食品中合成着色剂的测定方法研究

李林++武术兰++王震

摘要 本文建立了应用配有紫外检测器的液相色谱仪检测食品中柠檬黄、日落黄、亮蓝、苋菜红、胭脂红、诱惑红、新红、赤藓红、偶氮玉红含量的方法。样品用聚酰胺粉吸附，用甲醇-甲酸溶液淋洗，用乙醇-氨水洗脱，洗脱液收集在蒸发皿中，水浴蒸干定容上机检测。以液相色谱测定，外标法定量。

关键词 合成着色剂；高效液相色谱法；LC-UV；吸附；淋洗；洗脱；食品

中图分类号 O657.72 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）17-0253-02

1 安全提示

试验中用到的甲醇、甲酸、氨水具有一定的毒性和腐蚀性，应小心操作，如不慎贱入皮肤、脸部、眼睛等部位，应及时用大量水冲洗。严重者冲洗后就医。

2 方法提要

本标准操作程序是本实验室参照相关文献样品前处理方法及测定方法，按《残留检测质量控制指南》的有关要求，进行周密验证后，将某些关键步骤进行细化。

本标准适用于的合成着色剂为柠檬黄、日落黄、亮蓝、苋菜红、胭脂红、诱惑红、新红、赤藓红、偶氮玉红，以下介绍统一用着色剂代替着色剂的名称。

3 原理

食品中合成着色剂与聚酰胺粉在酸性条件下吸附，在碱性条件下洗脱，经反相液相色谱C18柱分离后，用紫外检测器428、529、600 nm检测，外标法定量[1-2]。

4 检测限、线性范围、回收率范围和精密度

着色剂检测限为1 mg/kg。着色剂的线性范围：0.50～10.00 μg/mL。着色剂的回收率范围均在75%～110%之间。仪器精密度为1.284%。

5 仪器和设备

高效液相色谱仪（Waters e2695），带紫外检测器[3]。水浴锅、过滤器、加热板、pH计、烧杯、10 mL比色管、G3砂芯漏斗、抽滤装置、0.45 μm滤膜。

6 试剂与溶液

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

6.1 试剂

甲醇（色谱纯）、乙酸铵（色谱纯）、聚酰胺粉（过200目筛）、柠檬酸、甲醇（分级纯）、甲酸（分析纯）、乙醇（分析纯）、氨水。

6.2 溶液

乙酸铵溶液（0.02 mol/L）：称取1.54 g乙酸铵，加水至1 000 mL定容。

甲醇-甲酸（6+4）溶液：量取甲醇（分析纯）60 mL，甲酸40 mL，混匀。

乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液：量取乙醇70 mL，氨水20 mL，水10 mL，混匀。

pH=4的水：水中加柠檬酸，配合pH测定仪的使用调节至pH=4。

6.3 标准物质与标准溶液

6.3.1 标准物质。着色剂标准品。

6.3.2 标准溶液。①标准储备液配制。准确称取着色剂10 mg，加水溶解并定容至10 mL，溶液浓度为1 000 μg/mL。②标准中间液的配制。使用移液器吸取标准储备液100 μL至10 mL容量瓶中，用水定容至10 mL，溶液浓度为10 μg/mL。③混合标准工作液的配制。标准中间液稀释成标准工作液，浓度分别为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL。

7 试验方法

7.1 试样制备

①含二氧化碳的汽水：加热除去二氧化碳。②配制酒类：加小碎瓷片数片，加热去除乙醇。③肉类、糖果等含脂类样品：加石油醚除去脂类，重复3次。

7.2 分析步骤

7.2.1 吸附。称取5 g样品（粉状、肉类、色深样品可少称）于100 mL烧杯中，用pH=4的水溶解。加入2～3勺聚酰胺粉，搅拌片刻，置于60 ℃水浴锅保持30 min，待上层液体澄清即可。

7.2.2 淋洗。将吸附好的样品以G3砂芯漏斗抽滤，先用60 ℃pH=4的水洗涤3～5次洗至流出液无色。再用甲醇-甲酸（6+4）溶液淋洗3～5次，洗至流出液无色，然后用大量水洗至中性。

7.2.3 洗脱。用乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液洗脱3～5次，每次10 mL，收集洗脱液。

7.2.4 蒸发定容。将洗脱液蒸发至接近干燥，加水溶解，定容至10 mL，经0.45 μm滤膜过滤，滤液待高效液相色谱分析。

7.2.5 仪器参数与测定条件。①色谱测定条件。色谱柱：SB-C18（粒径5 μm，250 mm×4.6 mm）或同等性能的色谱柱[4]；柱温（35±1）℃；流动相0.02 mol/L乙酸铵溶液、甲醇[5]；流速1.0 mL/min；检测波长428、529、600 nm；进样量10 μL；梯度见表1。

7.2.6 仪器测定。①标准曲线的绘制。依据上述条件，将配置好的系列标准溶液，含标准浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL标准溶液，按照从低到高浓度依次进样至液相色谱仪中。得到上述各浓度的标准溶液的色谱图（图1）。以标准浓度（μg/mL）为横坐标，以峰高或峰面积为纵坐标，绘制标准曲线和计算线性方程。②样品的测定。分别吸取试样溶液10 μL，在相同的工作条件下，注入液相色谱仪中，计算出试样溶液中着色剂的值。

7.2.7 定性标准。根据保留时间定性，分别测量标准系列、样品的峰高或峰面积。

7.2.8 定量方法。本试验采用外标定量，根据所测物质的峰面积定量。

8 结果计算

采用外标法定量，计算公式如下：

式中：X—试样中着色剂含量的数值，单位是mg/kg；c—测定用试样溶液中的着色剂含量的数值，单位为μg/mL；V—试样溶液体积，单位为mL；m—试样取样量，单位为g；f—稀释倍数。

9 检测质量控制标准

本试验的着色剂标准曲线为0.5～10.0 μg/mL。检出限为1 mg/kg。样品中着色剂的回收率范围在75%～110%之间，可接受的标准曲线相关系数的最低值为0.999。

10 分析步骤的关键控制点及说明

按照本标准操作程序执行的样品测定，操作者应注意以下关键处：①对于组分浓度超出工作曲線浓度范围的样品，应予以适当倍数的稀释，尽量保证被测组分浓度包涵在工作曲线的浓度范围内；②因标准溶液配制的体积较小，易产生较大误差，配制过程中应谨慎操作，确保取液体积准确，并防止污染；③取样时应注意查看样品均一性，以保证平行样品测定的一致性。

11 参考文献

[1] 中华人民共和中卫生部，中国国家标准化管理委员会.水果罐头中合成着色剂的测定 高效液相色谱法：GB/T 21916-2008[S/OL].（2013-12-23）[2017-05-16].http：//www.doc88.com/p-7314371647500.html.

[2] 钱晓燕，刘海山，朱晓雨，等. 固相萃取/超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中12种合成着色剂[J].分析测试学报，2014，33（5）：527-532.

[3] 中华人民共和中卫生部，中国国家标准化管理委员会.食品中合成着色剂的测定：GB/T 5009.35-2003[S/OL].（2015-08-05）[2017-05-16].http：//www.doc88.com/p-2015378149361.html.

[4] 张大芬，朱敖兰，陶红霞，等.高效液相色谱法同时测定玉米粉和小米粉中的8种合成着色剂[J].现代预防医学，2015，42（7）：1202-1204.

[5] 杨勇，罗奕，吴琳琳，等.HPLC-DAD法测定馒头中喹啉黄、食用绿S和亮绿3种色素含量的研究[J].粮油食品科技，2015，23（6）：71-75.