Notch和Wnt在人子宫内膜癌组织中的表达与临床意义

王 静，李 攀，程一苇

（1. 烟台海港医院妇产科，山东 烟台 264000；2. 滨州医学院烟台附属医院妇产科，山东 烟台 264000）

子宫内膜癌(endometrial carcinoma，EC)是女性常见的恶性肿瘤之一，发病率疾病，约有20%～30%的女性生殖恶性肿瘤为该肿瘤[1]。本文研究Notch和Wnt信号和其下游信号分子Hesl和Axin2在人子宫内膜癌中的表达及其相关性[2,3]。具体情况总结如下。

1 材料与方法

1.1 材料

本实验选取来烟台毓璜顶医院以及烟台海港医院妇产科进行手术取材的良、恶性子宫内膜37例实验标本（2009年6月～2010年6月），选取的所有标本均需要采取福尔马林（10%）进行固定，同时采取石蜡进行包埋，本次实验选取的所有患者在进行手术之前均未进行激素治疗以及放化疗等方法治疗，且所有患者均需要采取常规病理确诊，年龄为33～64岁（无显著统计学差异）。实验组选取15例子宫内膜癌标本，其组织类型为子宫内膜样腺癌，手术病理分期标准参考世界卫生组织(WHO)/国际妇产科联盟(F1GO)手术病理分期标准情况，在这15例标本中，I期的标本有8例，II期的标本有4例，III期的标本有3例；高分化(G1)的标本有5例，中分化(G2) 的标本有7例，低分化(G3)的标本有3例；对照组选取10例同期因子宫良性疾病切除子宫的正常子宫内膜标本，其患者的年龄30～51岁，同时选取12例不典型增生子宫内膜标本，其患者的年龄25～55岁。选取的所有标本均经过病理学进行确诊，且均具有较为完全的资料。

1.2 试验方法

1.2.1 免疫组织化学染色

对于本次实验选取的子宫内膜标本（37例），每例蜡块标本需要连续切片4张，注意要对其进行分别染色，前者采取HE染色，后者采取免疫组化染色。采用免疫组化SP法,要分别做阴性与阳性做对照。

阳性蛋白表达判断标准:对于蛋白的阳性染色需要采取定位处理，定位在其细胞质/细胞核等处。随后需要采取IMAGE-PRO PLUS图像分析系统对其进行相应地处理，主要是测量子宫内膜阳性细胞光密度值（OD）。

1.2.2 RT-PCR

总RNA提取：首先需要选取一定量的组织标本（50～100mg），随后向标本中添加1mlTRIzol试剂(GibocoBRL)，对总DNA的提取需要按照说明书进行操作。

RT-PCR检测信号分子的表达：Gen Bank是Hedgehog信号通路相关基因序列的来源，且该序列(表1)是由赛百胜公司进行合成的。对于PCR产物10μl需要采取1.5%琼脂糖凝胶电泳处理。

2 结 果

2.1 子宫内膜样腺癌癌变过程中notch和wnt蛋白的表达

2.1.1 子宫内膜组织notch1的表达

在息肉的腺体上皮细胞低表达notch-1，基质和血管也不表达notch-1。相比而言，在增生内膜腺体组上notch-1表达增加，对其进行中等染色，其基质往往并不表达，而部分内皮细胞上低水平往往表达为notch-1。而癌组上，notch-1不在腺体中的表达十分弱，而在基质中往往表达较强。从增生组到癌组，其notch-1核染色会出现逐步的增加与提升。

2.1.2 子宫内膜组织wnt的表达

经过调查结果显示，在正常子宫内膜组、增生组和癌组中Wnt均表达，且呈现了显著的上升趋势，即增生组和癌组的Wnt表达情况显著高于正常子宫内膜组。

2.2 子宫内膜组织中HES-1和Axin-2的表达

RT-PCR扩增及电泳等处理子宫内膜组织后，会在DNA标准600bp的周围部分显示出HES1条带，且在DNA标准500bp周围部分显示出Axin2清晰条带（图1）。相应的基因在增殖期子宫内膜、良性子宫内膜增生及子宫内膜样腺癌组织均有所表达。

图1 子宫内膜样腺癌癌变过程中hes-1和Axin2的表达（M1，2正常组织；M3,4增生组织；M5,6,7癌；M8癌旁组织）

3 讨 论

3.1 Notch和HES1

Notch是一个膜受体，属于生长因子家族，结构和功能比较保守。在哺乳动物家族中含有四种成分（N1-N4）。研究证实，Notch受体和胚子在细胞分化、增殖和凋亡过程中具有重要作用[4,5]。

我们研究了关于不同时期子宫内膜的Notch-1的表达等相关情况，主要是为了研究在人体的子宫内膜内调控细胞命运的过程。研究结果显示，在正常的子宫内膜中，Notch表达能力十分弱，而在分泌期的表达能力比其他时期强，bHLH样的常见的转录因子为Hes1，该转录因子可以调节细胞增殖、分化等相关的基因的表达。许多研究显示[6]，多种实体肿瘤的发生与Notch1受体的异常表达有着密切的关系，例如结肠癌、宫颈癌、胰腺癌以及皮肤癌等[13,14]。

3.2 Wnt和Axin2

控制胚胎生长发育的信号传导的一条重要途径便是Wnt信号通路，该通道具有多方面的调节作用，包括细胞增殖、黏附及机体发育等方面。调控β-catenin蛋白降解的关键分子包括Axin，该分子具有保持Wnt通路的低活性状态，同时具有调节细胞的增殖和凋亡等重要作用。

本实验结果发现，Notch、Wnt和HES1、Axin2四种信号都会具有一定程度的表达，且其效应分子也会出现一定程度的表达，这些表明两类物质均会影响子宫内膜癌的形成发展过程。但是其具体的影响，还需要进一步进行研究与分析。