用酶联免疫试剂盒检测猪肉中的β-激动剂类药物

赵敬翠

（辽宁省朝阳市建平县畜产品安全监察所，辽宁 朝阳 122400）

β-激动剂类药物，又名β-兴奋剂类药物，俗称瘦肉精，因具有吸收快的特性，可提高胴体瘦肉率，被广泛用于饲料中。人食用含有“瘦肉精”的肉或内脏，15～20min起作用且维持时间持久，会造成群体性的恶性食物中毒，严重的可致人死亡。因此，国家规定通过酶联免疫法检测猪肉中β-激动剂类药物为不得检出。

本文用酶联免疫试剂盒检测猪肉中β-激动剂类药物的含量，其原理是待测样品中的β-激动剂类药物残留与微孔包被的抗原共同竞争特异性抗体，当样品中β-激动剂类药物含量少时，更多的抗体就会与酶标板微孔上的抗原结合而被固定在酶标板上，通过酶催化底物显色反应，颜色为深蓝色；样品中β-激动剂类药物含量多时，颜色为浅蓝色。

1 实验材料

1.1 样品前处理在我县辖区内屠宰厂随机抽取代表性样品（猪肉）40批次，每个样品抽取猪肉200g，精确秤取1±0.01g均质后的样品于50mL离心管中；加入3mL 0.5%三氯乙酸高速涡动1min，4000g以上离心5min；取1mL中间层清液于新的离心管中；加40μL 0.5M 氢氧化钠溶液，涡动10s混匀，4000g以上离心5min；立即取40μL检测。

1.2 试剂盒β-激动剂类酶联免疫试剂盒（96孔）。购自北京维德维康生物技术有限公司。

1.3 试剂盒回温将试剂盒内各组份取出置于23～27℃室温下30min。

1.4 添加阳性对照根据标准曲线确定阳性对照浓度为2ppb，取浓度8.1ppb标准品247.0μL添加到1g空白样品中，成为浓度2ppb阳性对照品，计算阳性对照回收率。处理同前。

2 检测步骤

取出酶标板，每个样品都做双孔平行，记录标准品、阳性对照品和样品位置。

在96孔酶标板微孔中依次加入标准品工作液、阳性对照品、阴性对照品和其它待测样品均为40μL。添加不同样品时更换枪头，防止交叉污染。

再每孔分别加入酶标记物工作液60μL。酶标记物工作液应轻柔混匀后立即用，不能存放。

盖好盖板膜，轻轻振荡10s使之充分混匀，室温（23～27℃）避光反应30min。

揭开盖板膜，倒掉孔中液体，每个酶标板微孔中加入260μL洗涤工作液，充分洗涤4次，每次浸泡15min立即加入底物AB混合液100μL（等比例充分混合，5min内使用，液体盛装、搅拌不能使用金属物质）。

盖好盖板膜，轻轻振荡10s，充分混匀，室温（23～27℃）下避光反应15～20min。

揭开盖板膜，每孔中加入终止液50μL，轻轻振荡酶标板10s，充分混匀。

终止后5min内用酶标仪在双波长450nm、630nm下读取酶标板吸光度值，并将数值打印出来。

3 计算阳性对照回收率

利用电脑数据分析软件r-biopharm，手动录入测得的数值，软件自动对检测结果进行分析，同时绘制标准曲线并得出所有检测样品中β-激动剂类药物的含量。回收率（%）=（实测阳性对照浓度—实测阴性对照浓度）÷添加浓度（2ppb）×100%，本次检测回收率为95%，在75%～105%，说明此次检测和结果准确性高。

4 讨论

试剂盒贮存温度为2～8℃，酶标记物常温下易变性。待测样品原则上必须马上检测，如不能及时检测，要将样品冷冻保存。

加样时移液枪应垂直于板孔，防止将液体加在孔壁上部；加同种等量液体时应选用多道移液枪，可提高速度，节省实验操作时间，确保检测结果的准确度。

实验中应严格按照避光反应温度和时间，因为抗原与抗体结合的机会不均等，需要一定的时间和温度。优先与贴近孔壁的一层溶液中的抗原反应，是逐步平衡的过程。

洗板主要靠洗涤使游离的与结合的酶标记物的达到分离目的。如果洗涤次数不够、注入的洗涤液量不足或洗板间隔太久会直接影响检测的结果，甚至使实验失败。另外，洗板后要在亮光处观察微孔底部是否有气泡，气泡可用干净的枪头戳破，戳不同孔底的气泡应更换枪头。

酶联免疫法具有快速、灵敏、方便等特点，适用于大批量样品筛查。而其他检测药物残留的方法也在逐步完善并应用于县区检测中。