UPLC-MS/MS法测定鸡蛋、鸡肉中氯霉素药物残留

□ 叶 一 成都市食品药品检验研究院

1 实验材料与方法

1.1 实验仪器与试剂

超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱仪；瑞宁微量移液器；VDRTEX-5-H106漩涡混合器；GL-20G-II高速冷冻离心机；TTL-DCI氮吹仪（北京同泰联）；超纯水仪（MILLIPORE Synergy）。应用的试剂主要有甲醇、甲酸、污水硫酸钠、氢氧化铵等，符合实验研究纯度。

1.2 液相色谱与质谱条件

液相条件：色谱柱，Hypersil Gold—C18，1.9 μm，2.1 mm×100 mm。流动相：甲醇—水。流速0.3 mL/min；进样量10 μL；流动相比例见表1。

质谱条件：采用负离子进行样品的扫描，多反应监测进行样品的检测，电喷雾电压-2 500 V；采用高达350℃的雾化温度；辅助气流速和鞘气流速为3 arb、35 arb；采用350 ℃毛细血管温度。详见表2。

1.3 标准品溶液的制备

称取标准品氯霉素10 mg，加入甲醇至100 mL，制定成为100 μg/mL氯霉素溶液，作为标准品储备液使用，并储存在零下20 ℃的冰箱。用甲醛将储备液稀释成10 ng/mL，用作对照液。

1.4 样品前处理

1.4.1 鸡肉样品前处理

称取5 g鸡肉样品，准确到小数点后两位，并将其放置在50 mL具塞聚四氟乙烯离心管中，向管内加入3 mL 0.1%三氯乙酸，持续1 min的玻璃棒混匀，并加入乙酸乙酯20 mL和氢氧化铵0.5 mL，继续使用玻璃棒进行5 min的混匀均质，开始进行离心10 min，使用5 000 r/min离心速度，然后吸取离心管内的上清液。在另一个离心管中加入氢氧化铵0.5 mL和乙酸乙酯20 mL，将玻璃棒清洗干净。将清洗液倒入第一个离心管中，重复提取，并将两次提取液合并，并用玻璃棒进行混匀。

1.4.2 鸡蛋样品前处理

称取5 g鸡蛋打散样品，精度精确到小数点后两位，并将其放置在50 mL具塞聚四氟乙烯离心管，并按照乙酸乙酯20 mL、氢氧化铵0.5 mL、无水硫酸钠5 g的顺序依次加入，持续5 min的玻璃棒混匀均质提取，离心10 min，使用5 000 r/min离心速度，将离心管内的上清液进行吸取。在另一个离心管中加入0.5 mL氢氧化铵、20 mL乙酸乙酯，清洗玻璃棒，洗液倒入第一个使用的离心管中并连续二次提取鸡肉，合并两次提取液并涡旋混匀。

1.4.3 液净化操作

量出8 mL鸡蛋和鸡肉提取液，采用氮吹方法在55 ℃环境下吹干，并用2 mL甲醇10%溶液溶解，然后加入1 mL 10%的甲醇饱和的正己烷涡旋混合30 s，然后离心5 min，采用8 000 r/min的转速，将上清液清除。沿用上述方法再重新净化两到三次，当下层呈现透明清亮的状态就可以，采用0.2 μm滤膜进行过滤，待检测。

2 试验结果和分析

2.1 提取溶剂

对氯霉素的提取，笔者采用乙酸乙酯，经过两步的提取后，可以将鸡蛋和鸡肉中的氯霉素药物残留最大限度地提取，鸡肉和鸡蛋的提取率为92.1%和95.6%。

2.2 流动相

经过试验表明，甲醇-水为流动相时，信号较强，没有出现拖尾问题，且无分叉，还可以有效避免溶剂效应。所以，最终的流动相为甲醛-水。

2.3 标准曲线线性考察

取适量标准储备液，用甲醇稀释成 0.1、0.5、1、2、5、10 ng/mL浓度的标准工作液，并按照从低到高的浓度进行测定，每一种浓度的标准工作液进样3针，并绘制标准工作液浓度和峰面积的曲线。

2.4 添加回收和精密度试验

准确量取500、300、100 μL的氯霉素对照工作液加入到5 g样品中，每个浓度制备3份平行样，且每份样品进样3次，取数据的平均值。经过相关数据的统计可知，鸡肉和鸡蛋内添加的样品回收率在70%～100%和80%～110%。不同批次变异系数都小于10%。据试验数据确定本方法的检测底限（LOQ）为0.1 μg/mL。

3 结语

通过对鸡肉和鸡蛋的氯霉素药品残留的检测发现，超高效液相色谱-串联质谱法具有精度较高的测量结果。本方法的检测底限（LOQ）为0.1 μg/mL，且该方法居民明显的优势，简单、快速、回收率高，在鸡肉和鸡蛋的氯霉素检测中可以采用。