液相色谱串联质谱法检测食品中的黄曲霉毒素实践探讨

邢天一

食品安全问题已经受到了人们的广泛关注，因此，这也加强了人们对食品中物质的研究。黄曲霉毒素是食品中致癌能力最强的一种毒素，同时，它具有着很强的生存能力特征，也是影响食品安全的主要物质，为了保证食品的安全，就需要对这种毒素物质进行详细的研究，下面，本文就针对液相色谱串联质谱法检测食品中的黄曲霉毒素实践进行探讨，来研究黄曲霉毒素对食品安全的影响。

1.材料和方法

1.1材料和试剂

材料：市购的花生、玉米、芝麻以及花生核桃乳制饮品、燕麦片。

試剂：黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2混合标准溶液，其中黄曲霉毒素放入B1、G1质量浓度为1μg / m L，B2、G2质量浓度为0.3μg / m L；乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、甲酸（分析纯）、超纯水等。

1.2仪器与设备

对黄曲霉毒素的检测仪器主要是借助6430三重四极杆液质谱联用系统来实现的，这个联用系统配有1200高效液相色谱系统、电喷雾离子源（ESI）及Mass Hunter数据处理软件；另外，主要仪器还包括Mycosep 226真菌毒素净化柱、FA110电子天平、KQ2200E超声波清洗器、Milli-Q 超纯水仪等设备。

1.3仪器参数

仪器参数色谱条件：

色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18 柱（4.6mm×50mm，1.8μm）；流动相为0.1%甲酸溶液-甲醇（60：40）；流速为0.4m L/min；柱温为35℃；进样量：5μL。

仪器参数质谱条件：

离子源为电喷雾离子源；干燥气流速为12mL/min；干燥气温度为350℃；雾化气压力为50psi；毛细管电压为4000V；质量扫描范围为100～500（m/z）；扫描模式为正离子模式；4种黄曲霉毒素的MRM扫描参数为如表：

1.4样品处理

将选择试验的样品各取25g的量，然后将它们分别放入250mL的锥形瓶中，进而再向锥形瓶中加入100mL乙腈-水溶液，快速搅拌3分钟，让它们混合均匀，再将溶液分别通过定性滤纸和Mycosep 226真菌毒素净化柱，这样就得到了相应的净化液，取一定量的净化液通过0.22μm滤膜，进而收集待进样。

2.结果和分析

2.1流动相的选择

黄曲霉毒素具有着自身的特点，它在甲醇和乙腈中溶解度比较高，因此，在对其流动相的选择上就可以分别选用甲醇和乙腈与水混合来进行使用。6430三重四极杆液质谱联用系统使用中，其流动相的选择除了考虑其组分的洗脱能力，还要考虑其质谱中是否能够促进所使用的样品达到要求的标准的离子化效率。通过实验可以证明，乙腈作为流动相时，其洗脱能力是略高于乙醇的，但是其离子化程度却明显不足，因此，在流动相的选择上常用于乙醇。

2.2质谱条件的选择

根据黄曲霉毒素的特征，通过电喷雾离子源可以很好的达到其离子化状态，电喷雾离子源有两种模式，分别为正离子模式和负离子模式，而对于黄曲霉毒素的离子化试验证明正离子模式下其离子化效率比负离子模式下的要高，因此，采用正离子模式来促进四种黄曲霉毒素的离子化状态，进而将M+H作为四种黄曲霉毒素的母离子。

2.3净化小柱的选择

净化小柱的选择也是黄曲霉毒素检测中的一个重要内容，现阶段使用的净化小柱类型主要包括多功能净化柱以及免疫亲和柱两种，在黄曲霉毒素检测中，多功能净化柱是采用复合材料进而实现对蛋白质、色素等吸附，但是黄曲霉毒素是不会被吸附的，因此将样品液体进行净化，得到黄曲霉毒素液体，但是这种方法出了净化速度快，却还存在一定的缺陷，它并不能有效全面的排除杂质，因此，在实际的试验中选择免疫亲和柱方式来进行净化。

2.4线性范围和检测限

针对黄曲霉毒素样品液体，取不同浓度的样液按照选择的色谱条件好质谱条件来进行进样处理，进而将其表现的黄曲霉毒素含量和峰面积分别作为x和y轴进行坐标系的建立，进一步得到相应的线性方程和线性曲线，然后根据3倍和10倍信噪比计算出检出限和定量限。

2.5精密度和回收率

在黄曲霉毒素样品液体的试验中，对于其精密度以及回收率的测定，需要将每一个样品液体中连续进行5次进样，来测量其峰面积，进而计算相对标准偏差，进而衡量样液的精密度，进而利用色谱条件和质谱条件来计算其加标回收率。然后根据黄曲霉毒素标准偏差表和加标回收表来进行对照，其标准偏差要小于5%，回收率要在80%-95%之间，才能说明这个方法的精密度和回收率是可以的。

3.通过液相色谱串联质谱法检测食品中的四种黄曲霉毒素，这种方法首先是用乙醇流动相进行洗脱，进而在正离子模式质谱下进行监测，进而计算出四种黄曲霉毒素的检出限，判断相应食品中的黄曲霉含量，这种方法不仅具有很高的准确性，同时使用简单快速，具有很大的使用优势。

（作者单位：226000江苏省南通市权证检验检测有限公司）