HPLC法测定钩藤提取物中钩藤碱含量

张建奇 金海燕

摘 要：建立反相高效液相色谱法测定钩藤提取物中钩藤碱的含量。方法：采用奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸铵水溶液用氨水调pH=9.8（20：30：50）为流动相，检测波长为240nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。钩藤碱在5～50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。钩藤碱平均回收率分别为99.5%。结论：本法简便、准确，可用于钩藤提取物中钩藤碱的含量测定。

关键词：钩藤提取物；含量；测定

钩藤始载于《别录》，原名钓藤。钩藤别名为吊藤（陶弘景）、钓钩藤（《滇南本草》）、金钩藤（《贵州民间方药集》）、挂钩藤（《药材学》）、钩耳（《湖南药物志》）等。钩藤具有清热平肝，熄风止痉的功效。《本草新编》记载：“钩藤，去风甚速，有风症者必宜用之。但风火之生，多因于肾水不足，以致木燥火炎，于补阴药中，少用钩藤，则风火易散，倘全不补阴，纯用钩藤以祛风散火，则风不能息，而火且愈炽矣。”钩藤具有抗炎、镇痛、抗肿瘤等多种药理作用[1-4]。本文采用高效液相法对钩藤提取物中的钩藤碱的进行了含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器：VWR天平防震垫（北京慧龙环科环境仪器有限公司）；JJ-BF 0.001g天平（上海仁沃实业发展有限公司）；天星进样瓶清洗机TX-500型（北京天星科仪科技有限公司）；LC1620A高效液相色谱仪（河南郑州南北仪器设备有限公司）；长城狮鼎SHB-III型台式循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；Milli-Q Direct水纯化系统（上海力晶科学仪器有限公司）；新芝scientz-T超声波提取机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 对照品：钩藤碱。

1.4试剂：醋酸钠（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、乙酸铵（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、氨水（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、冰醋酸（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、甲醇（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、三乙胺（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、乙腈（北京市津同乐泰化工产品有限公司）。

1.5 试药：钩藤提取物。

2 测定方法确定

2.1 色谱条件

依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[5-6]。流动相：乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸铵水溶液用氨水调pH=9.8（20：30：50）为流动相，检测波长：240nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按钩藤碱峰计算应不得低于2500。

2.2 对照品溶液的制备

取在60℃减压干燥4 小时的钩藤碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每lml含20μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取提取物适量，精密称定，加15毫升甲醇溶液超声处理0.5小时，放冷，滤过，滤液置25ml量瓶中，用少量甲醇溶液分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加甲醇溶液至刻度，摇匀，即得。

2.4 精密度试验

精密称取钩藤碱对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为20μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.78%，表明本方法精密度良好。

2.5 对照品的线性考察

精密称取适量钩藤碱对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含5、10、15、20、25、30、35、40、45、50微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，钩藤碱在5～50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.6 重现性试验

称取同一批的钩藤碱样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.69%，结果表明此方法的重现性良好。

2.7 准确度试验

取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入钩藤碱对照品，按项下方法制备成80%、100%、120%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.5%，RSD为0.98%。

2.8 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定钩藤提取物三批样品。

3 讨论

分別考察甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5），甲醇-0.01mmol·L-1三乙胺水溶液（80∶20），甲醇-水-冰醋酸（40∶60∶0.5），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺），乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸铵水溶液用氨水调pH=9.8（30：30：40），乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸铵水溶液用氨水调pH=9.8（20：30：50）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸铵水溶液用氨水调pH=9.8（20：30：50）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸铵水溶液用氨水调pH=9.8（20：30：50）为流动相为流动相。本实验采用高效液相法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于钩藤提取物中钩藤碱的含量测定。

参考文献

[1]张兴燊，周芳，廖月葵，李丽，熊靖云，蓝国亮，陈武棠，韦江惠，覃莉萍，梁飞.古钩藤镇痛抗炎药理作用的实验研究[J].时珍国医国药，2007（07）.

[2]刘建斌，任江华.钩藤对自发性高血压大鼠心肌重构及原癌基因C-fos表达的影响[J].中国中医基础医学杂志，2000（05）.

[3]陈长勋，金若敏，王群，张海桂.钩藤碱对离体豚鼠心房的作用[J].Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences，1995（03）.

[4]赵智强，俞晶华，陆跃呜，王小勤，周仲瑛.天麻钩藤饮等三方对戊巴比妥钠小鼠睡眠时间效应的药物动力学研究[J].中药药理与临床，1999（02）.

[5]王捷，龙禹，焦爱军，刘宗河，辛丽娜.HPLC测定安神养血口服液中3种生物碱延胡索乙素、钩藤碱和异钩藤碱含量[J].中成药，2010（02）.

[6]张荣，刘睿，刘启德，宓穗卿，王宁生.钩藤中钩藤碱、异钩藤碱的提取与含量测定[J].中药新药与临床药理，2009（04）.