高效液相—蒸发光散射法测定藿胆滴丸中猪去氧胆酸含量

郭文婷 王磊

摘 要：本文采用高校液相测定了藿胆滴丸中猪去氧胆酸的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），甲醇-乙腈-0.1%冰醋酸溶液（20∶40∶40）为流动相，ELSD检测器漂移管温度85℃，气体流速：2.5L·min-1，柱温：30℃。猪去氧胆酸在20～350微克/毫升范围内呈良好的线性关系。猪去氧胆酸的平均回收率为99.1%，RSD为0.98%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于藿胆滴丸中猪去氧胆酸的含量测定。

关键词：藿胆滴丸；猪去氧胆酸；含量

藿胆滴丸为黄白色的滴丸，由猪胆酸、藿香油、聚乙二醇（6000）組成。藿胆滴丸具有清热化浊，宣通鼻窍的功效，常用于风寒化热，胆火上攻引起的鼻塞欠通，鼻渊头痛。猪胆粉来源本品为猪科动物猪Sus scrofa dommestica Brisson.胆汁的干燥品。猪胆粉具有清热，润燥，解毒，止咳平喘的功效，常用于热病燥渴、痢疾、便秘、喉痹、百日咳、痈疮肿毒等。本文采用高校液相测定了藿胆滴丸中猪去氧胆酸的含量。

1 仪器与试药

VWR天平防震垫（北京慧龙环科环境仪器有限公司）；JJ-BF 0.001g天平（上海仁沃实业发展有限公司）；YL9100液相色谱仪（汕头市科毅仪器设备有限公司）；蒸发光散射检测器（上海通微分析技术有限公司）；Milli-Q Direct水纯化系统（上海力晶科学仪器有限公司）；DX-208恒温水浴槽（北京长流科学仪器有限公司）；美国泽拉布Super超越系列全触屏超纯水系统（上海和泰仪器有限公司）；10升数控型超声波清洗器（天津市瑞普电子仪器公司）。猪去氧胆酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、甲醇（安徽胜达化工科技有限公司）、冰醋酸（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、乙醇（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、磷酸（上海展云化工有限公司）、三乙胺（北京市津同乐泰化工产品有限公司）、正丁醇（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）。

2 含量测定

2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-6]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；甲醇-乙腈-0.1%冰醋酸溶液（20∶40∶40）为流动相，ELSD检测器漂移管温度85℃，气体流速：2.5L·min-1。理论板数按猪去氧胆酸峰计算应不得低于2000。

2.2 供试品溶液的制备

取藿胆滴丸粗粉，精密称取，置索氏提取器中，加甲醇80ml，回流1小时，提取液回收甲醇并浓缩至干，残渣用30毫升纯化水溶解，用二氯甲烷萃取三次，每次30毫升，合并二氯甲烷，水浴蒸干，残渣用甲醇溶液溶解转移至10毫升容量瓶内并分次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取猪去氧胆酸对照品约5毫克，用流动相溶解并稀释成每1ml中含200微克的溶液，作为对照溶液。

2.4 阴性溶液的制备

取藿香油、聚乙二醇（6000），依上述方法测定，结果在猪去氧胆酸出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。

2.5 准曲线的制备

制备浓度为20微克/毫升、50微克/毫升、100微克/毫升、150微克/毫升、200微克/毫升、250微克/毫升、300微克/毫升、350微克/毫升的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（微克）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，猪去氧胆酸对照品在20～350微克/毫升范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

依照2.3项下制备对照品溶液，精密吸取猪去氧胆酸对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.76%。结果表明，本实验精密度良好。

2.7 重现性试验

称取同一批的藿胆滴丸样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.77%，结果表明此方法的重现性良好。

2.8 回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的猪去氧胆酸对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.1%，RSD为0.98%。

2.9 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定藿胆滴丸三批样品中猪去氧胆酸的含量见表1。

3 讨论

分别考察甲醇-乙腈-0.1%冰醋酸溶液（20∶40∶40），乙腈-0.1%磷酸（50∶50），甲醇-乙腈-水（10∶30∶60），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺），0.02mol/L磷酸二氢钠∶甲醇（体积比为15∶85）不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-0.1%冰醋酸溶液（20∶40∶40）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-0.1%冰醋酸溶液（20∶40∶40）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于藿胆滴丸中猪去氧胆酸的含量测定。藿胆滴丸中猪去氧胆酸的含量应为不少于3.5mg/丸。

参考文献

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