仔猪黄痢的病原菌分离及药敏试验的研究

文│吴建勋 滕海涛 闫卫红（吉林省白城市动物疫病预防控制中心）韩璐璐（吉林省白城市畜牧兽医技术指导中心）

随着养猪业不断健康持续向着规模化、集约化趋势的发展，由于疫病控制过程中抗生素类药物非规范化的使用，致使细菌、病毒抗菌谱日益广泛的问题凸显，治疗难度大，也间接影响了养猪业的经济效益。在猪场的疫病控制过程中，发病率较高仔猪黄痢，具有流行性广、发病率高的特点。该致病菌为大肠杆菌，常见于哺乳期的仔猪，致病菌对仔猪的消化系统（胃肠）造成损伤，影响机体的正常的消化、代谢及哺乳期主要营养物质的吸收，由于哺乳期仔猪机体抵抗力较弱，因而致死率较高。

临床上主要以粪便的感官及生物学细菌特征为辨别依据。该病患猪个体体征现象不明显，容易被忽视。也可以从病仔猪饲喂及采食量作对比，大体判断仔猪是否患病。该致病菌属于革兰氏阴性短杆菌群的一种，生物学大小为0.5×（1～3）微米，有鞭毛，能进行生物学运动，无芽孢。该菌属的种类较多（约16种），因而在治疗过程中需要进行生物学鉴定菌种，根据菌体抗原的不同进行特异性的治疗。

畜牧相关统计部门大量数据采集分析表明，该病使仔猪机体对饲料的能量转化效果降低，阻碍仔猪的正常生长，并且致死率较高，给畜牧养猪业造成较大经济损失，也间接限制中国畜牧养猪业健康、持续、规范化的发展。

一、试验方法

1.病原分离。病原分离步骤见图1。

2.生化试验。取备用待检测样品进行生物学单糖及多糖发酵实验，进行菌种的分离和鉴定实验。

3.药敏试验。按照美国临床实验室标准委员会CLSI推荐的Kirby－Bauer法对其中20株分离菌进行纸片法药敏试验。

二、结果与分析

1.细菌纯化、培养特性及形态结构观察结果。将12份病料分别于M.C培养基和普通培养基中培养，鉴定结果如下。

（1）M.C培养基。大小适中，表面湿润呈红色，菌体呈圆形隆起，光滑，边缘整齐。

（2）普通琼脂培养基。灰白色，圆形，稍隆起，光滑，湿润，边缘整齐的中等大小菌落。

◎图1 仔猪黄痢病原菌分离步骤

表1 分离菌株的糖酵解试验结果

表2 分离菌株生化试验鉴定结果

将上述鉴定完毕的菌落，进行涂片，革兰氏染色、镜检（图2）。其结果为阴性、中等大小。最后初步断定其为大肠杆菌。

2.生化试验鉴定结果。对分离出的5株菌株进行生化鉴定，结果分离表明能发酵葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、乳糖、甘露醇、鼠李糖，不能对蔗糖进行利用（除菌A以外）（表1）；吲哚试验阳性，MR试验阳性；H2S、VP、尿素、枸橼酸盐试验阴性（表2）。根据生化实验及生物学特征综合分析，最终确定该致病菌为大肠杆菌。

3.药敏试验结果。对上述的10种药物进行药敏试验，根据测定药敏纸片产生的抑菌圈直径的大小（图3），参考标准值后表明，氟苯尼考、头孢噻肟钠、新霉素和诺氟沙星4种抗生素药物为高敏；头孢氨噻肟、磺胺异恶唑、四环素3种抗生素药物为中敏；链霉素、青霉素、庆大霉素3种抗生素药物为耐药（表3）。

三、结论

随着畜牧业相关部门对该疾病的重视日益增强，相关科研成果及疫病应对措施方面取得了较大进展。但由于该致病菌菌属的抗药性较强，而且大肠杆菌血清型极具多样性，这些疫苗具有较强的特异性致使在治疗同菌属的非特异性菌种效果一般。并且，由于中国大部分猪场非规范化分散管理的局限（主要建立在城、乡、镇偏远地区），管理条件较差，特定的生物学检测条件有限，致使猪场对于该病的治疗效果一般。J.Osek报道，1.91%致病性菌株含K88、K99、F17、F41纤毛菌株，57.3% 的致病菌能产生LT1、ST1、Sst2E毒素，可见疫苗治疗的局限性。

表3 20株仔猪黄痢病原菌对10种抗菌药物的敏感判定

◎图2 分离菌株革兰氏染色、镜检

◎图3 药敏试验

笔者建议，商品苗研制应考虑毒素、优势血清型等综合制病因素。药物治疗方面，应该减少抗生素的滥用。在猪场的日常管理过程中，应该注意猪舍的环境卫生情况，发现病猪应及时隔离治疗观察。做好治疗记录，根据仔猪的病态体征及相关的生物学实验，鉴定出该猪场该疾病大肠杆菌菌种，准备好治疗该大肠杆菌的特异性血清，减少不明致病菌感染后盲目治疗造成大量金钱及时间的浪费，间接提高猪场的经济效益，从而推动畜牧养猪业的可持续发展。