荧光免疫层析法降钙素原检测试剂盒临床性能评估

王艳玲 沈阳市儿童医院检验科 （辽宁 沈阳 110032）

内容提要： 目的：探讨荧光免疫层析法降钙素原检测试剂盒的临床性能。方法：使用荧光免疫层析法和ELISA检测法，通过对比检测结果的精密度、相对灵敏度、特异度，经过统计学分析评价荧光免疫层析法降钙素原检测试剂盒的价值，为临床工作提供科学的依据。结果：与ELISA检测法相比较，荧光免疫层析法检测的结果精密度更好，低浓度和高浓度样本的精密度系数分别为8.6%和4.8%；线性结果提示，在试剂盒标注的检测范围内有良好的线性关系（r=0.9978）；两种方法试剂盒检测结果一致性良好（r=0.9681）；在0.5ng/mL和2.0ng/mL两个特定浓度值时，荧光免疫层析法的灵敏度和特异度均高于85%。结论：荧光免疫层析法降钙素原检测试剂盒准确度更高、临床应用的灵敏度和特异度均高，线性关系良好，与ELISA检测比较效果更佳，临床价值更高。

降钙素原（PCT）是降钙素的前体，它的组成包含一定量的氨基酸，是一种大分子量的糖蛋白。PCT在正常生理情况下是由甲状腺C细胞分泌而成[1]，当机体收到外界感染而产生的应激应答时，除甲状腺C细胞分泌PCT以外，还有其他细胞和组织同样分泌PCT，此时检测体内的PCT含量则明显高于正常健康状态下的含量，因此，PCT也是临床上诊断感染、化脓炎症等的实验室指标。在感染最初的3h内可以检测到PCT含量，当6～12h时，感染体内的PCT分泌量达最高[2]，为感染峰值，然后会随着时间推移慢慢下降，相关文献分析所得，PCT含量和感染严重程度有很大相关性，感染越严重，PCT含量越高，且该物质在体内的半衰期较长，代谢较慢，对人体危害很大，早期发现、早期检测、早期治疗对患者感染预后有至关重要的意义。本文探讨荧光免疫层析试剂盒检测方法的效果，将ELISA作为对照，评价该方法的准确性和综合价值，现报告如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选择本市某医院2016年2月～2018年2月门诊登记的疑似细菌感染病例共100例为研究对象，排除采血样本中的溶血、脂血、黄疸等疾病病例，选择共100例血液样本参加检测。100份样本中无年龄、性别等一般资料的统计学差异（P＞0.05）。血清PCT浓度检测范围覆盖了试剂盒标准范围（0.01～100ng/mL），根据 VIDAS酶联免疫荧光法来分析PCT浓度检测结果：浓度在0.25ng/mL及以下的共有18例、超过0.25ng/mL不高于0.5ng/mL的共有10例、超过0.5ng/mL不高于2ng/mL的共有26例、超过2ng/mL不高于10ng/mL的共有27例、超过10ng/mL的共有19例。所应用的仪器为梅里埃VIDAS酶联免疫荧光法分析系统及PCT检测试剂盒（生产批号为1002934040），生产厂家为梅里埃诊断产品上海分公司[3]，天宝颂原生物荧光免疫分析仪（TEBSUN）及PCT检测试剂盒（生产批号为01220140426），生产厂家为北京瑞禾宏业生物技术有限公司[4]。

1.2 方法

ELISA检测：免疫测定夹心法与最终的荧光检测相结合是其工作原理，首先配置好待检测的样本溶液备用，然后与固定相的抗PCT抗体结合，再结合碱性磷酸酶标记的抗PCT单克隆抗体，将制备好待检测的溶液置于波长405nm下，看水解后的荧光强度所反映的PCT浓度值。线性范围区间是0.05～200ng/mL。

荧光免疫层析法：层析夹心法工作原理，在层析进行时，样本的PCT与标记的单克隆抗体结合，从硝酸纤维素膜层逐渐移动至检测区层，结合物最后沉淀在T区，标记荧光结合物向系统发出信号，收到反馈后转化为定量的数据结果。与ELISA检测不同的是线性范围区间是0.01～100ng/mL。

比较两种方法测定的结果的精密度、方法学本身操作、线性范围、特异度及灵敏度、质量控制上述几项指标。

2.结果

2.1 精密度比较（准确性）

参照标准是美国临床实验室标准化协会（CLSI）定制的EP5-A程序[5]，重复试验20次分别测量试剂盒高低值，计算平均值误差在3以上的均作为离群点，离群点是影响结果准确性即精密度判断的重要影响因素[6]。经测得和计算得出荧光免疫层析法的高（高浓度）低（低浓度）值变异系数分别为8.6%和4.8%，与试剂盒要求的结果范围相符，精密度良好。各个离散点和离散点的平均误差值较小，绘制回归曲线线性关系良好。

2.2 方法学比较

本次试验检测的样本量为100份，其中出现2例检测结果超过试剂盒标准范围区间，统计学不采用该结果，予以剔除，另外有7例结果接近于0.05ng/mL，计算数据时按照0.05ng/mL录入，108份样本采用配对t检验统计学方法分析，得出t值为-0.586，P＞0.05，成对样本的相关系数r为0.9681，P＜0.01，两样本试剂盒结果值呈正相关关系。

2.3 灵敏度和特异度

（临界值0.5ng/mL）TEBSUN试剂盒相对于VIDAS试剂盒的检测结果计算的灵敏度达96.54%，相对特异度为85.33%；（临界值2.0ng/mL）TEMSUN试剂盒相对于VIDAS试剂盒的检测结果计算的灵敏度达86.01%，相对特异度为97.89%，总体符合率达94.33%。

3.讨论

近年来，细菌谱逐渐扩大，抗生素也随之增加，然而医学对于临床上不同菌株的快速诊断和鉴别也有了新的要求[7]。检测方法和精准的操作对于结果有着不同的意义。本文探讨的是荧光免疫层析法来检测降钙素原试剂盒的临床性能情况，收到了很好的试验结果，检测的灵敏度、特异度、精准度都较高，较于其他检测方法更有优势。早期快速准确的检测病菌、及时做出准确的诊断对患者预后结局有很重要的意义。荧光免疫层析法有着很高的精准度、相对灵敏度和特异度也较高，检测时限也较短，这种方法更适用于急诊重症感染的患者。PCT荧光染色因为它有较高的识别性，当细菌感染后，进行荧光标记被检测到的时间很短[8]，所以临床上被实验室经常使用。全身炎症综合反应如脓毒血症等利用荧光层析法可以得到快速准确的结果辅助临床鉴别诊断。