泰州地区鸡沙门氏菌的分离鉴定及耐药性调查

颜卫+安楠+魏雨琼+周宇婷

摘要 沙门氏菌可引起鸡白痢、禽伤寒和禽副伤寒等沙门氏菌病，对我国养鸡业产生了巨大威胁。动物养殖中抗生素的广泛使用导致了沙门氏菌耐药性的出现，这给沙门氏菌病的防治增加了难度。本研究从泰州地区养殖场采集病死鸡病料、健康家禽的泄殖腔样本进行沙门氏菌株的分离鉴定，通过药敏试验了解耐药状况。结果表明，共分离样品339份，活禽检出率为2.3%，病料检出率为8.5%。

关键词 鸡；沙门氏菌；耐药性；检出率；江苏泰州

中图分类号 S852.61 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）01-0225-01

Isolation，Identification and Drug Resistance of Chicken Salmonella in Taizhou Area

YAN Wei AN Nan WEI Yu-qiong ZHOU Yu-ting

（Jiangsu Agricultural and Animal Husbandry Science and Technology Vocational College，Taizhou Jiangsu 225300）

Abstract Salmonella can cause salmonellosis such as white diarrhea，fowl typhoid and paratyphoid，which cause a great threat to China′s chicken industry.The widespread use of antibiotics in animal husbandry has led to the emergence of salmonella resistance，which has made it more difficult to control salmonella.In this study，chickens were collected from farms in Taizhou，and the cloacal samples from healthy poultry were isolated and identified.Salmonella isolates were identified by drug susceptibility test.The results showed that a total of 339 samples were isolated，the detection rate of live poultry was 2.3% and the detection rate of the disease was 8.5%.

Key words chicken；salmonella；drug resistance；detection rate；Taizhou Jiangsu

鸡源沙门氏菌病主要引起鸡的败血症，会通过种蛋垂直传播，导致蛋品质下降、雏鸡先天带菌等，对养殖业带来巨大危害。现代养殖业中抗生素药物的滥用问题越来越严重，增加了鸡源沙门氏菌病的防治难度，加大了生产成本，也威胁到人体健康和公共卫生安全[1-3]。本文对泰州地区鸡沙门氏菌进行分离鉴定和耐药性调查，以期为养鸡业提供科学参考。

1 材料与方法

1.1 培养基与试剂耗材

SS琼脂培养基、生化鉴定管和标准药敏片购于杭州天和微生物试剂有限公司，PCR仪、离心机购于Eppendorf公司，凝胶成像系统购于Bio-Rad公司。

1.2 样品来源

2016年11月至2017年7月，在泰州地区不同养殖场现场无菌采集病死鸡的肝脏、脾脏等病料82份，以棉签采集健康鸡泄殖腔拭子257份进行沙门氏菌检测。

1.3 沙门氏菌的分离

用无菌手术刀切开肝、脾组织，接种环挑取切面平板划线接种于SS琼脂培养基，泄殖腔拭子直接划线接种于SS琼脂培养基[1-2，4-5]，37 ℃培养12～16 h后，将透明或带有黑点的疑似菌落進行纯培养。

1.4 沙门氏菌的鉴定

1.4.1 革兰氏染色鉴定。挑取SS琼脂培养基纯培养的菌落进行革兰氏染色。在载玻片上滴1滴生理盐水，用无菌接种环挑取单菌落涂片[1，6]，酒精灯固定，草酸铵结晶紫溶液染60 s，斜置流水缓慢冲洗，碘液染色1 min，斜置流水缓慢冲洗，乙醇脱色30 s，斜置流水缓慢冲洗，沙黄溶液染1 min，斜置流水缓慢冲洗，轻甩载玻片上多余水分，晾干，油镜观察[7]。

1.4.2 生化鉴定。用葡糖糖、麦芽糖、乳糖、庶糖、鼠李糖、甘露醇、果糖进行糖发酵试验，再进行尿素酶、吲哚、硫化氨、MR、VP试验[1，5]。37 ℃培养48 h，观察结果。

1.4.3 PCR鉴定。采取煮沸法制备菌株DNA模板每株菌桃取3～5个纯化的单菌落，用150 μL PBS制成悬菌液，100 ℃煮沸10 min，冰浴5 min，12 000 r/min离心1 min，取上清液作为DNA模板[6]。

扩增沙门氏菌的保守基因invA，扩增体系为25 μL，其中ddH2O 17.5 μL、10×PCR buffer 2.5 μL、Taq酶2 μL、10 μmoL引物1 μL、DNA模板1 μL。扩增程序：95 ℃ 5 min，95 ℃ 30 s、56 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s，35个循环，72 ℃ 5min。PCR扩增产物用1.0%琼脂糖凝胶电泳分离，凝胶成像系统成像观察，目的扩增片段为373 bp。

1.5 沙门氏菌的耐药性

选用临床常用的13种药物，分别为氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松、头孢他啶、氨曲南、庆大霉素、阿米卡星、链霉素、四环素、环丙沙星、萘啶酸、复方新诺明、磺胺，参照2010年美国CLSI的抗微生物药物敏感性试验操作方法和判断标准，分别对沙门氏菌分离株进行药物敏感性试验[1]。endprint

2 结果与分析

2.1 沙门氏菌分离鉴定结果

由表1可知，82份死亡鸡病料检出阳性样品7份，检出率8.5%；257份健康鸡泄殖腔拭子检出阳性样品6份，阳性率2.3%。

2.2 耐药率

13株沙门氏菌的药敏试验结果如表2所示，分离菌对阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松、头孢他啶、氨曲南、阿米卡星、环丙沙星敏感：对其他药物均有耐药性，尤其对四环素、氨苄西林、磺胺、链霉素、萘啶酸具有耐药性，耐药率分别为38.5%、46.2%、46.2%、53.8%、69.2%。

3 结论与讨论

健康鸡泄殖腔拭子沙门氏菌检出率较低（2.3%），肝脏呈土黄色，部分有灰白色坏死灶，心脏上有结节的病鸡沙门氏菌检出率较高。本次试验共分离样品339份，活禽检出率为2.3%，与薛俊龙等[7]的研究相似，病料检出率为8.5%，可能是由于病料采集前养殖场已使用药物进行治疗。

為了降低沙门氏菌的耐药性，必须严禁抗生素的滥用，治疗沙门氏菌病时，最好先进行药物敏感性试验，筛选出高敏药物后再进行治疗。

硫酸链霉素作为氨基糖苷类的早期药物，临床用药已数十年，已经产生了较强的耐药性，临床上治疗鸡沙门氏菌病时应避免使用硫酸链霉素[1]。萘啶酸为第1代喹诺酮类抗菌药，本试验有9株对萘啶酸耐药。庆大霉素同为氨基糖甙类广谱抗生素，对多种革兰阴性菌及阳性菌都具有抑菌和杀菌作用，但肾毒性较强，不推荐使用。环丙沙星为合成的第3代喹诺酮类抗菌药物，具广谱抗菌活性，杀菌效果好。头孢曲松为第3代头孢菌素类抗生素，头孢他啶为一种单酰胺环类的新型β-内酰胺抗生素。本次分离的沙门氏菌有6株对氨苄西林耐药[1，6]，说明该药不适合于临床防治沙门氏菌。氨曲南虽然抗菌活性较好，但具有肾毒性、免疫原性弱以及青霉素类、头孢菌素类交叉过敏少等特点[1-2]。

4 参考文献

[1] 王菊梅.新疆部分地区鸡源沙门氏菌分离鉴定与防治技术研究[D].乌鲁木齐：新疆农业大学，2015.

[2] 方翟.湖北省鸡源沙门氏菌的分离鉴定和耐药性分析[D].武汉：华中农业大学，2014.

[3] 王菊梅，李雨轩，苏战强，等.禽源沙门氏菌的分离与鉴定[J].新疆畜牧业，2015（1）：33-34.

[4] 宋健，龚子桓，王蒙蒙，等.鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验[J].黑龙江畜牧兽医，2017（16）：110-112.

[5] 孙和梅.延庆县柴鸡几白痢沙门氏菌病的调查及综合防治[D].北京：中国农业科学院，2009.

[6] 杨晓林，陈英，余松城，等.1株鸽源鸡杆菌复合群3的分离和鉴定[J].浙江大学学报（农业与生命科学版），2014，40（3）：249-256.

[7] 薛俊龙，田林君，张国权，等.山西省鸡沙门氏菌病流行病学调查分析[J].山西农业科学.2010，38（9）：58-62.endprint