注射用重组人干扰素αb溶解后活性稳定性的分析

马鸿杰　刘传灵　黄秋茹　毛新

【摘要】 目的 研究分析注射用重组人干扰素α1 b（赛若金）溶解后生物学活性的稳定性。方法 按

照《中国药典》2015年版干扰素活性检测第一法， 采用细胞病变抑制法（CPE）检测溶解后的赛若金分别在4℃及25℃条件下放置不同时段的生物活性， 与标准品比较， 评估其溶解后的稳定性。结果 4批次不同规格的赛若金经4℃存放12、24、36、48 h后生物学活性相当于0 h活性的93.93%～100.31%， 生物活性无明显的下降， 相对稳定。4批次不同规格的赛若金经25℃存放12、24、36、48 h后生物学活性相当于0 h活性的81.90%～100.46%， 生物活性有所波动， 依旧在合格范围内。结论 赛若金溶解后性质稳定， 使用本品除了现配现用， 还可以提前溶解配制， 适当条件下保存使用。

【关键词】 注射用重组人干扰素；生物学活性；细胞病变抑制法；稳定性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.35.113

【Abstract】 Objective To study and analyze the activity stability of recombinant human interferon α1b for injection（Sinogen） after dissolution. Methods According to the first edition of Chinese Pharmacopoeia （2015 Edition） Interferon Activity Test， cytopathogenic effect （CPE） was used to detect the biological activity of Sinogen in different periods after being dissolved at 4 ℃ and 25 ℃ respectively， and they were compared with the standard， so as to assess its stability after dissolution. Results 4 batches of different specifications of Sinogen at 4 ℃ for 12， 24， 36， 48 h had biological activity equivalent to 93.93% ～ 100.31% at 0 h， no significant decrease in biological activity， and it is relatively stable. 4 batches of different specifications of Sinogen at 25 ℃ for 12， 24， 36， 48 h had biological activity equivalent to 81.90%～100.46% at 0 h， the biological activity fluctuates， but still in the qualified range. Conclusion After dissolution， Sinogen has stable properties， in addition to current use of this product， it can also be dissolved in advance， and stored under proper conditions.

【Key words】 Recombinant human interferon； Biological activity； Cytopathogenic effect； Stability

干擾素具有广谱的抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等多种生物学活性， 赛若金是中国第一个采用中国人基因克隆和表达的干扰素[1-3]。α1b型基因工程干扰素广泛应用于治疗病毒性感染的疾病以及肿瘤的生物治疗， 该药已被广大的医患人员所熟知[4， 5]。赛若金是深圳正中医药集团深圳科兴生物工程有限公司主要产品， 现有6种规格， 目前是全国规格最齐全的干扰素产品。本文就其溶解后在4℃ 和25℃存放不同时间后的活性加以检测并对其稳定性分析讨论， 为医护人临床使用提供实验依据。现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 干扰素：赛若金， 批号及规格（μg/支， 10 μg相当于10万 IU）：201703010（10 μg）、201703005（20 μg）、201703007（30 μg）、

201703006（40 μg）， 抽取量：8支/批（采用4批次不同规格的赛若金， 深圳科兴生物工程有限公司）。

标准参考品：IFNα1b生物学活性测定标准品（购自中国食品药品检定研究院）， 批号为97/01。病毒株和细胞株：水泡性口炎病毒（VSV）（由中国食品药品检定研究院提供）。细胞：人羊膜细胞（WISH）（购自上海细胞研究所）。血清：胎牛血清（购自IMMUNO PROBE）。培养基：RPMI Medium l640培养基（购自GIBCO）。染色液：自配。细胞消化液：自配。脱色液：自配。稳定性试验设备：2～8℃冰箱 ，（25±1）℃、CO2恒温培养箱， 酶标仪[6]。

1. 2 方法 本方法按照《中华人民共和国药典》（2015版）三部3523干扰素生物活性测定法第一法：细胞病变抑制法测定（CPE）。

1. 2. 1 供试品溶液的制备 将批号为201703010（10 μg）、201703005（20 μg）、201703007（30 μg）、201703006（40 μg）4批样品（8支/批）的供试品按照标示量用无菌注射用水溶解， 用测定培养液稀释成105 IU/ml。在96孔细胞培养板中， 每个稀释度做2孔。在无菌条件下操作[7]。endprint

将批号为201703010（10 μg）、201703005（20 μg）、201703007

（30 μg）、201703006（40 μg）4批样品（8支/批）无菌注射用水溶解， 混匀后分装至小离心管， 分别在4℃ 条件下存放0、12、24、36、48 h；25℃条件下存放0、12、24、36、48 h。各取以上不同条件存放样品一支， 用同样的方法测定其生物活性。

1. 2. 2 生物活性检测 根据干扰素可以保护人羊膜细胞免受水泡性口炎病毒破坏的作用， 赛若金采用CPE法分别测定， 用结晶紫对活细胞WISH细胞染色， 脱色后在波长570 mm处测定其吸光度， 得到干扰素对WISH细胞的保护曲线[8， 9]。然后根据待测样品不同稀释度的保护能力， 计算干扰素活性。

主要步骤为：培养细胞-细胞传代-铺板（96孔细胞培养板）-加样-攻击病毒-染色-脱色-比色-结果计算[10]。

2 结果

4批次不同规格的赛若金经4℃存放12、24、36、48 h后生物學活性相当于0 h活性的93.93%～100.31%， 生物活性无明显的下降， 相对稳定。见表1。

4批次不同规格的赛若金经25℃存放12、24、36、48 h后生物学活性相当于0 h活性的81.90%～100.46%， 生物活性有所波动， 依旧在合格范围内。见表2。

3 小结

将结果与溶解0 h（4℃和25℃）的比较， 对结果进行分析。4批次不同规格的样品经4℃存放12、24、36、48 h后生物学活性相当于0 h活性的93.93%～100.31%， 生物活性无明显的下降， 相对稳定。4批次不同规格的样品经25℃存放12、24、36、48 h后生物学活性相当于0 h活性的81.90%～100.46%， 生物活性有所波动， 依旧在合格范围内。

综上所述， 4批次不同规格的样品溶解后， 在同一存放条件下活性稳定性基本相同。故初步认为赛若金按照说明书用注射用水溶解后， 在4℃或者25℃保存≤48 h可放心使用。

参考文献

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[2] 郑辉， 崔颖杰， 郭桥， 等. 重组人干扰素α1b滴眼液稳定性的研究. 生物学杂志， 2005， 22（5）：31-32.

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[5] 石晓丽， 张雪梅， 姜巍， 等. 注射用重组人干扰素α2b冻干制剂稳定性试验. 生物学杂志， 2000， 17（4）：20-21.

[6] 刘君， 张夕燕， 李军， 等. 重组人干扰素β1b活性标准品的稳定性研究. 国际生物制品学杂志， 2008， 31（2）：49-50.

[7] 裴德宁， 饶春明， 郭莹， 等. 重组人干扰素β1b活性测定国家标准品的研制. 中国生物制品学杂志， 2009， 22（12）：1206-1209.

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[9] 陈维金. 重组人干扰素α2b喷雾剂组方、稳定性和安全性的研究. 吉林大学， 2006.

[10] 于建春， 谷峰， 孙彦. 重组人干扰素α-2b水针、粉针的稳定性及与干扰素标准品的比较研究. 天津师范大学学报（自然版）， 2003， 23（1）：43-45.

[收稿日期：2017-08-30]endprint