浙江野生三叶青的规模化组培育苗

三叶青具有活血祛风、抗炎、镇痛、抗病毒、抗肿瘤等功效，用于治疗不明原因的高热，对各种炎性水肿、肺炎、肝炎、肾炎、癌症有奇效。在现代中药上，三叶青直接用于治疗外科伤口感染，疗效显而易见。病人在用药后的24 h内，可见伤口周围的组织红肿明显消退，体温及局部组织温度下降，伤口分泌物减少，干燥，结痂，愈合迅速，效果明显，优于西药的抗生素，且无副作用，无抗药性，被称为“植物抗生素”。

临床研究已经表明，长期服用三叶青无任何毒副作用，在临床和民间应用中尚无出现耐药性，在治疗过程中攻补兼施，除了直接的治疗作用外，三叶青还可以通过增强人体的细胞免疫和体液免疫，实现免疫系统的防御、自稳、监视功能，及时清除变异细胞，正因为如此，三叶青被越来越多的应用于防肿瘤和抗肿瘤。其药食兼用性、治疗与预防的两用性更是有利于三叶青的产业化开发。

野生三叶青通常生长于海拔300～1300 m的山坡林下灌丛、山谷溪边林下岩石缝中。人们受经济利益的驱使，大量采挖导致野生三叶青数量剧减，在很多自然分布区由原先的随处可见减少为片状或零星分布，三叶青野生资源逐渐成为一种濒危植物。因此，十分必要对野生三叶青资源进行系统整理筛选、驯化与人工培育研究。

基于之前研究的基础上，选用适应性强、功效成分高的高产优质三叶青品系作为试验材料，通过系统的对比试验后提出了适合规模化生产的三叶青组培快繁体系，希望借此解决野生三叶青转变为栽培种的关键技术。

一、外植体的选择和处理

（一）外植体的选择

一般选择无病虫害、无病毒侵染的，生长健壮的，当年生嫩枝加工外植体。三叶青组培通常以茎尖、带腋芽的茎段和叶片为外植体，研究证明，三叶青种苗规模化组培生产时以带腋芽的茎段做外植体为好。

（二）外植体的处理

1．外植体清洗消毒

先将采集的三叶青嫩枝，用柔软毛刷配合洗涤剂洗去表面尘土，再将其置于水龙头下以流水冲洗10～20 min，然后在超净工作台上进行表面消毒。具体方法是：将外植体嫩枝先放入75%的乙醇溶液中浸泡10 s后，用无菌水洗净，再放入0．1%HgCl2或 2% 次氯酸钠溶液中消毒10～20 min后，用无菌水冲洗3～5次。

2．外植体的切段

取出茎段，置于灭过菌的培养皿中，用滤纸吸干表面水分，在超净工作台上，用灭过菌的解剖刀、镊子将嫩枝均匀切分成大小约0．8～1．0 cm的小段，每段含1个腋芽。腋芽朝上，接种于事先准备好的诱导培养基中，每瓶5～10株。

二、初代培养

（一）培养基

基本培养基为MS培养基。植物激素为：0．3～0．5 mg/L 浓度的苄氨基腺嘌呤（6-BA）和 0．01～0．05 mg/L浓度的萘乙酸（NAA）

（二）培养条件

培养温度为25±2 ℃。前期暗培养，待有芽萌发后光照强度3000～5000 lx培养，每天的光照时间为10～12 h，待组培苗生长满瓶后再进行增殖培养。

三、增殖培养

（一）增殖培养基

基本培养基为MS培养基。植物激素为：2．0～4．0 mg/L 浓度苄氨基腺嘌呤（6-BA）和 0．1～0．3 mg/L浓度的萘乙酸（NAA）。

（二）增殖培养条件

培养温度为25±2 ℃。光照强度3000～5000 lx，每天的光照时间为10～12 h。待组培苗株高长至2 cm，可以将小苗切断进行生根培养。

四、生根培养

（一）生根培养基

基本培养基为1/2 mS培养基。植物激素为 0．5～2．0 mg/L 浓度的吲哚丁酸（IBA）。

（二）生根培养条件

培养温度为25±2 ℃。光照强度3000～5000 lx，每天的光照时间为10～12 h。待组培苗株高长至5 cm，可以将组培苗着手进行炼苗和移植。

五、组培苗移植

（一）基质配制

以70%细泥土+20%泥炭+5%珍珠岩+3%缓释肥+2%草木灰作移栽基质，总体要求疏松透气且有一定肥力，将 pH 值调节为 5．5～6．0。

（二）炼苗和栽植

移植前，将培养瓶按批次分层放置在温室自然散射光下，尽量减少彼此遮光。先封口炼苗3～7 d，然后再开口炼苗3～7 d，开口炼苗时可在培养基表面洒薄薄一层水，最好能将温度控制在25±4 ℃。

炼苗完成后，继续加水将培养基打散倒出，用清水仔细将小苗根部附着的培养基清洗干净后，栽植于72穴穴盘中。根据环境温度及光照条件，适时选择将穴盘置于温室或阴棚下进一步培育壮苗。

六、移栽后的管理

三叶青移栽后的管理内容主要是水分管理及光照和温度条件控制，同时需注意适当施肥。移栽时浇足水分，以后每2～3 d淋水1次。移植后14～21 d，育苗环境相对湿度控制宜在80%～90%，当第一片新叶完全张开后，降低湿度至60%～70%。移栽28天内，光照强度控制在2000～3000 lx，28天后逐渐增大光照强度至3000～6000 lx。整个育苗期，温度宜控制在15～30 ℃。

移栽后第28～56 d，每 7天喷施液肥1次，通常选择浓度为0．3%的磷酸二氢钾肥液。

三叶青苗期病虫害较少，可通过降低湿度、加强通风、保持生产环境清洁、及时清除病残株等方法防治病害；可采用杀虫灯、黏虫板、防虫网减轻虫害。

七、出圃标准

由于各地栽培的三叶青来源地复杂，品种也较多，彼此间生物学特性差异较大，所以三叶青商品苗分级与出圃标准目前难以确定。出于对商品苗在移入大田后能尽快缓苗、快速生长的普遍要求，我们考虑主要从培育时间及生物学性状两方面来界定三叶青商品苗的出圃标准。即组培苗移栽培育90天左右，植株生长健壮、根系发达、无病虫害。新根3条以上，新叶3～5片，叶色翠绿即可出圃。