葛根通脉饮调控BIP蛋白表达抗动脉粥样硬化的作用

韩芬

AS是一种临床常见的心血管疾病, 现已将AS产生及发展过程的关键环节公认为血管平滑肌细胞增生迁移、脂质代谢紊乱以及血管内皮细胞损伤。相关研究表明, 葛根中的葛根素对心肌血液循环可以起到促进作用, 从而对可以抑制血栓形成, 发挥对动脉血管内皮细胞的保护作用, 还可以对产生及释放炎性介质起到抑制、改善微循环等保护心脏的作用［1］。本研究对葛根通脉饮对AS的作用机制做进一步研究分析, 对心血管疾病采用此药进行防治提供实验依据, 并将结果做如下汇报。

1 材料与方法

1.1 材料 日本大耳白兔28只, 普通级, 雄性, 兔龄5个月,体质量2.5～3.0 kg。由山东百德生物科技有限公司提供, 动物合格证号YXQG(鲁)2011-0002。

1.2 药品及试剂 葛根通脉饮基本组方：葛根30 g, 太子参12 g, 山楂15 g, 淫羊藿、川芎、当归尾、赤芍、甘草各6 g。胆固醇(成都普斯生物科技股份有限公司, 批号：57885)、蛋氨酸(河北冀荣氨基酸公司, 批号：990325)；苏木素、伊红由广州深达生物制品技术有限公司提供。

1.3 仪器 PathVision病理成像系统(美国Faxitron公司),DYCZ-24F垂直电泳仪(背景中西远大科技有限公司),HM560MV冷冻切片机, 贝克曼AU5800全自动生化分析仪,PYX-DH50A恒温箱(上海玺恒实业有限公司), HOTE777X转膜仪(中西远大科技有限公司), ZF-Ⅱ紫外线成像仪(上海嘉鹏科技有限公司)BDI-100倒置生物显微镜(上海研润光机科技有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 分组及制备模型 将28只白兔随机分为正常组、高脂组、葛高组以及葛低组, 每组7只。正常组以普通饲料饲养；高脂组将0.02%蛋氨酸及1%胆固醇加入普通饲料中喂养；葛高组及葛低组在喂养高胆固醇饲料基础上分别加喂10 g/(kg·d)及5 g/(kg·d)的葛根通脉饮。

1.4.2 血脂检测及病理组织检验 抽取空腹血并分离血清,利用全自动生化分析仪检测Hcy含量；取上段兔胸主动脉后实施常规的脱水、包埋、浸腊、染色等步骤, 并提取总蛋白质,检测其蛋白浓度。

1.5 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示, 采用t检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 四组Hcy水平及BIP 蛋白表达情况 高脂组的Hcy水平和BIP蛋白表达均高于正常组, 差异有统计学意义(P＜0.05)；高脂组BIP蛋白表达为(1.18±0.15)β-actin,Hcy水平为(21.37±0.14)μmol/L, 高于葛高组的(0.59±0.13)β-actin、(11.03±0.13)μmol/L 和葛低组的 (0.62±0.14)β-actin、(13.23±0.10)μmol/L，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 四组Hcy及BIP水平情况比较( ±s)

表1 四组Hcy及BIP水平情况比较( ±s)

注：与高脂组比较, aP＜0.05

组别 只数 BIP蛋白表达(β-actin) Hcy水平(μmol/L)正常组 7 0.22±0.10a 5.32±0.11a高脂组 7 1.18±0.15 21.37±0.14葛低组 7 0.62±0.14a 13.23±0.10a葛高组 7 0.59±0.13a 11.03±0.13a

2.2 病理组织学检查结果 正常组内皮细胞完整, 动脉内膜光滑；高脂组动脉内膜出现增厚且粗糙, 内膜下聚集大量的脂质和泡沫细胞, 存在AS斑块, 内皮细胞受损, 可见增殖并向膜迁移的正平滑肌细胞(VSMC)；葛低组与葛高组的内皮细胞个别受损, 泡沫细胞量少, 且不存在明显的AS斑块。

3 讨论

蛋氨酸代谢所产生的中间产物就是Hcy, 其在血浆浓度过高而产生的高Hcy血症, 对AS是一个独立的危险因素。有相关研究表明, 脂质过氧化的出现也与Hcy有关, 能够使血管内皮细胞受到损伤, 对增殖血管平滑肌细胞起到促进作用, 从而使血小板进一步增加了其聚集性和粘附性, 进而引起AS［2］。同时内质网的稳定会因为高Hcy血症而被破坏,使蛋白质折叠出现错误或障碍, 内质网应激(ERS)由此触发,导致脂质出现异常沉积, 最终引发AS［3］。BIP是应激蛋白的一种, 在早期ERS时, 其表达量就迅速增加。并且在蛋白质的糖基化折叠、修饰以及转运过程中, 其都会作为分子伴侣而参与到全过程中, 对变性蛋白的重新折叠并恢复正确构象起到帮助作用, 对ERS起到缓解作用［4］。同时能够降解或转移无法恢复的蛋白质, 避免进一步损害细胞。而当ERS时间过程, 内质网就会失去其代偿功能, 就会使BIP表达出现下降, 并且细胞将相关于内质网的凋亡程序进行起到, 造成细胞死亡［5］。本次研究中以加入了蛋氨酸与胆固醇的高脂饲料饲养兔子, 持续9周后, 高脂组兔子的Hcy水平升高, 并且其主动脉能够在镜下观察到AS典型的病理变化, 均提示AS模型成功建立。并且与正常组的BIP蛋白表达量相比, 高脂组增加更为显著, 表明AS的发病机制中, ERS发挥着重要作用。

葛根中一个重要的有效成分就是葛根素, 在相关研究中发现血管内皮细胞在因为Hcy而出现损伤时, 葛根素能够对其起到保护作用［6］。而淫羊藿能够对由Hcy诱导而出现VSMC过度增殖起到拮抗作用, 并对其死亡起到促进作用,同时能够发挥降血脂、对血管内皮细胞进行保护的作用［7］。本研究所用的葛根通脉饮是中药复合制剂, 其主要为葛根及淫羊藿。组方中的君药为葛根, 其具有升阳解痉、通利血脉的功效；臣药为川芎、山楂以及赤芍, 具有舒筋通络以及活血化瘀的功效；佐药为可以起到温肾助阳功效的淫羊藿与太子参；甘草能够对诸药起到调和的作用, 具有补脾益气、清热解毒的功效［8］。从本次的研究结果中发现, 高葛组与低葛组的Hcy水平与高脂组相比明显低。因此葛根通脉饮对AS的治疗作用得到证实。且其BIP蛋白表达量与高脂组相比显著低, 表明葛根通脉饮能够对兔主动脉组织由Hcy而引发的ERS起到抑制作用, 进而到达抗AS的作用, 葛根通脉饮抗AS的作用靶点之一可能是BIP蛋白表达。

［1］ 呼海涛, 徐学琴, 沈晓君.葛根通脉饮调控BIP蛋白表达抗动脉粥样硬化的作用.中国实验方剂学杂志, 2015, 21(1):150-153.

［2］ 赵君玫, 张娜, 王建新, 等.葛根通脉饮对兔动脉粥样硬化模型内质网应激信号转导通路相关分子表达的调控作用.中国全科医学, 2014(27):3269-3273.

［3］ 潘海敏.葛根素对动脉粥样硬化兔的作用机制研究.环球中医药, 2015(s1):56-57.

［4］ 魏述永.葛根素心血管保护作用及其机制研究进展.中国中药杂志, 2015, 40(12):2278-2284.

［5］ 程远渡, 易有金, 易传祝, 等.植物甾醇酯和葛根素联合使用对高脂血症小鼠降血脂作用研究.中国油脂, 2015, 40(4):64-68.

［6］ 陈敬博.葛兰心宁软胶囊治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病不稳定型心绞痛临床观察.中医学报, 2015(4):598-599.

［7］ 梁艺.葛根素对急性冠状动脉综合征患者炎性因子的影响.西南国防医药, 2016, 26(10):1196-1197.

［8］ 陆丽萍, 陈素珍.葛根注射液对脑动脉硬化症患者血液流变学的影响.上海中医药杂志, 2015(1):44-46.