一例蛋鸡Ⅰ亚群禽腺病毒与大肠杆菌混合感染的诊断

宋锋+薛凌壮+祖立闯

摘要：2017年4月，山东省滨州市某蛋鸡场雏鸡发生一种以心包积液、肝炎为主要病变特征的疫病，经过发病情况、临床特征和病理變化等临床诊断以及细菌学检测、病毒学检测等实验室诊断，最终确诊为鸡Ⅰ亚群禽腺病毒与大肠杆菌混合感染。

关键词：蛋鸡；大肠杆菌；Ⅰ亚群禽腺病毒；混合感染；诊断

禽腺病毒（Fowl adenovirus，FAV）属于禽腺病毒科禽腺病毒属，根据FAV群特异性抗原不同可分为3个群。自2015年以来，山东、江苏、河南、河北、辽宁、吉林、安徽、浙江、湖北和山西等地的鸡群相继发生一种由Ⅰ亚群禽腺病毒引起的以心包积液和包涵体肝炎为主要特征的急性传染病，且近2年来该病在我国的发生有日益扩大的趋势，对养禽业的健康发展带来严重威胁。大肠杆菌病（colibacillosis）是指由致病性大肠杆菌（pathogenic Escherichia coli）的某些血清型及其毒素引起的一种肠道传染性疾病，是鸡群常见的细菌性疫病之一，每年都给养禽业造成一定的经济损失。2017年4月，山东省滨州市某蛋鸡场雏鸡发生一种以心包积液、肝炎为主要病变特征的疫病，经过临床和实验室诊断确诊为鸡大肠杆菌与I亚群禽腺病毒混合感染，现将整个诊断过程介绍如下。

1发病情况

2017年4月22日，滨州市某蛋鸡场将所饲养的3，000只8日龄雏鸡断喙，雏鸡断喙前精神、饮食和粪便均正常。上午断喙完成后，下午雏鸡开始发病，发病后陆续出现鸡只死亡，至晚上仅存活46只，病死率高达98.47%。

2临床症状

雏鸡发病急、死亡快，死亡前仅表现出精神萎靡、缩颈闭眼、翅垂蹲卧及张口呼吸等临床特征。

3病理变化

剖检病死鸡可见肝脏肿大，局部甚至整个肝脏色淡，呈黄色，有出血点；心包内有多量淡黄色积液且积液清澈、透亮；肺脏淤血、出血；个别鸡肾脏肿大出血；气管环轻微出血；其他脏器未见明显异常。

4细菌学检测

4.1病料样品镜检

无菌采集病死鸡的肝脏、心脏等病料样品进行涂片，经革兰氏染色、镜检观察可见大量革兰氏阴性、中等大小的杆菌。

4.2细菌分离培养与镜检

将无菌采集病死鸡的肝脏、心脏等病料样品分别接种于血清琼脂培养基平板和麦康凯琼脂培养基平板，37℃培养24h后，在血清琼脂培养基上生长出灰白色、光滑、边缘整齐和中等大小圆形菌落，在麦康凯培养基上为红色菌落。取单菌落进行涂片，经革兰氏染色、镜检观察可见均为革兰氏阴性、中等大小的杆菌。

4.3生化试验

将分离菌株分别接种各种生化鉴定管（购于杭州天和微生物试剂有限公司），结果显示分离菌株能发酵葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖等产酸产气，不能发酵甘露糖，不产生H2S，吲哚试验为阳性，V-P和枸橼酸盐利用试验为阴性，符合大肠杆菌的生化特性。

4.4药敏试验

利用K-B涂布法测定分离菌株对磷霉素、氟苯尼考、阿莫西林、丁胺卡那、新霉素、环丙沙星、强力霉素、多粘菌素和头孢曲松共9种药敏纸片（均购自北京天坛药物生物技术开发公司）的药物敏感性，显示分离菌株对磷霉素、丁胺卡较敏感，对其它7种药物低敏感或耐药。

5病毒学检测

5.1临床病料样品PCR检测

利用病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒（美国AXYGEN公司产品）提取临床病料样品的病毒基因组DNA/RNA。利用山东省滨州畜牧兽医研究院设计合成的Fav-I、鸡新城疫病毒（NDV）、鸡传染性支气管炎病毒（IBV）、H9亚型禽流感病毒（AIV-H9）、鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）、禽网状内皮组织增生病毒（REV）和禽呼肠孤病毒（ARV）特异性检测引物（详见表1），对临床病料样品的病毒基因组DNA/RNA进行PCR/RT-PCR检测，PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测显示，只有Fav-I检测引物的PCR扩增产物在位于约430bp处均具有特异性条带，与预期大小相符。

5.2病毒分离

将发病鸡的心脏、肝脏和肾脏等组织用灭菌生理盐水按照1：10比例匀浆研磨，反复冻融3次后，12，000rpm离心10分钟，上清液经0.22μm过滤除菌后，卵黄囊途径接种10枚7日龄SPF鸡胚（购自济南斯帕法斯家禽有限公司），0.2mL/胚，37℃孵育，接种后72～96h鸡胚集中死亡，剖检鸡胚可见明显的心包积液，肝脏有出血点和坏死点及肾脏充血肿大等典型症状，收取24～144h致死鸡胚的卵黄液-20℃保存。

5.3分离毒株的PCR检测

按照5.1的方法对分离毒株进行PCR检测，结果显示只有Fav-I引物扩增为阳性，其余引物扩增均为阴性。

6综合诊断结果

综合发病隋况、临床特征和病理变化等临床诊断以及细菌学检测、病毒学检测等实验室诊断结果，综合确诊为Ⅰ亚群禽腺病毒和大肠杆菌混合感染。

7小结与体会

腺病毒病是一个老病，Ⅰ亚群FAV引起包涵体肝炎、心包积液一肝炎综合征，宿主非常广泛，主要发生于3～5周龄杂交鸡、麻鸡，也可见于肉鸡、种鸡和蛋鸡。发病鸡群多于3周龄开始出现死亡，4～5周龄达到死亡高峰，死亡率为20%～75%，最高可达80%。商品肉鸭也能感染发病，发病日龄多集中在15～25日龄。除鸡、鸭外，鸽子、观赏鸟也有发病。Ⅰ亚群FAV现在越来越受到重视，逐渐纳入免疫程序，但目前我国尚无正规的商品化Ⅰ亚群FAV疫苗。Ⅱ亚群FAV主要引起火鸡出血性肠炎，鸡脾脏肿大，较少见。Ⅲ亚群FAV主要引起蛋禽的产蛋下降，已经纳入免疫程序，近年来流行率较低。

Ⅰ亚群FAV的感染往往为隐性感染，大部分为无症状感染，病毒长期存在于正常禽类的上呼吸道、消化道和肝脏等部位，呈带毒状态，正常情况下不发病，应激因素或与其它致病原的混合感染均可诱其发病，表现出典型的临床症状。笔者2015年经诊过2例4日龄、5日龄发病，两个病例鸡雏均来自同一孵化场的蛋雏鸡鸡群，及时注射抗体后，死亡率分别为19.17%（1150/6000）和18.67%（560/3000）。2016年经诊20，000只肉杂鸡，5日龄开始发病，至48日龄出售共死亡3，000只，死亡率为15.0%。此病例中3，000只鸡雏死亡2954只，死亡率高达98.47%，应该由断喙应激、断喙后快速升温引起的热应激以及大肠杆菌的混合感染所致。

大肠杆菌为条件性致病菌，当外界环境因素突变后极易诱发，故在养殖场采取以加强日常饲养管理和环境卫生为主的综合措施，可有效避免该病的发生。目前大肠杆菌病是兽医临床中最常见的一种细菌病，虽有多种药物可用于该病的治疗，但抗菌药物的长期、大量滥用导致了耐药性、药物残留、环境污染、食品安全等一系列问题，本研究中的大肠杆菌分离菌株在9种常见药物中已对7种药物表现出低敏感或耐药，分离菌株已表现出了一定的耐药性，应加强重视。endprint