基于IgG抗A（B）效价梯度及动态差值探讨ABO—HDN病情相关性

沈健++施欣蔚++陈秉宇++王震

[摘要] 目的 探讨动态监测IgG抗A（B）效价梯度与ABO-HDN病情严重程度临床指标的相关性。 方法 选取2017年1～5月间47例ABO溶血病患儿临床资料进行统计分析，记录患儿出生后32 h的血清总胆红素（serum total bilirubin，STB32h）、血红蛋白（hemoglobin，Hb）、网织红细胞百分比（the percentage of reticulocyte，Ret%）及孕妇第16和37周IgG抗A（B）效价梯度。比较各组新生儿临床指标和lgG抗A（B）效价的相关性。 结果 STB32h与37周IgG抗A（B）效价梯度、IgG抗A（B）37-16梯度差呈正相关（P<0.001）；Hb与第37周IgG抗A（B）效价梯度呈负相关（r2=0.2074，P=0.0013）；Hb与IgG抗A（B）37-16梯度差值呈负相关（r2=0.1831；P=0.0027）；Ret%与37周IgG抗A（B）效价梯度、IgG抗A（B）37-16梯度差值呈正相关（P<0.001）。 结论 产前37周IgG抗A（B）效价梯度、IgG抗A（B）37-16效价梯度差值与新生儿ABO-HDN的病情严重程度具有一定相关性。

[关键词] ABO溶血病；STB32h；IgG抗A（B）效价；IgG抗A（B）37-16效价梯度差

[中图分类号] R725.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2017）29-0035-03

Exploration of the correlation of ABO-HDN disease based on IgG anti-A（B）potency gradient and dynamic difference

SHEN Jian1，2 SHI Xinwei3 CHEN Bingyu1，2 WANG Zhen1，2

1.Department of Blood Transfusion， Zhejiang Provincial People's Hospital， People's Hospital of Hangzhou Medical College， Hangzhou 300014， China； 2.Operating Room， Zhejiang Provincial Ophthalmologic Hospital， Hangzhou 300014， China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between dynamic monitoring of IgG anti-A （B）potency gradient and clinical indexes of ABO-HDN severity. Methods A total of 47 patients with ABO hemolytic disease from January to May 2017 were analyzed statistically. The serum total bilirubin（STB32 h）， hemoglobin（hemoglobin， Hb） and the percentage of reticulocyte（Ret%） at 32 h after birth of children， and the 16th and 37th week IgG A（B） potency gradient in pregnant women were recorded. The neonatal clinical indicators and anti-A（B） titers in newborns of each group were compared. Results There was a positive correlation between STB32h and the 37-week IgG A（B）titer gradient， IgG A（B）37-16 gradient difference（P<0.001）. Hb was negatively correlated with the 37th week IgG A（B） potency gradient（r2=0.2074， P=0.0013）. Hb was negatively correlated with IgG A（B）37-16 gradient difference（r2=0.1831， P=0.0027）. Ret% was positively correlated with the IgG A（B） potency gradient at 37th week and IgG A（B）37-16 gradient difference（P<0.001）. Conclusion The IgG anti-A（B） potency gradient at 37 weeks before delivery and IgGA（B）37-16 potency gradient difference have a certain correlation with the severity of neonatal ABO-HDN.

[Key words] ABO hemolytic disease； STB32h； IgG anti-A（B） titer； IgGA（B）37-16 potency gradient difference

新生兒溶血病（heamolytic disease of the fetus and the newborn，HDN）主要是妊娠过程中胎儿的血液通过胎盘与母体发生血液循环，从而母体针对父源显性血型抗原产生相应免疫抗体，最终导致细胞膜溶解，红细胞破坏、崩解进一步影响或损伤胎儿[1]。有研究调查表明现阶段在我国约有85%的新生儿溶血病是由于母婴ABO血型不合而产生的[2-4]。在ABO-HDN临床预防和治疗过程中，我们均选用孕妇血型IgG抗A（B）效价梯度来预示ABO-HDN发病率高低[5]。国内相关研究[6]进一步提出产前动态监测O型血孕妇IgG抗A（B）抗体效价更有利于预示新生儿ABO-HDN是否发病，本文认为这结论是正确可行的，但同时也不能忽视产前第37周IgG抗A（B）抗体效价梯度预示新生儿ABO-HDN病情严重程度的重要性。因此，本次研究对47例O型血孕妇进行产前IgG抗A（B）抗体效价的连续动态监测，并分析产前IgG抗A（B）抗体效价梯度和动态差值与新生儿ABO-HDN病情严重程度之间的相关性。endprint

1 资料与方法

1.1 研究對象

1.1.1 入选标准 初筛2017年1～5月间于浙江省人民医院出生并收治的47例O型孕妇，孕妇身体状况良好，无输血史，平均年龄（24.83±4.56）岁；其中O型孕妇在第16周和第37周抽EDTA抗凝静脉血5 mL，检测孕妇第16、37周产前IgG抗A（B）效价后，对O型血孕妇进行二次筛选。

1.1.2 排除标准[7] ①排除妊娠期存在宫内窘迫、窒息的孕妇；排除存在巨细胞病毒感染、乙肝e抗原阳性、丙肝抗体阳性等感染性疾病的孕妇；排除存在肝功能异常、低蛋白血症等肝、肾、血液系统等方面疾病的孕妇；排除存在Rh溶血病、G-6-PD缺乏症等溶血方面疾病的新生儿；②O型血孕妇分娩后新生儿确诊为ABO-HDN，记录患儿3个ABO-HDN病情临床指标：STB32h、Hb、Ret%；③孕妇第16周产前IgG抗A（B）效价<1∶64，第37周产前IgG抗A（B）效价≥1∶64，梯度相差越大优先纳入研究。

1.2 研究方法

1.2.1 O型血孕妇产前IgG抗体效价检测 具体操作为：①700 μL的10 mM的DTT与100 μL的孕妇静脉血清混匀密封后，37℃水浴0.5 h，充分破坏血清中血型IgM类抗体，使用标准血清作为对照；②将水浴破坏IgM类抗体后孕妇血清进行倍比稀释成10管，试管上标记为1～10，等同于孕妇IgG抗体效价梯度。利用微柱凝胶法进行检测，若红细胞未沉降到凝胶卡底部判为阳性，以最后一个阳性孔作为孕妇IgG抗体效价梯度的结果。本次研究检测孕妇第16周和第37周产前IgG抗A（B）效价后换算为效价梯度，IgG抗A（B）37-16梯度差值=IgG抗A（B）37w梯度-IgG抗A（B）16w梯度。见表1。

1.2.2 新生儿溶血病三项试验 ①新生儿直接抗人球蛋白试验：利用生理盐水制备1%浓度新生儿红细胞悬液50 μL，利用微柱凝胶法进行检测，若红细胞没有沉降到凝胶卡底部判为新生儿直接抗人球蛋白试验阳性。②标本制备：将1 mL洗涤后的患儿红细胞与等量6%小牛血清牛蛋白混合后，56℃水浴振摇8 min，立即用水平离心机2200 r/min离心2 min，吸出红色上清液作为该次实验的放散液。③放散试验和游离试验：取25 μL放散液加入微柱凝胶卡中，编号1、2、3；同时取25 μL患儿血清加入微柱凝胶卡中，编号4、5、6，在微柱凝胶孔中分别加入1滴0.8%的A、B、O型标准红细胞悬液，孵育离心，若红细胞未沉降到凝胶卡底部判为阳性。具体方法和试验阳性判断参照《全国临床检验操作规程》[8]。

1.3 新生儿溶血病诊断标准[9]

①存在母婴ABO血型不合。②黄疸出现早，加深快，可伴有贫血、肝脾肿大、水肿。③网织红细胞计数和百分比显著升高。④直接抗人球蛋白实验阳性。⑤排除其他原因引起的黄疸、贫血。①～⑤条均符合者则确诊为新生儿ABO溶血病；第④条为阴性，其余4条均符合者则临床诊断为新生儿ABO溶血病。

1.4 统计学方法

采用GraphPad Prism 5统计学软件进行数据分析。符合正态分布的计量资料以（x±s）表示，两因素间的相关性分析采用直线相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料

47例O型孕妇平均年龄（24.83±4.56）岁；STB32h平均（283.59±59.48）μmol/L；Hb平均（137.90±15.98）g/L；Ret平均（8.44±2.06）%；IgG抗A（B）37w梯度（6.91±1.43）；IgG抗A（B）37-16梯度差值[IgG A（B）37w梯度-IgG A（B）16w梯度]（3.57±1.75）。见表2。

2.2 临床指标相关性比较

STB32h、Hb、Ret%，并与IgG抗A（B）37w梯度、IgG抗A（B）37-16梯度差值进行相关性比较，差异有统计学意义。说明IgG抗A（B）37w梯度和IgG抗A（B）37-16梯度差值能较好地预示患儿ABO-HDN的病情严重程度。见表3。

3 讨论

ABO-HDN主要是由于父源ABO血型基因的存在导致母婴血型不合的免疫反应。胎儿从父亲遗传而产生的ABO血型抗原恰为孕妇血液中所缺少的，在妊娠后期，母体因胎儿ABO血型抗原不合被致敏产生相应的IgM抗体和少量的IgG抗体，导致部分新生儿发生溶血[10-11]。ABO-HDN发病率会随着IgG抗体效价的升高相应增加[12-13]，Fasano RM等[14]研究显示当孕妇IgG抗A（B）效价小于1∶64 时，新生儿很少发生HDN，而当孕妇IgG抗A（B）效价大于或等于1∶512时，HDN发生率高达100%。因此我们比较一致的观点认为：监测O型血孕妇产前IgG血型抗体效价可以预测HDN的风险[15]。但在实际临床检测和咨询中明确认为：动态检测孕妇血型IgG抗A（B）效价梯度差值能够更好预测ABO-HDN的发病率。但在预示ABO-HDN的病情严重程度方面，相关研究[6]没有进一步谈论动态检测孕妇IgG抗A（B）效价梯度差值和第37孕周的孕妇IgG抗A（B）效价梯度孰强孰弱？本文就此提出假设：是否动态检测孕妇IgG抗A（B）效价梯度差值越大，预示ABO-HDN病情严重程度及随之发生的贫血、黄疸、肝脾大、胆红素脑病及水肿等症状也越严重[16-18]，且该数值是否比第37孕周的孕妇IgG抗A（B）效价梯度能够更好地预示ABO-HDN病情严重程度？本文以患儿出生后STB32h、Hb、Ret%这三个临床指标与第37孕周的孕妇IgG抗A（B）效价梯度和孕妇IgG抗A（B）效价梯度差值比较后进而讨论如下。

本研究说明三点：第一，临床医生评估ABO-HDN的病情严重程度一般基于上诉三个指标，我们发现上述指标两两均有一定的相关性，见表1。STB32h和Ret%临床指标与第37周IgG抗A（B）效价梯度、IgG抗A（B）37-16梯度差呈正相关（P<0.001）；而Hb与第37周IgG抗A（B）效价梯度和IgG抗A（B）37-16梯度差呈负相关（P<0.05）。第二，有文献[6]表明动态监测孕妇IgG抗A（B）效价梯度差值比固定孕周的孕妇IgG抗A（B）效价梯度更能预示ABO-HDN的发病率。但是从表2可知，第37周IgG抗A（B）效价梯度比IgG抗A（B）37-16梯度差值对临床病情三个指标（STB32h、Hb、Ret%）的相关性更高，离散度更小，说明在临床病情严重程度上第37周IgG抗A（B）效价梯度比IgG抗A（B）37-16梯度差值预示效果更好。第三，新生儿ABO溶血病引起的临床表现以黄疸和贫血为主，黄疸出现时间早，可迅速进展为重度甚至极重度高胆红素血症[19]，贫血发生率、输血率和合并感染率均较高[20]，且新生儿ABO溶血病引起的黄疸多在生后48～72 h出现[19]。因此我们选择STB32h、Hb、Ret%三个指标来体现新生儿ABO-HDN的临床病情严重程度，在本次研究中具有一定的可行性。为了提高诊断的准确性，某些医院建议O型血孕妇且夫妻血型不合应在孕期第16、28、36周各作1次IgG抗A（B）效价测定[21]，动态监测IgG抗A（B）效价梯度差值能更好预示ABO-HDN发病率[6]。但就本次研究统计而言，从预示ABO-HDN病情的严重程度方向来说，本文首次以数据论证第37孕周的孕妇IgG抗A（B）效价梯度比动态监测IgG抗A（B）效价梯度差值预示ABO-HDN病情严重程度的效果更好，而这是以往研究ABO-HDN没有明确提出的[5-6，15，20-21]。endprint

综上所述，对于ABO-HDN发病率可以采用动态监测孕妇IgG抗A（B）效价梯度差值，而第37孕周的孕妇IgG抗A（B）效价梯度能够更好地预示ABO-HDN病情严重程度。两个数据相互结合能够对ABO-HDN发病率和病情严重程度有个更全面的判断。

[参考文献]

[1] 邹英杰，李志飞.母孕晚期不同抗体滴度对新生儿ABO溶血病的预测价值[J].中国乡村医药，2015，（5）：29-30.

[2] Drabik-Clary K，Reddy VV，Benjamin WH，et al. Severe hemolytic disease of the newborn in a group B African-American infant delivered by a group O mother[J].Annals of Clinical & Laboratory Science，2006，36（2）：205-207.

[3] Jeon H，Calhoun B，Pothiawala M，et al. Significant ABO hemolytic disease of the newborn in a group B infant with a group A2 mother[J]. Immunohematology，2000，16（3）：105-108.

[4] Cathie IAB. Haemolytic disease of newborn[J]. Indian Journal of Pediatrics，2001，68（2）：167-172.

[5] 范崇梅.“O”型孕妇产前血清IgG抗A（B）抗体效价与新生儿溶血病的关系[J].检验医学与临床，2009，6（2）：94-95.

[6] 梅梦寒，谢一唯，陈秉宇.动态监测O型血孕妇产前血清IgG抗A（B）抗体效价与新生儿溶血病的关系[J].全科医学临床与教育，2013，（5）：555-557.

[7] 沈健，施欣蔚，李凯强.基于妊娠次数探讨新生儿ABO溶血病实验数据分析[J].中国现代医生，2016，54（35）：71-74.

[8] 尚紅，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程（第4版）[D].北京：人民卫生出版社，2015：50-58.

[9] 金汉珍，黄德珉，官希吉.实用新生儿学[M].第3版.北京：人民卫生出版社，2003：233-235.

[10] Lindenburg IT，Smitswintjens VE，Van Klink JM，et al. Long-term neurodevelopmental outcome after intrauterine transfusion for hemolytic disease of the fetus/newborn：The LOTUS study[J]. American Journal of Obstetrics & Gynecology，2012，206（2）：1-8.

[11] 白英明，赖福才，王梁平，等.血型不合夫妇孕妇产前新生儿溶血病特异性抗体效价的评估[J]. 广东医学，2009， 30（7）：1142-1144.

[12] 陶华.产前检测抗体预防母儿ABO血型不合新生儿溶血病259例临床观察[J]. 中国妇幼保健，2011，26（20）：3085-3087.

[13] Hadley AG. Laboratory assays for predicting the severity of haemolytic disease of the fetus and newborn[J]. Transplant Immunology，2002，10（3）：191-198.

[14] Fasano RM. Hemolytic disease of the fetus and newborn in the molecular era[J]. Seminars in Fetal & Neonatal Medicine，2016，21（1）：28-34.

[15] 周雄飞，郑君，毛开新. ABO新生儿溶血病与O型血孕妇孕中期血清IgG抗A（B）抗体效价的关系分析[J].实用临床医药杂志，2015，19（1）：85-88.

[16] 许进明，周小玉，华岚，等.孕产妇血型抗体效价测定在产前诊断中的意义[J]. 临床血液学杂志，输血与检验，2009，22（5）：515-517.

[17] Palfi M，Selbing A. Placental transport of maternal immunoglobulin G[J]. American Journal of Reproductive Immunology，1998，39（5）：323-328.

[18] Lambin P，Debbia M，Puillandre P，et al. IgG1 and IgG3 anti-D in maternal serum and on the RBCs of infants suffering from HDN：Relationship with the severity of the disease[J]. Transfusion， 2010，42（12）：1537-1546.

[19] 张新利，肖昕.新生儿高胆红素血症与脏器损害[J].中国新生儿科杂志，2007，22（4）：254-256.

[20] 古丽，黄薇，董文斌.血型及首次出现黄疸时间与新生儿ABO溶血病的相关性[J]. 西部医学，2016，28（3）：385-388.

[21] 李菁，郑英，陈小鹏，等. O型孕妇产前IgG血型抗体效价与新生儿溶血病的相关性[J]. 现代生物医学进展，2017，17（9）：1747-1749.

（收稿日期：2017-07-12）endprint