不同贮藏年限广陈皮对兔离体肠肌运动的影响及祛痰作用研究

刘素娟，王智磊，伍清芳，张鑫，潘欢欢，陈鸿平，刘友平

·药理毒理·

不同贮藏年限广陈皮对兔离体肠肌运动的影响及祛痰作用研究

刘素娟，王智磊，伍清芳，张鑫，潘欢欢，陈鸿平，刘友平

目的：研究比较不同贮藏年限广陈皮对家兔离体肠肌的影响及祛痰作用，探索广陈皮临床使用的最佳贮藏年限。方法：用生物机能分析系统记录不同贮藏年限广陈皮对正常肠肌及加入工具药后肠肌的影响，采集肠肌的振幅与频率，计算出抑制率；小鼠连续7 d灌胃给药，末次给药后30 min，用酚红法检测小鼠的祛痰作用。结果：不同贮藏年限广陈皮对正常肠肌均有明显的促进作用，贮藏1年作用最强，并能使先用阿托品而紧张性降低的兔离体肠肌进一步松弛，振幅进一步减弱。当年、1年、3年、5年广陈皮低剂量组小鼠气道酚红的排泌量均高于蒸馏水对照组及盐酸氨溴索组，且5年广陈皮低剂量组具有显著性差异（p＜0.05）。结论：不同贮藏年限广陈皮对兔离体肠肌运动及祛痰作用存在差异，并以贮藏1年、5年的作用为佳，因此可以根据不同的治疗目的选择不同贮藏年限的广陈皮。

广陈皮；贮藏年限；离体肠肌；祛痰；陈用

陈皮为芸香科植物橘(Citrus reticu1ataB1anco)及其栽培变种的干燥成熟果皮，始载于《神农本草经》，列为上品，具有理气健脾，燥湿化痰之功[1]，临床上主要用于胸脘胀满、咳嗽痰多、少食吐泻。陈皮为中药“六陈”之一，传统中医理论认为陈皮“陈久者良”[2～3]，一般药用以2～3年陈皮为主，道地药材“新会陈皮”贮藏长达数十年[4]。年份越久的陈皮标价越高，因此市场有用新皮充当陈皮销售使用，但是否陈皮越陈越好，目前说法不一[5～8]，针对这一现状，本研究选用道地产区新会陈皮研究不同贮藏年限陈皮的药效是否存在差异，从药效学证实陈皮陈用是否具有一定科学内涵。

1 材料

1.1 动物 普通健康家兔，雌雄兼用，体重2.0-2.5 kg；昆明种健康小鼠，雌雄各半，体重18-25 g，均由四川省达硕实验动物中心提供，许可证号SCXK(川)2015-030。

1.2 仪器

CW-3型显示平滑肌槽（上海继德教学实验器械厂）、BL-420F生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）、压力换能器等；R680酶标仪（上海精科仪器厂）。

1.3 药物

陈皮Citrus reticu1ata B1anco购于广东新会区新宝堂公司，分别取各贮藏年限广陈皮药材粉末，加入8倍量水，回流提取1.5 h，过滤，滤渣加入6倍量水回流提取1 h，合并滤液，浓缩至0.8 g⋅mL-1，一部分分别稀释成0.4 g⋅mL-1、0.5 g⋅mL-1药液，冰箱冷藏备用；1×10-5g⋅mL-1氯化乙酰胆碱溶液（上海三爱思试剂有限公司生产，批号20061130）；0.5 mg⋅mL-1阿托品注射液（山东天福制药厂，批号0909271）；台式液（每1000 mL台式液含氯化钠8 g，氯化钾0.2 g，七水硫酸镁0.26 g，磷酸二氢钠0.065 g，碳酸氢钠1 g，氯化钙0.2 g，葡萄糖1 g）；盐酸氨溴索注射液（Boehringer Ingelheim Espana，S.A.公司生产，批号527251）。

2 方法

2.1 不同贮藏年限广陈皮对兔离体肠肌运动的影响

取家兔猛击其头枕部致昏，迅速剖开腹腔，取近幽门端十二指肠，置冷台氏液中。沿肠壁剪去肠系膜，将肠管剪成1.5-2 cm的小段备用。调节恒温平滑肌槽，使水温保持在 ( 37±0.5)℃。将压力换能器与BL-420F 生物机能实验系统连接。取兔肠一段，两端各穿一线，其中一线固定于L型通气管上，放入有50 mL台式液的浴槽内，固定L型同器官，并调节恒温平滑肌槽，缓慢通入气泡( 2个气泡/s) 。肠肌另一端与压力换能器相连，加1 g负荷，打开BL-420F生物机能试验系统，待肠肌运动恢复正常后，记录一段肠管正常活动曲线，开始滴加给药。采用分离加药的方法，即加入一种被检药液后观察5 min，然后用37℃的台式液多次冲洗，待肌条的活动基本恢复稳定后（相隔至少20 min）再加入另一种药。加入工具药3 min后再加入被检药液。加入被检药液的量均为0.2 mL，药液的浓度指溶于肌槽中50 mL台式液后的最终浓度。

2.2 不同贮藏年限广陈皮祛痰作用研究

昆明种小鼠144只，随机分为12组，每组12只，分别为蒸馏水空白组、盐酸氨溴索组、不同贮藏年限高剂量组（0.8 g⋅mL-1）、低剂量组（0.4 g⋅mL-1）。给药组分别按表所列剂量灌胃给药（0.2 mL/10g）、空白组给予等量蒸馏水，每日一次，连续灌胃7 d。末次给药前各组小鼠禁食12 h、末次给药后30 min，小鼠腹腔注射5%酚红溶液0.1 mL/10g，30 min后脱颈椎处死动物，暴露气管，剥去气管周围组织，剪下自甲状软骨下至支气管分支处的一段气管，浸入盛有2 mL5%NaHCO3溶液的试管中，振摇并放置过夜，以将其中的酚红充分洗出，3000 r⋅min-1离心10min，得到透明上清液，546 nm处测定OD值。

3 统计学分析

以正常肠肌或给予工具药（氯化乙酰胆碱溶液和硫酸阿托品溶液）后的收缩平均振幅与频率之乘积与给药后各段肠肌的收缩平均振幅与频率之乘积之差，再与正常肠肌或给予工具药后的肠肌收缩平均振幅与频率之乘积之比计算抑制率。应用SPSS21.0软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差表示，符合正态分布用单因素方差分析或独立样本t检验，不符合正态分布采用非参数检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

4 结果

4.1 不同贮藏年限广陈皮对兔离体肠肌运动的影响

实验结果见表1-3。表1结果表明，不同贮藏年限对肠肌表现均为促进作用，1年广陈皮的作用最强，2、3、5年之间没有显著性差异。表2结果表明，2年广陈皮可拮抗乙酰胆碱引起的兔离体十二指肠痉挛性收缩，其余可进一步增强乙酰胆碱引起的离体肠肌收缩强度。不同组别差异不显著。表3结果表明，1年能使先用阿托品而紧张性降低的兔离体肠肌进一步松弛，振幅进一步减弱，说明1年能协同阿托品对兔离体小肠的抑制作用。其余组别对阿托品引起的兔离体肠机松弛作用呈现拮抗作用，5年作用最强。

表1 不同贮藏年限对正常家兔离体肠肌运动的影响(±s，n=3)

表1 不同贮藏年限对正常家兔离体肠肌运动的影响(±s，n=3)

组别浓度抑制率（%）1年3.33-188.90±0.67 2年3.33-35.88±0.19*

注：各组与1年比较，*P＜0.05

表2 不同贮藏年限对乙酰胆碱致家兔离体肠肌收缩的影响(±s,n=3)

表2 不同贮藏年限对乙酰胆碱致家兔离体肠肌收缩的影响(±s,n=3)

组别浓度抑制率（%）1年3.33-0.43±0.18 2年3.3315.27±0.37 3年3.33-30.56±014 5年3.33-39.44±0.44

表3 不同贮藏年限对阿托品致家兔离体肠肌舒张的影响(±s,n=3)

表3 不同贮藏年限对阿托品致家兔离体肠肌舒张的影响(±s,n=3)

注∶各组与5年比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别浓度抑制率（%）1年3.331.32±0.28*2年3.33-2.41±0.15*3年3.33-9.55±0.03*5年3.33-42.9±0.04

4.2 祛痰作用

由表4知，当年、1年、3年、5年低剂量酚红排泌量高于蒸馏水及阳性组，且5年低剂量具有显著性差异。除当年高低剂量组外，其他组高低剂量间差异不显著。不同贮藏年限之间比较，5年低剂量与1年、2年具有显著性差异，与当年、3年低剂量不显著。可见，当年广陈皮低剂量、3年广陈皮低剂量与5年广陈皮低剂量相比其他组，有较好的祛痰作用。

表4 不同贮藏年限广陈皮对小鼠气管酚红排泌量的影响(±s,n=12)

表4 不同贮藏年限广陈皮对小鼠气管酚红排泌量的影响(±s,n=12)

注：给药组与空白比较，aP＜0.05，与阳性组比较，bP＜0.05。

组别剂量（g⋅kg -1）气管酚红排泌量/A蒸馏水--0.30±0.09盐酸氨溴索0.030.32±0.07当年广陈皮高剂量160.25±0.06低剂量80.36±0.06 1年广陈皮高剂量160.30±0.05低剂量80.34±0.13 2年广陈皮高剂量160.30±0.07低剂量80.28±0.04 3年广陈皮高剂量160.28±0.01低剂量80.36±0.12 5年广陈皮高剂量160.29±0.04低剂量80.46±0.20ab

5 讨论

本研究结果表明不同贮藏年限陈皮对正常离体肠肌均表现为促进作用，使振幅和频率进一步增大。使用阿托品后贮藏1年陈皮可使肠肌进一步松弛，其余年限则表现为收缩强度增大，这与前人研究结果不尽一致[9～10]，但也有研究表明陈皮水煎液在使用阿托品后，能提高收缩强度[11]，陈皮提取物对在体动物胃肠动力具有促进作用，而对离体肠管有一定的抑制作用[12]。可见陈皮对胃肠道运动表现为双向调节作用，即促进和抑制作用。陈皮随着贮藏年限增加，挥发性成分香茅醛等成分逐渐消失[13]，且其中的香茅醛与胃肠道运动密切相关[14]，本研究结果显示陈皮随着贮藏年限增加，促进作用减弱，说明正是陈皮中挥发性成分在贮藏过程散失，导致药效的减弱。但贮藏5年陈皮的作用比2、3年要强，这可能是陈皮在长久的贮藏过程中，黄酮类成分含量逐渐升高[15]，药效物质组分比例的缓慢改变，使得药效发生了改变，也说明陈皮对胃肠道的作用不仅仅以挥发性成分为基础，也可能与黄酮类等其他成分有关。

对不同贮藏年限祛痰作用研究，证实陈皮确有祛痰作用，当年、1年、3年祛痰作用相当，以5年祛痰作用为佳。与他人研究结果一致[16]。研究报道随贮藏时间延长，陈皮中柠檬烯含量下降明显[15]，而此成分与祛痰作用密切相关[14]，说明随着贮藏年限增加，陈皮的祛痰作用理应降低，但本研究却表明陈皮祛痰作用在增强，可能祛痰作用的药效物质基础并不仅仅是柠檬烯，是多成分综合作用的结果，而不是单一成分作用的结果。

结合离体肠肌及祛痰作用的结果，看出不同贮藏年限陈皮药效确实存在差异，1年与5年之间的差异最显著，其中，1年广陈皮对离体肠肌作用比其他年限强，祛痰作用5年广陈皮比其他年限较佳。说明陈皮陈久者良具有一定的科学道理。因此可以根据临床需求选用不同贮藏年限的陈皮，而对于陈皮究竟是否陈用的研究应不仅仅局限于某一单体成分，而是从中药的整体性出发，对中药指纹图谱与药效即谱效关系深入研究，阐释陈皮陈用的科学内涵。

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Study of the influence on contractile activity of rabbit intestinal muscle in vitro and expectorant action of Guang Chenpi of different storage period

/LIU Su-juan, WANG Zhi-lei, WU Qing-fang, ZHANG Xin, PAN Huan-huan, CHEN Hong-ping, LIU You-ping//(School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:The study compared the effect of Guang Chenpi of different storage period on rabbit intestinal musclein vitroand expectorant action, to explore the best storage period of Guang Chenpi for wide clinical use.Method:In vitrointestinal muscle experiment was carried out with biological function analysis system recording the in fluence of Guang Chenpi on normal intestinal muscle and the effect after the addition of tool drug. The amplitude and frequency of intestinal muscle were collected to calculate the inhibition rate. Mouse was intragastricly administered of drug for seven days. 30 min after the last treatment, the phenol red method was used to investigate the expectorant action in mice.Result:Guang Chenpi of different storage time promoted the activity of normal intestinal muscle and the medicine stored for 1 year showed the strongest effect, and relaxed the isolated rabbit intestinal muscle after atropine use,which according further reduced the amplitude. The phenol excretions in mice airway of Guang Chenpi low dose group of storage time (0, 1,3, 5 years) were higher than that of distilled water group and Ambroxol hydrochloride group. And 5 years Guang Chenpi group showed significant difference (P ＜ 0.05).Conclusion:Guang Chenpi of different storage periods show different effect on isolated rabbit intestinal muscle movement and different expectorant effects. And Chenpi of 1 and 5 years storage year show the best effect. We can choose Guang Chenpi of different storage time according to different therapeutic purpose.

Guang Chenpi; storage period;in vitrointestinal muscle; expectorant effect; use after stroage

R285.5

A

1674-926X(2017)06-013-04

国家自然科学基金委国家基础科学人才培养基金（J1310034-14）；四川省科技厅应用基础项目（2015JY0012）：川产大宗药材川陈皮快速、 无损模式识别及品质评价模型研究

成都中医药大学药学院，四川 成都 610075

刘素娟，女，在读硕士，主要从事中药化学成分与质量标准化研究Tel∶13730874707 Email∶1521153620@qq.com

陈鸿平，女，副教授，主要从事中药炮制、中药质量标准化及药效物质基础研究工作Tel∶028- 61800103 Email∶397373340@qq.com

2016-05-01

（责任编辑：陈思敏）