一种新的对1-H-1,2,4-三氮唑的高效液相色谱定量分析方法

(四川省化学工业研究设计院，四川成都，610041)

1-H-1,2,4-三氮唑是一种含氮杂环化合物，作为染料、医药、农药工业的重要中间体，在多种化工合成工艺中具有重要作用。三氮唑的常用分析方法有滴定法、气谱分析法和液谱分析法。液谱法相较于前两种方法具有易于操作和重现性好等特点。但由于三氮唑极性较强，极易溶于水，在传统反相色谱中，保留时间太短，当样品中有其他强极性杂质时，就给定量分析带来很大难度。

亲水作用色谱(HILIC)，是上世纪九十年代开始发展的一种色谱技术，用来改善在反相色谱中强极性和亲水性物质保留时间较短、分离能力较差的问题。该技术利用强极性的固定相和高比例有机相的流动相，来达到此目的。因此，针对三氮唑分析工作中遇到的问题，我们尝试采用HILIC色谱柱来解决。

1 实验部分

1.1 仪器

高效液相色谱仪：Agilent 1100，紫外检测器；色谱柱：博纳艾杰尔 Venusil HILIC, 4.6×250mm,5μm不锈钢柱；紫外分光光度计：岛津UV-1800；天平：Mettler Toledo AL204-IC。

1.2 试剂

水：二次蒸馏水；乙腈：色谱纯；三氮唑标品：99%；试样：三氮唑(本单位)。

1.3 分析条件

流动相：乙腈:水 = 90:10 (V/V)；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：196nm；进样体积：20μL；保留时间：5.0min左右。

1.4 测定步骤

1.4.1 吸收波长的选择

用UV-1800紫外分光光度计扫描三氮唑标准品溶液，扫描范围在190-290nm。

1.4.2 标准溶液的配制

准确称取三氮唑标样一定量(精确至0.0001g)于50mL容量瓶中，用流动相定容，混合均匀后作为标准溶液备用。

1.4.3 试样溶液的配制

准确称取三氮唑样品一定量(精确至0.0001g)于50mL容量瓶中，用流动相定容，混合均匀后作为试样溶液备用。

1.4.4 测定

在前述条件下，待基线稳定后，连续注入标样溶液，待相邻两针峰面积变化<1.0%，开始按标样、试样、试样、标样的顺序进样。

以下为三氮唑标样及样品的液谱图(图1、2)。

图1 三氮唑标样

图2 三氮唑样品

1.4.5 计算

将测得的两针试样以及前后两针标样中三氮唑峰面积分别平均，试样中三氮唑的质量分数X(%)按下式计算：

X=A2·m1·PA1·m2×100%

式中：A1：标样三氮唑峰面积平均值；A2：样品三氮唑峰面积平均值；m1：所称取的标样三氮唑质量；m2：所称取的样品三氮唑质量；P：标样中的三氮唑质量分数。

2 结果与讨论

2.1 吸收波长的确定

通过紫外扫描，发现在波长为196nm时，三氮唑有最强吸收，且可能含有的杂质甲酰胺在此波长下也有较强吸收，因此选定196nm为检测波长。

2.2 流动相的确定

为确保三氮唑与杂质显著分离，选择不同比例的乙腈+水作为流动相进行分离。实验发现，当流动相为乙腈:水=90:10(V/V)时，分离效果理想，基线平稳，因此选择该比例为最佳流动相。

2.3 分析方法的线性相关性

称取不同质量的三氮唑标准品于6个50mL容量瓶中，用流动相定容，混匀。在前定条件下分别进行测定，以三氮唑进样质量为横坐标，以三氮唑峰面积为纵坐标，绘制线性关系曲线如图3，线性方程：y=343426x+1112.2，决定系数为r2=0.9991，相关系数为r=0.9995。

图3 三氮唑线性关系曲线图

2.4 方法精密度

分5次取同一批样品称量，采用前定条件进行分析，实验结果如表1。该方法测定三氮唑的标准偏差为0.22，变异系数为0.25%。证明该方法精密度良好。

表1 三氮唑精密度实验结果

2.5 方法准确度

在已测得质量分数的三氮唑试样中，加入不同量的三氮唑标准品，配成5个已知样，在前定液谱条件下，定量分析、计算结果如表2，测得三氮唑平均回收率为97.57%，说明该方法准确度良好。

3 结论

如上所述，该方法测定三氮唑质量分数，简便、快速、准确，重现性、分离效果满足检验要求，相比原有反相液谱方法，更适用于企业质量检验。

表2 三氮唑准确度实验结果