几种云南核桃不同部位总黄酮含量的测定

刘基+赵宁+王小双+赵声兰

摘要：本研究以芦丁为对照品，采用比色法测定几种云南核桃不同部位的总黄酮含量，比较其叶、树枝皮、青皮、壳、内隔膜及内种皮总黄酮含量的差异。结果表明，不同云南核桃品种的不同部位总黄酮含量不同，不同云南核桃品种的同一部位总黄酮含量也有差异。娘青核桃内种皮、内隔膜、叶等部位的总黄酮含量高于其它品种，总黄酮含量内种皮达23.17%，叶中达14.80%，内隔膜中达15.17%，青皮中达9.33%；大泡核桃的总黄酮含量为内种皮中14.78%，叶中12.01%，内隔膜中10.27%，其青皮、树枝皮总黄酮含量略高于其他核桃品种，分别为15.79%、5.56%。综合来看，核桃不同部位的总黄酮分布为内种皮>叶>青皮>内隔膜>树枝皮>壳。

关键词：总黄酮；核桃；不同部位；品种

中图分类号：S664.1文献标识号：A文章编号：1001-4942（2017）12-0135-04

Abstract With the rutin as reference substance， the total flavonoid contents in leaves， tree bark， green husk，shell， diaphragm and endotesta of several species of walnut varieties were determined with colorimetric method.The results showed that the total flavonoid contents in different parts of different Yunnan walnut cultivars were different， and also different in the same part.The total flaconoid contents in endotesta， diaphragm， leaves and other parts of Niangqing walnut were higher compared with the other varieties， which were 23.17% in endotesta， 14.80% in leaves， 15.17% in diaphragm and 9.33% in green husk，respectively.The total flavonoid contents of Dapao walnut were 14.78% in endotesta， 12.01% in leaves，10.27% in diaphragm， and those in green husk and bark were 15.79% and 5.56%respectively， which were a little higher compared to the other varieties. In general， the distribution of total flavonoid contents in different parts of walnut were in the order of endotesta>leaves>green husk> diaphragm>tree bark>shell.

Keywords Total flavonoid content； Walnut ；Different parts；Different varieties

核桃又名胡桃、羌桃，为胡桃科胡桃属植物，与扁桃、腰果、榛子并列为世界著名的四大干果。我国核桃种植面积和产量均居世界第一，云南又居全国之首。云南省2013年核桃产量超过70万吨，占当年全国核桃总产量30.327%[1]，2015年核桃种植面积超过282万公顷，年产量超过85万吨[2]。我国核桃开发利用以核仁加工为主，大量的核桃青皮、壳、内隔膜和内种皮未得到充分利用，更鲜有对核桃叶、树枝皮的加工和利用。前人研究表明，部分植物黄酮类成分具有抗氧化[3]、调血脂、扩张冠脉、止血、镇咳、祛痰、降低血管脆性等药理作用[4，5]。核桃青皮黄酮提取物对脚气真菌抑制率59.64%[6]；核桃壳含黄酮等多种活性物质，具有抗氧化、抗菌、降脂、抗肿瘤等作用[7]；核桃内隔膜总黄酮对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基等具有较好清除能力和铁还原能力[8]；核桃内种皮总黄酮提取物具有较强的抗氧化和抑菌活性[9]；核桃叶提取物中的黄酮类成分具有较好的抗氧化活性[10]，国外有学者认为核桃叶黄酮类提取物能诱导细胞周期阻滞，可能包含可作为化疗药物有效成分[11]。目前，云南种植的核桃品种主要有娘青[12-14]、圆菠萝[12]、大泡[12]、草果[12]、鸡蛋殼[12]、滑皮[12]、桐子果[12]、云新303[12]、永泡1号[12]等。本研究测定了几种云南核桃品种的叶、树枝皮、青皮、壳、内隔膜及内种皮的总黄酮含量，以期为核桃资源的高效开发利用奠定科学基础和提供新思路。

1 材料与方法

1.1 试验材料与试剂

试验所用10年树龄娘青核桃、圆菠萝核桃、大泡核桃、草果核桃、鸡蛋壳核桃由西南林业大学赵宁副教授提供并鉴定。选取上述5种核桃的叶、树枝皮、青皮、壳、内隔膜及内种皮，切碎，密封，-20℃保存，备用。

芦丁（标准品）购自上海同田生物技术股份有限公司；亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝、乙醇为国产分析纯，购自天津市风船化学试剂科技有限公司；添加试剂用水为去离子水（自备）。

1.2 试验仪器

UV-1800PC紫外可见分光光度计，翱艺仪器（上海）有限公司产品；SK7210HP超声波清洗器，上海科导超声仪器有限公司产品；CP214电子天平，上海奥豪斯仪器有限公司产品；电热鼓风干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司产品。endprint

1.3 试验方法

1.3.1 供试样品溶液的制备 精确称取适量核桃样品，按料液比1∶20、温度51℃、60%乙醇超声提取31 min，冷却，定容，过滤。

1.3.2 水分含量测定 精确称取适量核桃样品，按文献[15]方法测定，用于计算样品的干基质量。

1.3.3 标准曲线绘制 精确称取10 mg芦丁标准品，60%乙醇溶解定容至50 mL，分别精确移取1.0、2.0、2.5、3.0、4.0 mL上述溶液到10 mL容量瓶中，加5% NaNO3 0.3 mL，摇匀，反应6 min，再加10% Al（NO3）3 0.3 mL， 摇匀，反应6 min，最后加4% NaOH 4 mL，60%乙醇定容，摇匀，显色15 min，510 nm处测定吸光度值，以芦丁对照品溶液浓度（C，mg/mL）为横坐标，吸光度（A）值为纵坐标作图，得标准曲线。

1.3.4 总黄酮含量测定 取1.3.1供试品溶液1 mL于10 mL容量瓶，加5% NaNO3 0.3 mL，搖匀，反应6 min，再加10% Al（NO3）3 0.3 mL，摇匀，反应6 min，最后加4% NaOH 4 mL，60%乙醇定容，摇匀，显色15 min，510 nm处测定吸光度值。根据标准曲线回归方程计算样品提取液的总黄酮浓度， 按下式计算样品的总黄酮含量（以干基结果表示）。

X（%）=（C×V/M）×100

式中，X 为核桃样品总黄酮含量，C为核桃样品总黄酮提取液浓度（mg/mL），V为核桃样品总黄酮提取液的体积（mL），M为核桃样品的干重（mg）。

1.4 方法学考察

1.4.1 稳定性试验 取同批次1.3.1制备的核桃内种皮提取液，按1.3.3测定方法，显色15 min后分别放置0、15、30、45、60、75、90 min，于510 nm处测定吸光度值，并计算RSD。

1.4.2 重现性试验 按1.3.1方法，分别制备同一核桃内种皮提取液5份，按1.3.3方法测定供试品的总黄酮含量，并计算RSD。

1.4.3 精密度试验 取1.3.1制备的同一核桃内种皮提取液，按1.3.3方法平行测定7次，计算RSD。

1.4.4 加样回收试验 分别精密称取已知总黄酮含量的核桃内种皮6份，分别加入芦丁对照品，按1.3.1制备供试品，按1.3.3方法测定，计算加标回收率和RSD。

2 结果与分析

2.1 线性关系考察

按1.3.3方法测得芦丁标准曲线，吸光度（A）与芦丁浓度（C， mg/mL）回归方程为A=12.035C+0.011（R2=0.9992），表明芦丁浓度0.02～0.08 mg/mL时与吸光度呈良好线性关系。

2.2 方法学考察

2.2.1 稳定性试验 按 1.4.1的方法测定，核桃总黄酮的稳定性RSD为2.17%（n=7）。

2.2.2 重现性试验 按 1.4.2的方法测定，核桃总黄酮的重现性RSD为2.47%（n=5）。

2.2.3 精密度试验 按 1.4.3的方法测定，核桃总黄酮的精密度RSD为0.28%（n=7）。

2.2.4 加样回收试验 按 1.4.4的方法测定，核桃总黄酮的加标回收率为96.93%～102.20%，RSD为1.98%（n=6），见表1。

2.3 不同核桃品种不同部位总黄酮含量的测定

不同核桃品种和同一核桃品种不同部位总黄酮含量均不相同，不同核桃品种同一部位总黄酮含量差异较大。各部位总黄酮含量从高到低顺序为，核桃内种皮：娘青>草果>圆菠萝>大泡>鸡蛋壳；核桃内隔膜：娘青>大泡>圆菠萝>草果>鸡蛋壳；核桃叶：娘青>大泡>圆菠萝；核桃树枝皮：大泡>圆菠萝>娘青；核桃青皮：大泡>娘青>圆菠萝>草果；核桃壳：娘青>大泡>圆菠萝>草果>鸡蛋壳（表2）。娘青核桃除树枝皮与青皮，各组织总黄酮含量均较高，内种皮中总黄酮含量为23.17%，内隔膜中为15.17%，叶中为14.80%，核桃壳中为2.04%（表2）。综合来看，不同部位总黄酮含量为：内种皮>叶>青皮>内隔膜>树枝皮>壳。

3 讨论与结论

本研究发现核桃各部位的总黄酮含量分布为内种皮>叶>青皮>内隔膜>树枝皮>壳。任晓蕾等[16]以乙醇为提取液，芦丁为对照品，采用硝酸铝-亚硝酸钠比色法测得核桃不同部位黄酮含量的顺序为叶>皮>茎；冯荣等[17]用60%乙醇超声提取核桃不同部位的总黄酮，以木犀草苷为对照品，比色测定之后认为核桃不同部位中总黄酮含量为内种皮>内隔膜>壳，与本研究的测定结果一致。本研究发现云南娘青核桃各部位的总黄酮含量较高，内种皮总黄酮达23.17%，叶中达14.80%，内隔膜中达15.17%，圆菠萝、大泡、鸡蛋壳等核桃的内种皮、叶、内隔膜及树枝皮中也含有丰富的总黄酮。熊新武等[13，14]认为娘青核桃出仁率、含油率都较高，适应性强，耐贫瘠士壤，丰产性好，产量高于漾濞大泡核桃，在相同土地条件下种植，产量是漾濞大泡核桃的12倍。娘青核桃作为一个优良品种不仅产量高，且各部位的总黄酮含量也高，具有较高的开发前景。本研究可为核桃产业可持续发展及核桃资源进一步综合开发利用奠定基础和提供新思路。

参 考 文 献：

[1] 张有林，原双进，王小纪，等. 基于中国核桃发展战略的核桃加工业的分析与思考[J]. 农业工程学报，2015，31（21）：1-8.

[2] 杨文营，谢萍.云南省核桃产业发展制约因素和对策探讨[J].当代经济，2016 （2）：78-79.

[3] Pahari B，Chakraborty S，Chaudhuri S， et al. Binding and antioxidant properties of therapeutically important plant flavonoids in biomembranes： insights from spectroscopic and quantum chemical studies[J].Chemistry and Physics of Lipids，2012，165（4）：488-496.endprint