养阴行血方对视网膜光损伤保护作用的动物实验研究

郑 丽

（贵阳中医学院第一附属医院，贵州 贵阳 550001）

・基础研究・

养阴行血方对视网膜光损伤保护作用的动物实验研究

郑 丽

（贵阳中医学院第一附属医院，贵州 贵阳 550001）

目的观察养阴行血方对大鼠视网膜光损伤的保护作用。方法 60只大鼠随机分成三组，实验周期均为1个月。结果 分别测试视网膜中NF-kB、NOS、Caspase-3的含量，养阴行血方组的含量低于其他两组。结论 养阴行血方对视网膜光损伤具有保护作用。

视网膜光损伤；养阴行血方；大鼠

研究认为只要光照时间足够长，视网膜能被周围的自然光及所有的光损伤。视网膜作为形成视觉、接受光能的关键部分，一旦光照强度及时间超过了它的承受范围，就会对它造成光损伤。笔者通过动物实验探索养阴行血方对视网膜光损伤的保护作用，现具体报到如下。

1 对象与方法

1.1 实验动物

选取健康3月龄SD大鼠60只作为研究对象，将其根据随机分组法分为A组为空白对照组、B组为模型对照组、C组为养阴行血方组，各20只。A组正常喂养，B、C组施行光照造模。

1.2 造模

参照Xie Z，Wu X，Gong Y[1]的方法进行造模，将B、C组放入光照箱，光照12 h，再进行暗适应12 h，循环光照2周后开始药物喂养并继续光照。大鼠可在光照箱内自由活动、饮水摄食。

1.3 实验用药与给药途径

实验用药：养阴行血方颗粒（白芍6 g、石斛10 g、茺蔚子6 g、决明子10 g、赤芍6 g、女贞子6 g）；给药途径：按成人与大鼠日剂量比例配成为2 mL的混悬液，一次性灌胃。A组：生理盐水2 ml/d；B组：生理盐水2 ml/d；C组：养阴行血方混浊液2 ml/d。

1.4 观察指标与测试方法

连续循环光照2周造模后给药，给药并继续循环光照2周后，取其视网膜进行免疫组化检查。按照试剂盒的说明严格检测视网膜标本中NF-kB、NOS、Caspase-3的表达。测试方法：各组取视网膜数量应相等。取出视网膜并在其中加入冰细胞裂解液，研磨约3 min至不见组织碎块，冰浴10 min，4℃，15000 r/min，离心10 min，收集上清液-70℃冻存待用。各组取等量上清液根据各试剂盒对应的说明书进行仔细观察并记录。

2 结 果

各组通过多个独立样本非参数检验得知，三组中NF-kB、NOS、Caspase-3各不相同，且含量由少到多依次为A组、C组、B组。见表1。

表1 各组NF-kB、NOS、Caspase-3（RQ值）比较（±s）

表1 各组NF-kB、NOS、Caspase-3（RQ值）比较（±s）

组别 NF-KB NOS Capase-3空白对照组（A） 0.263±0.04 0.298±0.03 0.423±0.04模型组（B） 0.631±0.11 0.724±0.09 0.936±0.13养阴行血方组（C） 0.386±0.06 0.459±0.05 0.575±0.06

3 讨 论

NF-kB：是一个多功能核转录因子，直接参与机体对炎症和免疫反应的调控，并参与新生血管的形成，因此说明它具有广泛的生物学活性。NF-kB在某些病理过程中起关键作用如炎症性视网膜疾病、视网膜光损伤、视网膜新生血管形成等。NOS：L-精氨酸被NOS催化发生氧化反应生成L-胍氨酸和一氧化氮（NO）。其中NO可通过多种途径（如依赖与非依赖 cGMP途径）发挥其复杂的生理学功能。视网膜氧化损伤的重要原因之一是视网膜内一氧化氮合成酶（NOS）被过度光照后其活性持续异常升高；同时它的升高与感光细胞退行性变性的发生关系密切。Caspase-3：Caspase又叫同源半胱氨酸蛋白酶，它是哺乳动物细胞凋亡程序中一类关键的酶。它能在天冬氨酸残基后特异性地裂解靶蛋白。其底物在它们瀑布式活化后被降解，同时一系列细胞骨架蛋白及细胞修复酶等也被裂解，最终导致细胞凋亡；然而Caspase级联反应中最关键的、被称为凋亡步兵的效应蛋白酶就是Caspase-3。RPE细胞光损伤后Caspase-3的表达能在使用重组人促红细胞生成素后明显减少；因此认为Caspase-3的表达被抑制可能是rhEPO抗光损伤诱导的RPE细胞凋亡作用机制之一。结果表明：视网膜光损伤后视网膜中NF-kB、NOS、Caspase-3表达增强，养阴行血方对视网膜的保护机制可能与抑制了视网膜中NF-kB、NOS、Caspase-3的表达密切相关。

[1]Xie Z,Wu X,Gong Y,et al.Intraperitoneal injection of Ginkgo biloba extract enhances antioxidation ability of retina and protects photoreceptors after light induced retinal damage in rats.Curr Eye Res.2007,32(5):471-479

[2]王以饶,等.强光对鲻鱼视网膜的光化学损伤的初步研究[J].安徽农业科学,Journal ofAnhui Agri.Sci.2008,36(9):3682-3684,3693

[3]金 晶.NF-kb的研究进展[J].国际医药卫生导报,2000,10(12):64-65.

R285.5

B

ISSN.2095-8242.2017.063.12294.01

刘欣悦