提取时间、次数、溶剂浓度对槲蕨超声波黄酮含量提取的影响

韩风波 宫敬利 毕博

【摘  要】 本试验选取提取时间、提取次数、提取溶剂3个因素进行槲蕨超声波黄酮含量提取试验研究，结果表明：提取时间20min、提取次数1次、提取溶剂浓度为65%乙醇时，槲蕨超声波提取黄酮含量最高，希望能为槲蕨整个黄酮提取工艺奠定基础。

【关键词】 黄酮;槲蕨;超声波提取

Effect of extraction time， times and solvent concentration on extraction of flavonoids from quercetin by ultrasonic wave

Hang Fengbo  Gong Jingli  Bi Bo

[Abstract] The test selection of extraction time， extraction times and three factors of extraction solvent for it fern， experimental study on ultrasound extraction flavonoids content results showed that 20 min extraction time， extraction times 1 time， concentration of extraction solvent was 65% ethanol， it fern ultrasonic extracting flavonoids content is the highest， hope it can fern the flavonoids extraction technology to lay the foundation.

[Keywords] flavonoids; the antioxidant ferns; ultrasonic extraction

槲蕨，為骨碎补科中的一种附生植物，拉丁学名：Drynaria roosii Nakaike，又称骨碎补、毛姜、猴姜、申姜、爬岩姜、石岩姜等。该植物主产于辽宁（大连）、山东（崂山、昆箭山、牟平、招远、威海）、江苏（海州）及台湾等地，其活性成分为以柚皮苷为主的二氢黄酮类化合物。槲蕨是一种重要的药用植物，功能主治补肾、活血、止血，治肾虚久泻及腰痛，风湿痹痛，齿痛，耳鸣，跌打闪挫、骨伤，阑尾炎，也可治斑秃和鸡眼等[1]。本试验以槲蕨黄酮含量为指标，通过研究超声提取时间、提取次数、提取溶剂浓度对槲蕨黄酮含量的影响，以优化槲蕨中黄酮提取最佳的提取工艺，为生产提供理论依据。

1  材料与方法

1.1  试验材料

槲蕨采集于吉林市左家自然保护区;无水乙醇（分析纯）、蒸馏水、5%亚硝酸钠、10%硝酸铝、4%氢氧化钠、芦丁标准品等药品由中国药品生物制品检定所提供;试验仪器有：752 紫外-可见分光光度计（上海奥普勒仪器有限公司）、JY2002电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）、F80型高速粉碎机（金坛市金城国胜实验仪器厂）、电子分析天平（CP114 奥豪斯仪器有限公司上海）、THC-5B型数控超声提取机（济宁天华超声电子仪器有限公司），均由吉林农业科技学院中药实验室提供。

1.2  试验方法

1.2.1标准曲线制备  取芦丁20.00mg，定容到100mL容量瓶中，配置0.2mg/mL的标准溶液，取10mL容量瓶6支，依次称取0、1、2、3、4、5mL标准液，5、4、3、2、1、0mL 50%乙醇加入，依照黄酮含量，在490nm测定吸收度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线[2-3]。

1.2.2提取时间对黄铜含量的影响  精密称取槲蕨粉末1.00g，提取溶剂浓度为65%，料液比分别为1：30，提取温度40℃，超声功率400W，提取1次，分别超声提取5、10、20、30、40、50min，3次重复，制备成供试品溶液，测定其吸光度，考察超声时间对槲蕨黄酮含量的影响，确定最佳的超声时间[4]。

1.2.3提取次数对黄酮含量的影响  精密称取槲蕨粉末1.00g，提取溶剂浓度、料液比、提取温度、超声功率按照1.2.2设置，提取时间20min，分别提取1次、2次、3次、4次，3次重复，制备成供试品溶液，测定其吸光度，考察超声次数对槲蕨黄酮含量的影响，确定最佳的提取次数[5]。

1.2.4提取溶剂对黄酮含量的影响  精密称取槲蕨粉末1.00g，提取溶剂浓度、料液比、提取温度、超声功率、提取时间按照1.2.2设置，提取1次，提取溶剂浓度设45%、55%、65%、75%、85%、100%的乙醇共6个水平，3次重复，制备成供试品溶液，测定其吸光度，考察提取溶剂浓度对槲蕨黄酮含量的影响，确定最佳的提取溶剂浓度。

2  结果与分析

2.1  芦丁标准曲线的制备

由标准曲线数据计算出一元线性回归方程为：y =10.89x+0.0459，相关系数R2=0.9998，表明对照品槲蕨黄酮含量在21～105ug/mL范围内线性关系良好。见图1。

2.2  提取时间对黄酮含量的影响

见图2。

图2表明：提取时间比对黄酮含量有一定的影响，提取时间20min以前，随着提取时间增加黄酮含量呈递增趋势，但提取时间达到20min以后，黄酮含量呈递减趋势，为了确定差异显著性，进行方差分析，结果见表1。

2.3  提取次数对黄酮含量的影响

见图3。

图3表明：提取次数对黄酮含量有一定的影响，随着提取次数增加黄酮含量呈递增趋势，但递增趋势趋于缓和，为了确定差异显著性，进行方差分析，结果见表2。

2.4  提取溶剂浓度对黄酮含量影响

见图4。

图4表明：提取溶剂浓度比对黄酮含量有一定的影响，随着提取溶剂浓度增加黄酮含量呈递增趋势，但提取溶剂浓度达到65%以后，呈递减趋势，为了确定差异显著性，进行方差分析，结果见表3。

3  结论与讨论

本试验选取提取时间、提取次数、提取溶剂3个单因素考查槲蕨黄酮成分超声提取工艺，并进行方差分析，筛选出3个单因素各自的最佳水平。结果表明：3个因素中，溶剂浓度对黄酮提取影响存在显著性差异，结合3个因素不同水平综合平均值比较，确定最佳生产方案是提取时间20min、提取次数1次，提取溶剂浓度为65%乙醇。由于时间关系，该试验仅针对3种因素进行了比较，结果可作为正交试验的一个借鉴，希望能为槲蕨黄酮制备成其它的剂型奠定基础。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].2015年         版.北京：中国医药科技出版社，2015：78.

[2] 刘塔斯.槲蕨[M].北京：中国中医药出版社，2014：82.

[3] 周 晔，高 翔.槲蕨的研究与开发利用[J].中国现代中药，             2010，04.33-37.

[4] 晏春耕，曹瑞芳.槲蕨的研究进展与开发利用[J].中国现代        中药，2013，04：33-37.

[5] 路洪顺，刘鑫军，刘建敏.槲蕨的开发利用价值与栽培技术        [J].中药林副产，2012，08：    16-17.