ml/min and column temperature at 30℃.The detection wavelength was set at 238 nm.Results The linear equation of Prefvastatin Sodium was Y=2933.12927X+153.32226（r=0.99971），the linear equation of Atorvastatin Calcium was Y=2382.54405X-38.16470（r=0.99998），the linear equation of Lovastatin was Y=2166.75981X+84.99321（r=0.99993），the linear equation of Simvastatin was Y=1784.69863X+147.95365（r=0.99981）.The average recoveries（n=6） of Prefvastatin Sodium，Atorvastatin Calcium，Lovastatin and Simvastatin were 103.3%（RSD=0.9%），108.3%（RSD=0.7%），99.6%（RSD=0.6%），95.6%（RSD=0.7%）.Conclusion After validation，the method was proved to be quick and simple，which can be used to detect illegal additive in cholesterol-lowering type of proprietary Chinese medicine.

[Key words]High performance liquid chromatography；Cholesterol-lowering type of proprietary Chinese medicine；Illegally added；Chemicals；Prefvastatin Sodium；Atorvastatin Calcium；Lovastatin；Simvastatin

中成藥的研发和使用是我国中医药产业的一大特点，降血脂类中成药在临床上使用较为广泛，在三高人群中用药较为普遍。近年来，由于利益的驱使，中成药中非法添加化学物质的情况时有发生[1-8]，严重危害了用药患者的身体健康，也影响了中医药产业的健康发展。本文所用方法可从降血脂类中成药中快速检验出普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀4种常见的降血脂用化学成分，方法简便、有效，可满足此类药物的快检筛查，为药品检验机构和药品监管部门提供技术支持，现报道如下。endprint

1仪器与试药

Agilent 1260 InfinityⅡ高效液相色谱仪（安捷伦公司）；BP211D电子分析天平（赛多利斯公司）；AR2140电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；STARTER 2100 PH计（奥豪斯仪器上海有限公司）；KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；色谱柱：Anglient ZORBAX SB-C18，5 μm，4.6 mm×150 mm；DAD检测器；普伐他汀钠对照品（中国食品药品检定研究院，批号100689-200603，纯度96.7%）、阿托伐他汀钙对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100590-201001，纯度95.0%）、洛伐他汀对照品（中国食品药品检定研究院，批号100600-201003，纯度99.4%）、辛伐他汀对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100601-201003，纯度99.0%）。甲醇为色谱纯；磷酸二氢钠为分析纯；降血脂类中成药样品共4批，依次为血脂康胶囊、通脉降脂片、血脂宁胶囊、血脂宁丸，均由当地药店购买。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Anglient ZORBAX SB-C18，5 μm，4.6 mm×150 mm；柱温：30℃；检测器：DAD检测器；流速：1.0 ml/min；进样量：1～5 μl；流动相∶甲醇-0.03 mol/L、磷酸二氢钾（磷酸调pH至3.5）=75∶25；检测波长：238 nm。

2.2供试品溶液的制备

取样品研细，称取一次最大服用剂量，置25 ml离心管中，加入甲醇15 ml，精密称定，超声处理15 min，放冷，用甲醇补足重量，振摇使混匀放置取上清液滤过，取续滤液，即得。

2.3混合对照品溶液的制备

精密称取普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀对照品各100 mg，置同一100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液。

2.4阴性对照溶液的制备

取处方中不含上述4种化学成分的降血脂类中成药，按2.2的方法制备，即得。

2.5阳性对照溶液的制备

精密称取普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀4种对照品，加入处方中不含上述4种化学成分的降血脂类中成药中，混匀，按“2.2”的方法制备成每毫升中含上述4种对照品各1 mg的溶液，即得。

2.6方法专属性试验

通过对混合对照品溶液、阴性对照溶液、阳性对照溶液按“2.1”项下色谱条件分别进行检测，结果表明混合对照品分离度好，阴性对照溶液无干扰，阳性对照溶液能达到分离（图1、2、3）。

2.7 4种成分的线性范围、r值及回归方程

分别精密称取普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀4种对照品，加甲醇稀释成一系列标准溶液，以对照品浓度为横坐标X，各自对应的峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线（表1）。

2.8精密度试验

精密吸取2.3中混合对照液各1 μl，按“2.1”项下色谱条件和方法，注入液相色谱仪，连续进样6次，普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀峰面积的RSD分别为0.5%、0.8%、0.4%、0.5%。

2.9回收率试验

采用加样回收试验，精密称取同一批号阴性样品6份，分别精密加入一定量的混合对照品溶液，按照“2.2”项下方法制备成供试品溶液，按上述方法进行测定，结果表明本方法回收率良好（表2）。

表2 4种成分的回收率及其RSD（%）

2.10稳定性试验

取“2.3”项下混合对照液，按“2.1”项下色谱条件和方法，分别于0、2、4、8、12 h进样测定，记录色谱图，测得上述4种化学成分的峰面积在12 h内无明显变化，RSD均<1.0%。

2.11样品的测定

取市售4批降血脂类中成药制剂，分别按“2.2”项下方法提取各样品供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件及方法测定，结果血脂康胶囊中检出洛伐他汀（图4），通脉降脂片、血脂宁胶囊、血脂宁丸3批供试品色谱图中均未呈现与对照品保留时间一致的色谱峰，即该3批样品均未非法添加上述4种化学成分。

3讨论

3.1高效液相色谱法检测波长的选择

參照《中国药典》2015年版二部、相关国家药品标准以及有关文献报道[9-12]，普伐他汀钠、洛伐他汀、辛伐他汀的高效液相法检测波长为238 nm，阿托伐他汀钙的检测波长为244 nm。本试验中采用DAD检测器，同时选取238 nm和244 nm两个参比波长进行比较，通过光谱图对比，最后选定检测波长为238 nm。

3.2提取溶剂的选择

上述4种化学成分在甲醇中均易溶解，故本试验采用甲醇超声溶解的提取方法，超声时间>15 min后，4种成分的含量无明显差异，故确定超声时间为15 min。

3.3检测方法的验证

血脂康胶囊的主要成分为红曲，而红曲中含有洛伐他汀早有报道[13-15]，通过本试验在血脂康胶囊中检出洛伐他汀也验证了这一点，从而进一步验证本方法的可行有效。

3.4实验中出现的问题及讨论

实验中发现流动相在双泵条件下高效液相色谱仪压力不稳定，考虑可能是甲醇与酸性溶液——磷酸二氢钾溶液在混合过程中产生较多气泡所致，故本试验最终采取混合流动相单泵条件下进行检测，压力稳定，基线平稳。

3.5本方法的实用性

目前，高效液相色谱仪在各地市、县、区食品药品检验机构已经普及使用，本试验采用高效液相法，在一个色谱条件下，可从中成药中一次性检测普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀4种较为常见的降血脂类化学成分，方法简便快捷，可以满足此类药物的快检筛查。endprint

3.6本方法的适用范围

本研究主要针对中成药中非法添加普伐他汀钠、阿托伐他汀钙、洛伐他汀、辛伐他汀四种化学成分，同理，保健品中非法添加上述4种化学成分，亦可采用本方法进行检测分析。

[参考文献]

[1]符江，荆文光，章军，等.中药中非法添加问题研究现状与分析[J].中草药，2014，45（3）：437-442.

[2]张小龙，王昆，吴先富，等.中药及保健食品中非法添加状况分析[J].中国药师，2014，17（10）：1749-1753.

[3]张伏，张璐.2011 年与 2012 年辽宁省非法添加检验结果对比分析[J].中国药业，2014，23（2） ： 6-7.

[4]颜杰，刘志强，程振田.中成药及中药保健食品中非法添加化学药品现状与对策[J].中国药学杂志，2007，42（9）：716.

[5]万国勇，方翰林.对中成药内非法添加西药成分的几点思考[J].中国药师，2006，9（8）： 771.

[6]董永成，杜士明，陈永顺，等.中成药及保健品非法添加化学成分的类型、危害及对策[J].时珍国医国药，2006，17（8）：1601-1602.

[7]王荭晖.中成药非法添加化学药物研究进展[J].安徽医药，2011，15（9）：1168-1170.

[8]赖天兵， 胡小红， 刘晓革.减肥类保健食品违禁添加药物现状及特点[J].中国食品卫生杂志， 2007，19（4）：336-337.

[9]国家食品药品监督管理局.中国药典（二部）[M].北京：中华医药科技出版社，2015：520，850，1429.

[10]国家药典委员会.国家药品标准：新药转正标准（第36册）[M].北京：化学工业出版社，2004：198-199.

[11]果秋婷，张小飞. HPLC 法同时测定复方阿托伐他汀钙苯磺酸氨氯地平片中两种药物的含量[J].中国药师，2016， 19（3）：610-613.

[12]馬小涛，何华，刘铁兵.RP-HPLC测定阿托伐他汀钙分散片的含量[J].中国新药杂志，2011，20（4）：382-384.

[13]缑三虎，刘杰，何苗，等.红曲中洛伐他汀的分离鉴定和稳定性评价[J].中成药，2016，38（5）：1184-1187.

[14]江利香，葛锋，刘畅.红曲洛伐他汀的高产策略[J].中草药，2011，42（7）：1446-1452.

[15]龚菁，饶毅，付鹏，等.红曲中洛伐他汀提取工艺的响应面优化[J].时珍国医国药，2015，26（1）：82-85.

（收稿日期：2017-08-15 本文编辑：闫 佩）endprint