渔药的给药方法与技术（2）

孟思妤 孟长明 陈昌福

（1.河南省新乡市康大消毒剂有限公司，453700；2.华中农业大学，430070）

2 致病菌药物敏感性测定

抗菌药物敏感性试验（AST）简称药敏试验（或耐药试验），旨在了解病原菌对各种抗生素的敏感（或耐受）程度，以指导药物治疗中合理选用抗生素药物的微生物学试验。某种抗生素如果能以很小的剂量抑制、杀灭致病菌，则称该种致病菌对该抗生素“敏感”。反之，则称为“不敏感”或“耐药”。为了解致病菌对哪种抗生素敏感，以合理用药，减少盲目性，就应该进行对致病生物进行药敏试验。致病菌的药敏试验大致过程是：从患者的感染部位（病灶）采取含致病菌的标本，接种在适当的培养基上，于一定条件下纯化培养菌株。如果采用纸片琼脂扩散法（K-B法）完成药敏试验，就可将分别沾有一定量各种抗生素的纸片贴在培养基表面（或用不锈钢圈，内放定量抗生素溶液），培养一定时间后观察抑、杀菌结果。由于致病菌对各种抗生素的敏感程度不同，在药物纸片周围便出现不同大小的抑制致病菌生长而形成的“空圈”，称为抑菌圈。抑菌圈大小与致病菌对各种抗生素的敏感程度成正比关系。因此，可以根据药敏试验结果有针对性地选用抗生素。最近已有自动化的药敏试验仪器问世，可以使药敏试验更加迅速、准确。

对水生动物致病菌的药敏试验结果不仅可为科学地选择治疗药物提供重要参考，避免渔用药物的滥用或者误用，而且通过监控病原菌的耐药性变迁，还可用于评价研制渔用药物中新药的抗菌谱和抗菌活性等药效学特征。目前，在水生动物疾病防控中滥用抗生素的现象比较普遍，致使抗药致病菌急剧增加，甚至因长期大量使用广谱抗生素，大量杀伤了水生动物体内正常微生物，失去微生物的相互制约作用，从而使一些少见的或一般情况下的非致病菌大量繁殖，引起所谓“二次感染”的情况屡有发生，给药物治疗水生动物感染性疾病造成人为的困难。因此，在水产养殖中提倡对水生动物致病菌进行药敏试验，对于做到精准用药和坚持合理用药是十分重要的。

目前常用的药敏试验方法有：纸片琼脂扩散法（K-B法）、稀释法、E试验、检测细菌耐药性的方法。稀释法又可分为液体稀释法和琼脂稀释法。在人医和兽医方面，检测细菌耐药性的方法还包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的检测、耐万古霉素肠球菌（VER）的检测、耐青霉素肺炎链球菌（PRP）的检测、超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的检测和β-内酰胺酶的检测。

对于水生动物致病菌药敏试验主要采用纸片琼脂扩散法（K-B法）和稀释法进行。

1）纸片琼脂扩散法（K-B法）

该方法是将含有定量抗菌药物的药敏片（药敏片），贴在已接种了待测试致病菌的琼脂培养基表面上，药敏片中所含的药物在琼脂培养基中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，在纸片的周围形成药物浓度梯度。导致药敏片周围能抑菌的药物浓度范围内的致病菌不能生长，而处于药物抑菌浓度范围外的致病菌则可以生长。因此，在药敏片周围形成透明的抑菌圈。不同抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂培养基中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小即可以反映测试致病菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试致病菌的MIC相关。

药敏片可以购买或者自制。自制药敏片时，取新华1号定性滤纸，用打孔机将其打成6.0毫米直径的圆形纸片。取圆形纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15～20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使其完全干燥。

接着，向上述含有50片滤纸片的青霉素瓶内加入药液0.25mL，并翻动滤纸片，使各滤纸片充分浸透药液，翻动滤纸片时不能将其捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，待其干燥后即密封，如有条件可真空干燥。切勿让药敏片受潮，置阴暗干燥处保存，制作好的药敏片的有效期一般为3～6个月。

需要注意的是药敏片的质量一定要标准，这是做好药敏试验的关键。如果药敏片质量参差不齐（制作药物纸片时，如果选择的滤纸厚薄不一致，或者有缺损，就会导制备的药敏片中药物含量不均匀），常常引起抑制菌环不规则，使药敏结果判断不准确。因此，药敏片间差和准确度都一定要达到标准。同时，为了保持药敏片中的药物活性，药敏片的pH一般要求为中性；同时将其置放低温条件（-10℃）下保存，避免潮湿。盛装药敏片的容器自低温处取出时，应放置在室温条件下平衡至少10分钟后再打开包装容器，避免冷凝水影响到药效。

（未完待续）