球菌的分析鉴定

□ 樊云霄 河南省产品质量监督检验院

模仿葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、表皮葡萄球菌这四种菌株在血平板和BP平板上很容易混淆，实验室对这四种菌株做进一步生化鉴定研究。这样以后在微生物实验中能够快速取得准确、真实的结果，实验人员的检测质量也可以大大提高，对整个实验室质量控制结果给予肯定。微生物实验跟别的实验不一样，实验当中工作人员一定要小心，注意安全。

1 材料及试剂

采用北京路桥提供的3 mm无菌接种环、血平板、BP平板、营养琼脂平板、革兰染色液、冻干血浆，所选材料及试剂均在有效期之内。

标准菌株：模仿葡萄球菌 ATCC 27851、金黄色葡萄球菌 ATCC 6538、粪肠球菌 ATCC 29212、表皮葡萄球菌ATCC 12228。

2 菌株活化

在无菌环境下，从凹口处撕开产品包装，撕掉标签上的拉片，将其贴于初级培养平板上；捏管帽处安瓿瓶中部（仅一次）使其释放水合液体，垂直握住试管并轻拍之，使液体流入含小球的管底；通过挤捏压碎小球，使其与液体混合；立即将拭子浸于水合悬液中，挤压并旋转拭子，接种于营养琼脂上，用一无菌接种环在先前的接种区划线20次，使其分离出单菌落。倒置36 ℃培养24 h。

3 分离

模仿葡萄球菌在营养琼脂上为白色圆形湿润菌落；金黄色葡萄球菌在营养琼脂上为黄色圆形湿润菌落；粪肠球菌在营养琼脂上为无色针尖状菌落；表皮葡萄球菌在营养琼脂上为白色针尖状菌落。

4 接种

挑取模仿葡萄球菌在营养琼脂上的白色圆形湿润菌落划线接种血平板和BP平板；挑取金黄色葡萄球菌在营养琼脂上的黄色圆形湿润菌落划线接种血平板和BP平板；挑取粪肠球菌在营养琼脂上的无色针尖状菌落划线接种血平板和BP平板；挑取表皮葡萄球菌在营养琼脂上的白色针尖状菌落划线接种血平板和BP平板。血平板倒置36 ℃培养24 h。BP平板倒置36 ℃培养48 h。模仿葡萄球菌在血平板上为白色圆形湿润菌落，有溶血；金黄色葡萄球菌在血平板上为黄色圆形光滑湿润菌落，有溶血；粪肠球菌在血平板上为白色圆形湿润菌落，有溶血；表皮葡萄球菌在血平板上为白色圆形湿润菌落，无溶血。模仿葡萄球菌在BP平板上为灰色圆形大菌落，周围有晕圈，晕圈外有透明带。金黄色葡萄球菌在BP平板上为黑色圆形小菌落，有光泽，有浑浊带。粪肠球菌在BP平板上为黑色圆形小菌落，有光泽，无晕圈。表皮葡萄球菌在BP平板上为黑色圆形菌落，无晕圈。

5 鉴定

（1）革兰氏染色及镜检。模仿葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，粪肠球菌为革兰氏阳性球菌，表皮葡萄球菌为革兰氏阳性球菌。

（2）挑取五个营养琼脂上的模仿葡萄球菌接种5 mL BHI，挑取五个营养琼脂上的金黄色葡萄球菌接种5 mL BHI，挑取五个营养琼脂上的粪肠球菌接种5 mL BHI，挑取五个营养琼脂上的表皮葡萄球菌接种5 mL BHI，36 ℃培养24 h。按照冻干血浆的操作方法做血浆凝固酶实验，每半个小时观察一次，观察六小时。如出现凝固或凝固体积大于一半即为阳性。模仿葡萄球菌无凝固、金黄色葡萄球菌凝固、粪肠球菌无凝固、表皮葡萄球菌无凝固。

6 结语

在微生物实验室检验当中，能够取得准确、真实的结果，与实验人员的技术息息相关。优质的实验操作，提高实验的效率和实验的准确性，也是微生物发展的基础，所以在实验管理工作中，要熟悉实验过程，了解标准中常规的实验内容，掌握一些易混淆的菌株的生理生化特征现象。微生物实验过程中一定要小心，要避免泄露。泄露一是会对实验人员造成一定的伤害，二是对整个实验室也会造成污染。另外，微生物中很多致病菌在一定的条件见下很容易增长和变异，会对结果造成一定的偏差和影响。实验结束后一定要对用过的试剂和耗材进行高压灭菌。通过实验可以验证理论，工作人员要提高实验操作的熟练度，培养独立实验的工作能力和思考能力，并具有过硬的专业技术水平，熟练地操作技术同时还要保证自身的安全性。微生物实验室坚持以发展为主题，以服务客户为中心，以提高实验质量为重点，紧紧围绕实验的整体工作，解放思想，更新观念，开拓进取，不断推进微生物实验室工作向前发展。微生物实验室检验质量对于检验结果的准确性至关重要，因此应当得到更高的重视。