SAA遗传多态性与冠心病临床预后的关联研究

谢 翔， 宋长来， 吴雪琴， 郑颖颖， 刘 芬， 吴婷婷， 李 龙， 马依彤

(新疆医科大学第一附属医院1心脏中心， 乌鲁木齐 830054； 2昌吉分院心血管内科， 新疆 昌吉 831100；3新疆心血管病研究重点实验室， 乌鲁木齐 830054)

血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA)被证明是一种急性期反应蛋白，既能发挥炎症因子的作用[1]，又可以作为一种载脂蛋白，也是新发现的一种脂肪细胞因子[2]。近年来的文献表明，SAA不仅和家族性高脂血症具有关联，还和糖尿病的发生具有关联[3-4]。更多的文献表明SAA基因和冠心病的关系密切[5-6]。基础研究[7]和临床研究[8]均表明SAA的表达分布在动脉粥样硬化的各个时期，并参与动脉粥样硬化的进程。经皮冠状动脉内介入治疗(percataneous coronary intervention,PCI)是冠心病患者的重要治疗手段。PCI术后并发症的发生，尤其是支架内血栓形成、非致死性心肌梗死、出血事件等严重影响着CAD患者的临床结局[9-10]。诸多的临床证据显示，CYP2C19[11]、ABCB1[12]、ITGB3等基因多态性[13],均与PCI术后临床结局具有关联。本研究探讨SAA基因多态性与冠心病患者PCI术后临床结局的关系，以期更好地评估冠心病介入术后患者的危险分层及预后情况。

1 研究内容与方法

1.1研究对象队列研究的方法，选择1 248例接受PCI治疗的冠心病患者，时间跨度为2008年1月-2010年3月。排除了180例，其中89例仅行冠状动脉内球囊扩张术(PTCA)，11 例失访，80例无DNA标本。最终纳入1 068 例患者，其中男性854例，女性 21 例，平均年龄(59.46±11.04)岁。所有的患者符合以下标准：经冠状动脉造影证实冠脉狭窄程度>50%，具有急性冠脉综合症的临床证据。排除标准:患者年龄>75岁，中至重度贫血，血小板低于 70×109/L，有活动性消化道出血、或者有严重的肝肾功能不全、近3 个月内脑血管意外史。

1.2实验方法

1.2.1 采集血样及血生化指标检测 采取患者空腹静脉血5 mL，乙二胺四乙酸三钾(K3EDTA)抗凝，-80℃冰箱保存，备用。血液生化指标的检测由新疆医科大学第一附属医院医学检验中心统一测定。

1.2.2 DNA提取、SNP选择及基因分型 选择rs12218位点，基因组的提取采用北京天根生化公司生产的全血基因组提取试剂盒。rs12218的基因分型采用限制性片段长度多态性(RFLP)技术。采用primer 5.0软件自行设计引物：5′AGGGAGAATGGGAGGGTGGG3′(P1)；5′GCAGGTCGGAAGTGATTGGGGTC′3(P2)。内切酶为BglⅠ。基因分型结果见图1。

1.3随访及临床终点的判定所有患者均随访1 a。主要通过信件、门诊或者再次住院的随访。随访的终点事件为不良心脏和脑血管事件(MACE事件)：包括所有死亡(心脏性和非心脏性)，支架内血栓、非致死性心肌梗死；脑血管事件包括中风、短暂脑缺血发作或可逆性缺血性损伤。

(1：CC基因型；2～4：CT基因型；5～7：TT基因型；M：DNA Marker I)

图1SAA基因rs12218分型结果

1.4统计学处理所有数据采用SPSS17.0软件进行处理。组间计量资料比较采用单因素方差分析，计数资料的比较采用列联表，卡方检验检验。COX回归分析用来进行多因素分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1基因分型结果SAA基因3种基因型频率的分布符合遗传平衡定律。男女之间比较基因型频率差异无统计学意义(P>0.05)，见表 1。

表1 SAA基因型分布频率/例(%)

2.2基线资料在不同基因型之间有差异的指标为脉搏、尿素氮、高血压、高甘油三酯血症等(P<0.05)，见表2。不同基因型的靶血管及支架类型未见明显差异，见表3。

表2 三种基因型之间临床特征的比较(±s)

表3 PCI介入治疗的相关参数/例(%)

2.3SAA基因多态性对PCI术后患者预后的影响1 068例患者均完成了1 a随访, MACE事件中，死亡36例(3.37%)，非致死性心肌梗死48例(4.49%)，支架内血栓 38 例(3.56%)，另外有12例出血事件(1.12%)，总的MACE事件的发生率为8.61%，SAA不同基因型之间MACE事件的发生率差异无统计学意义，见表4。

2.4COX回归分析结果为了调整混杂因素的干扰，我们采用多因素COX回归分析，结果显示，在调整了其他的混杂因素后，仍然没有发现 SAA 基因多态性和不良事件的发生相关，见表5。生存分析显示，不同基因型之间，其1 a MACE事件发生率及1 a无事件生存率均无明显统计学差异，见图2。

表4 PCI术后1 a不良事件的发生率/例(%)

表5 COX回归分析结果

a: 无事件生存率 b: MACE事件

图2SAA不同基因型之间生存曲线比较

3 讨论

PCI技术作为冠心病患者的常规治疗越来越得到大家的认可，也有越来越多的患者从中获益。但是PCI术后支架内再狭窄的问题也困扰着临床医生，尤其是在金属裸支架年代[14]。随着药物涂层支架的问世，再狭窄的发生率明显降低了，但却增加的支架内血栓的发生率[15]。尽管 PCI 术后规范应用了双联抗血小板药物，有时却不能避免支架内血栓的发生。因此冠心病患者 PCI 术后不良事件的发生的易感因素是多方面的。支架内血栓形成是PCI术后最主要的并发症。尽管支架内血栓形成的因素有多种，包括患者本身的因素和手术操作过程[16]。该研究中，我们入选的患者均为药物洗脱支架植入者。已经有很多危险因素被发现和支架内血栓有关，包括急诊 PCI、射血分数下降的左心功能不全、合并有糖尿病或者是肾功能不全等。急诊 PCI 术后支架内血栓的形成和的炎症反应及血小板激活有关[17]。但也和术中操作如支架贴壁不良有关[18]。

本研究中对 SAA 基因rs12218多态进行研究。该位点在本研究前期工作中已经被发现和冠心病的发病风险存在关联。但在本研究中，却没有发现rs12218位点和冠心病 PCI术后临床结局相关。3种基因型一般临床资料的比较显示，脉搏、高血压以及高脂血症存在明显的差异，因此我们进行多因素Logistic回归分析已排除这些混杂因素的干扰，结果仍显示SAA基因多态性与冠心病PCI术后的临床结局无关。

另外，Li等[19]研究结果表明，支架内血栓的发生率在糖尿病组显著高于非糖尿病组。表明糖尿病患者PCI术后发生不良事件的风险明显增加，其机制可能和血糖及血脂代谢的紊乱有关。本研究前期的结果也已证实SAA 基因突变明显升高血糖水平。另外，我们也发现SAA基因变异和冠心病的发病风险密切相关[20]，但在本研究中并没有发现SAA基因多态性和冠心病PCI术后的不良预后有关。这种结果的可能原因有以下几点：(1)研究设计中仅仅涉及单个SNP，这可能低估了SAA 基因在冠心病PCI 术后不良预后中的作用。(2)可能和本研究随访的时间较短有关，对于冠心病PCI术后患者的随访，较多的文献报道了随访5 a的结果，这样更容易发现一些潜在的关联，因此尚需要我们在今后的研究中进一步阐述。

[1] ZAKYNTHINO E, PAPPA N. Inflammatory biomarkers in coronary artery disease[J]. Cardiol,2009,53(3):317-333.

[2] LEOW K Y, GOH W W, TAN S Z, et al. Variant screening of the serum amyloid.Al gene and functional study of the p.Gly90Asp variant for its role in atherosclerosis[J]. Atherosclerosis,2013,227(1):112-117.

[3] Du J L, Sun C K, LU B, et al. Association of SelS mRNA expression in omental adipose tissue with Homa-IR and serum amyloid A in patients with type 2 diabetes mellitus[J]. Chin Med J(Engl),2008,121(13):116-118.

[4] ALWAILI K, BAILEY D, AWAN Z, et al. The HDL proteome in acutecoronarysyndromes shifts to an inflammatory profile[J]. Biochim Biophys Acta,2012,1 821(3):405-415.

[5] TANAKA T, IKEDA K, YAMAMOTO Y, et al. Effects of serum amyloid a and lysophosphatidyl choline on intracellular calcium concentration in human coronary artery smooth muscle cells[J]. Int Heart J,2011,52(3):185-193.

[6] CHEN G L, LIU L W, XIE S, et al. High-density lipoprotein associated factors apoA-I and serum amyloid A in Chinese non-diabetic patients with coronary heart disease[J]. Chin Med J(Engl),2010,123(6):658-663.

[7] DONG Z, WU T, QIN W, et al. Serum amyloid a directly accelerates the progression of atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice[J]. Mol Med,2011,17(11-12):135-136.

[8] ZHAO Y, ZHOU S, HENG K. Celecoxib inhibits serum amyloid a-induced matrix metalloproteinase-10 expression in human endothelial cells[J]. J Vasc Res,2009,46(1):64-72.

[9] MAMAS M A, RATIB K, ROUTLEDGE H, et al. Influence of access site selection on PCI-related adverse events in patients with STEMI:meta-analysis of randomised controlled trials[J]. Heart,2012,98(4):303-311.

[10] MANOUK I, AN S V. The relationship between bleeding and adverse outcomes in ACS and PCI:pharmacologic and nonpharmacologic modification of risk[J]. Invasive Cardiol,2010,22(3):132-141.

[11] MEGA J L, SIMON T, COLLET J P, et al. Reduced-function CYP2C19 genotype and risk of adverse clinical outcomes among patients treated with clopidogrel predominantly for PCI: a meta-analysis[J]. JAMA,2010,304(16):1821-1830.

[12] JAITNER J, MORATH T, BYRNE R A, et al. No association of ABCB1 C3435T genotype with clopidogrel response or risk of stent thrombosis in patients undergoing coronary stenting[J]. Circ Cardiovasc Interv,2012,5(1):82-88.

[13] CAYLA G, HULOT J S, O'CONNOR S A, et al. Clinical,angiographic,and genetic factors associated with early coronary stent thrombosis[J]. JAMA,2011,306(16):1765-1774.

[14] 范亚红, 刘兴德. 部分血液学指标与PCI术后支架内再狭窄的相关性[J]. 贵阳医学院学报, 2016,41(6):710-713.

[15] BELARDI J A, ALBERTAL M. GenousTMendothelial progenitor cell capturing stent:thrombus-resistant but vulnerable to restenosis[J]. Catheter Cardiovasc Interv,2011,78(2):196-197.

[16] 郭自同, 刘伟, 沈鑫, 等. 逆向溶栓联合PCI术治疗急性ST段抬高型心肌梗死的1年随访观察[J].新疆医科大学学报,2017,40(7):902-905.

[17] SUH H S, SONG H J, CHOI J E, et al. Drug-eluting stents versus bare-metal stents in acute myocardial infarction:A systematic review and meta-analysis[J]. Int J Technol Assess Health Care,2011,27 (1):11-22.

[18] BRAR S S, STONE G W. Decision-making:stenting in acute myocardial infarction[J]. Future Cardiol,2010,6(3):301-314.

[19] LI Y, LI C X, WANG H C, et al. Efficacy and safety of firebird sirolimus-eluting stent in treatment of complex coronary lesions in Chinese patients:one-year clinical and eight-month angiographic outcomes from the FIREMAN registry[J]. Chin Med J(Engl),2011,124(6):817-824.

[20] XIE X, MA Y T, YANG Y N, et al. Genetic polymorphisms of serum amyloid A1 and coronary artery disease risk[J]. Tissue Antigens,2015,85(3):168-176.