色谱技术在检测牛奶中激素类药物残留的应用分析

◎ 陆 斌

（江苏权正检验检测有限公司，江苏 南通 226000）

在奶牛养殖进程中，激素类药品的不科学应用，致使奶牛急速残余状况日渐加剧。大量实践调研显示，此种残余除了利用外部环境与食物链给人和动物的身体健康带来威胁外，还会破坏社会自然环境。全面提高色谱技术水平是处理这一问题的有效措施。

1 牛奶中激素类药品残余的产生与影响

现阶段，牛奶中的激素类药品残余的产生一般有下列2种状况：①奶牛在饲养进程中服用激素。②牛奶在生成之后通过人为手段添加激素。奶牛在发育过程中，服用激素能提升饲料服用速率，加大牛奶产量，高效提升养殖人员的经济创收。不管是在严禁应用激素的区域还是准许应用激素饲养的奶牛地区，经济效益是应用激素的主要原因。若人类食用了含有激素残留的牛奶，生殖器官会受到影响，甚至患乳腺癌与前列腺癌。若是发育阶段的儿童，因为其身体中雄性激素分泌较少，服用外部大量性激素会大大提高成长速度，或者导致第二特征迅速彰显[1]。

2 色谱技术在牛奶激素类药品残余检查中的优点

很多国家与区域均纷纷严禁运用有关激素型物质，并予以了明确要求。在检查牛奶中畜用激素型药品残余过程中，由于激素型药品结构相仿，理化属性和诸多内源性物质类似，其残余浓度比较贴近或者超过生理水平，因此对结果的精准性有着较高要求，而且要具备高效的试品预处置与机敏性较高的剖析设施来确保有效剖析的择选性、专一性以及精准性。因此，运用高效的检查技术来精准地监控与检测牛奶中激素型药品的残余是检查工作中的一大重点[2]。

检查技术的发展是处理这一问题的主要途径。色谱技术在奶牛激素残余检查进程中占据重要地位。色谱技术主要包括液相色谱、气相色谱和不同薄层色谱、色谱联用以及超临界流体色谱技术。奶产品的激素类药品存留检查中利用率较高的是质谱技术，气相色谱、液相色谱联用技术。其中，液相色谱与气相色谱技术的主要特征是灵活机敏性高、精准性良好、隔离速率快、择选性优，然而也拥有一些不足之处，如定性水平较差。质谱技术的扫描方式与量化剖析水平，可以有选择性地检查目标激素，针对其余无需检查的便不予以检查，此优点能高效去除杂物对检查结果精准性的干扰，从而提升了检查结果的精准性。将分离水平高的色谱技术融合在一起，彼此展现自身优点，这是质谱与色谱联用的手段，在检测牛奶激素类药品残留中运用越来越多。

3 色谱技术在牛奶激素类药品残余检查中的应用

现阶段，残留限量的激素型药物品种，依据其类型可划分成孕激素、雄激素、β受体激动剂、皮质激素、雌激素。但在牛奶中，5种激素残余浓度偏低，因此牛奶里激素类药品残余通常采用色谱剖析法与免疫分析法两种检查手段进行检测。免疫分析法是单调测量手段，只能测量少许固有的激素类药品。色谱分析法能实施多组分分析。因此就目前形势而言，色谱法备受人们青睐和认可，渐渐顶替了单一的测量手段。尤其是近年来，无论是国内专业人士，还是国外专业人士均纷纷利用液质联用、气相色谱、气质联用、液相色谱技术，针对牛奶里这5种激素型药品的检查展开了进一步探究，检查技术逐渐得以提升和改善[3]。

3.1 皮质激素

皮质激素可通过提升血糖减少血酮，来抑制奶牛的食欲，加快其抗炎与分娩。一般使用的药品包括氢化可的松、地塞米松等。我国相关人员利用串联电喷四级杆质谱在反应检测形式下测出牛奶里有12种皮质激素的残留。试品通过提炼、过滤处置的待测样品，将Water Acquity Uplctmbeh C18作为色谱柱，用CH3OH与含有0.1% CH2O2的水当作流动相展开洗脱。此方法的检出限为0.03～0.37 μg/kg，最低定量控制在0.08～1.26 μg/kg。添加水平是2.0和0.5 μg/kg时，12种糖皮质激素的加标收回率在39.4%～94.2%。我国专业人士利用质谱与液相色谱技术手段检查奶粉与牛奶中的地塞米松残留量。试品利用甲基氰提炼，得到试验样品，利用基质搭配外交曲线法完成定量。在3.0～350 ng/mL的浓度范围内维持良好线性，方法的检测限是：奶粉1.5 μg/kg，牛奶0.3 μg/kg，牛奶待测品的添加浓度在0.3～10.0 μg/kg，回收率为80%～100%，奶粉测品添加浓度范围则是1.5～9.0 μg/kg，回收率在70%～90%，合理偏差范围在8.79%～12.7%。

3.2 孕激素

孕激素临床重点运用在治疗惯性流产与预兆流产、功效性子宫流血、子宫内膜迁移症等方面中。通常使用的药品包括甲地孕酮、黄体酮等。有学者创建牛奶内17a羟基孕酮、醋酸氯地孕酮、炔孕酮等8种孕激素残留的快液相色谱串联质谱检测。样品通过提炼、过滤，在shim pack xr ods 2迅速柱上，其中拥有浓度为0.1%的CH2O2与6 mmoL的CH3COONH4的甲基氰或者水溶液展开梯度洗脱分离，利用正离子形式多反应检测形式测定。每一待测物在0.6～49 μg/kg具有良好线性关系，回收率在74%～74%，标准偏差范围在3.9%～8.7%，最小定量测出范围则处于0.2～0.4 μg/kg。此方式简易、迅速、影响少，广泛应用于牛奶少量孕激素残留的检查工作。

3.3 雄激素

雄激素临床重点应用在睾丸功效匮乏，功能性子宫流血、卵巢癌、子宫肌瘤、老牲畜骨质疏松、再生障碍性贫血等。一般使用的药品主要有甲基睾酮、丙酸诺龙以及睾酮等。一些专业人士利用固相萃取液相色谱搭配质谱仪，创建了牛奶中孕酮、睾酮、勃地龙、美雄酮、诺龙以及群勃龙等8大同化激素残留量的迅速测量手段。待测样品利用叔丁甲醚提炼，利用C18萃取柱过滤，用氮气吹干，存留物使用CH3OH和H2O充分溶解之后测量，配置比例为10:90。此手段的检出范围在0.3～0.4 μg/kg，定量范围是0.6～0.9 μg/L，在3.0～190 μg/L线性关系良好。在1.2～4.5 μg/L，8大激素的平均回收率在29.2%～87.2%，标准偏差在3.3%～10.6%。

3.4 雌激素

雌激素主要在在卵巢性能匮乏与加速发情时期，以及功效性子宫流血、乳房疼痛、年迈牲畜骨质疏松、退乳等诊治中应用。一般使用的药品有雌三醇、己烷雌酚、乙烯雌酚以及β雌二醇等。有关人员利用炔雌醇与β雌二醇的分子踪迹聚合物当作材料做出萃取小柱，针对牛奶里的雌激素完成浓缩，利用有效液相色谱技术，创建鉴于分子踪迹萃取技术检查牛奶里的雌激素的全新方式，检出范围小于0.10 mg/L，收回率超过84%。还有专业人士创建了牛奶里5类雌性激素共同测量的液相色谱技术。通过富集与去蛋白之后测量样品，利用反相有效液相色谱形式，将甲基氰和H2O按照1∶1的比例作为流动相，5类雌性激素分割情况较高，均衡回收率在68%～96%。这一方式检出限在1.5～1.9 μg/L。还有学者创建了中控纤维液相微萃取，搭配高效液相色谱检测牛奶内雌二醇的数量。利用相关中空纤维萃取装备，将95 μL的C8H18O当作萃取溶液，在550 r/min拌和速率下精炼1 h，雌二醇的浓缩倍数高达200倍，最小检出标准为0.569 ng/mL。其中一些专业人士利用固相萃取与液液萃取提炼、筛选牛奶内融进的雌三醇，经过反应后，通过质谱和气相色谱搭配使用的形式针对生成物检查剖析，检出限是0.6 μg/L，检测品的质量浓度和生成物的峰面积在2～9950 μg/L呈现出良好的线性关系，各种雌三醇的加标回收率则在79.5%～85.6%。

3.5 β受体激动剂

β受体激动剂是一种择选性β2肾上腺素受体激动剂，一般使用的药品包括西马特罗和其制剂、酯、盐，沙丁胺醇和其制剂、盐、酯。此种药品肌注或者口服都会被迅速吸收，外排速率快，使用药量在6～14倍时会引发动物可食性组织储存诸多药品残余，口服进取之后便会诱发身体中枢神经与心血管的不良副作用。国内有关人员提出了一同测量牛奶内氯霉素、乙烯雌酚、克伦特罗等残余量的同位素吸收高效液相色谱搭配质谱剖析手段。牛奶检测试品并不需要蛋白沉积，径直通过HLB小柱优化水质与正己烷洗脱，通过C4H8O2淋洗之后予以分析。利用acquity uplc beh C18色谱柱展开分析，将C4H8O2当作流动相展开梯度淋洗，用MRM形式测量，同位素吸收内标法完成定量。乙烯雌酚、路霉素以及克伦特罗在牛奶试品中的检出范围依次为0.6～0.9 ng/L、0.4～0.7 ng/L、0.06～0.08 ng/L，其中加标水平中回收率为95%～106%，相对偏差都低于9%。试品通过提炼、筛选环节之后，牛奶中3个添加水平依次是0.01、0.02、0.004 μg/mL，其中回收率在80%～160%，相对偏差是15%，最小检出标准是6 ng/mL，符合残余剖析的需求。

4 将来发展方向探究

牛奶制品内存在的激素药品残余是现阶段全世界关注的焦点，伴随着物质生活水平的不断提升，人们愈来愈注重养生和食品安全问题，注重培养良好的生活习惯。牛奶是人们喜欢的一种食物，牛奶中参与的激素类药品能严重影响人们的身体健康，致使其健康状况急剧下降，这一状况同样是不可小觑的，寻找科学且精准的残余物检查手段是处理这种状况的关键。色谱技术由于其剖析速率快，择选性突显、灵活机敏度较高等优点被普遍应用在牛奶品的残余物检查中。现阶段，对激素的检查已经自以往的单调检查升级到同时检测多种激素，大幅度提升了检查速率。检查技术在不断提升的过程中，针对检查前的预处置探究也获得了不小成就，事先处置的结果的好坏直接影响着最终检查结果的精准性[4]。

针对已有的牛奶激素类药品残余的检查手段还有较大的提升空间，应以精准、便捷为基本，针对怎样提升高接口技术，如何强化其余事先预处置的关联等展开进一步探究。当下色谱技术的日渐改善和优化，其在牛奶激素类药品残余检查中的应用势必会愈来愈广泛，根据色谱技术的测定结果，编制严谨的食品安全规范与制度，全面确保消费人员的身体健康。

在检查奶制品中激素类药品残余工作中运用色谱技术，是时代发展的必然趋势。相关人员一定要在实践中充分结合实际情况，剖析技术特征和优势，将其合理运用在实际检查过程中。并且要善于挖掘问题，寻找处理问题的有效对策，以此确保此技术朝着良好、健康的方向前进，从而保障人们身体健康。