单铁强,单铁英,董 静,潘秀兰,赵沙河,王鸣飞,韩艳珍,袁 征,郑海萍
枸杞多糖对脑胶质瘤病人免疫调节作用及预后的影响
单铁强1,单铁英2,董 静3,潘秀兰2,赵沙河4,王鸣飞5,韩艳珍2,袁 征2,郑海萍2
目的探讨枸杞多糖(LBP)对脑胶质瘤病人的免疫功能及预后的影响。方法将60例经手术后病理确诊的恶性脑胶质瘤病人,随机分为对照组和试验组。对照组术后2周开始肿瘤放疗,疗程6周,放疗引起的不良反应给予常规对症处理;试验组在对照组治疗基础上服用枸杞多糖6 mg/(kg·d)。采用流式细胞术检测两组病人外周血中免疫效应细胞:CD4+T细胞和CD8+T细胞变化;ELISA法检测两组病人血清细胞因子:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-2(IL-2)水平变化;比较两组病人肿瘤复发率和中位生存期。结果与对照组比较,试验组病人外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞数量增加,血清TNF-α和IL-2含量增多,差异有统计学意义(Plt;0.05);与对照组比较,试验组脑胶质瘤病人2年和3年肿瘤复发率降低,病人生存率提高(Plt;0.05)。结论枸杞多糖可提高脑胶质瘤病人机体的免疫功能,增强病人抗肿瘤的能力,且能降低肿瘤的复发率,提高病人的生存率。
脑胶质瘤;枸杞多糖;免疫细胞;细胞因子;肿瘤复发率;生存期
脑胶质瘤是中枢神经系统常见的原发性肿瘤,具有恶性程度高、生长速度快和向周围组织呈浸润性生长的病理特点。手术治疗后易复发,致死率、致残率均较高。因此,寻找新的有效药物及治疗方法尤为重要。
枸杞子属于传统中药材,枸杞多糖(lycium bara rum polysaccharides,LBPs)是其主要成分之一。已有实验结果显示,LBPs对机体的免疫功能具有显著增强作用,达到有效地抗肿瘤目的,它能调节机体自身免疫系统功能,改善免疫功能同时达到杀伤肿瘤细胞目的[1]。目前LBPs通过增强机体的免疫调节作用杀伤肿瘤细胞的机制尚不明确。本研究观察LBPs对脑胶质瘤病人的免疫功能调节作用,为临床预防和治疗脑胶质瘤提供理论和依据。
1.1 一般资料 选择河北工程大学附属医院2011年1月—2012年6月恶性脑胶质瘤病人30例为对照组,女14例,男16例,年龄22岁~68岁,平均45岁;选择2012年7月—2013年1月恶性脑胶质瘤病人30例为试验组,女12例,男18例,年龄23岁~69岁,平均年龄46岁。两组病人术后病理诊断为恶性脑胶质瘤,且经CT或MRI确诊为术后肿瘤残存,Karnofsky评分为70分。两组病人性别、年龄、肿瘤分型及残留部位等比较,差异无统计学意义(Pgt;0.05)。对照组病人经手术治疗后2周进行放射治疗,治疗时间8周;放射治疗期出现的不良反应采用常规对症处理如保肝、止吐等。试验组在对照组治疗基础上增加口服枸杞多糖,浓度为100 μg/mL,6 mg/(kg·d)。
1.2 研究药物 枸杞多糖(LBP)由华北制药集团新药研究开发中心分离纯化,纯度gt;96%;肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-2(IL-2)ELISA试剂盒购自美国abcam公司;鼠抗人CD4+单克隆抗体,鼠抗人CD8+单克隆抗体购自BD公司。
1.2.1 CD4+T细胞和CD8+T细胞检测 治疗第4周和第8周时,分别抽取两组病人空腹静脉血,使用肝素抗凝,加入不同荧光标记的单克隆抗体各10 μL,放入室温孵育15 min,加入红细胞裂解液,以磷酸缓冲盐溶液(PBS)洗涤2次后采用流式细胞仪检测。测定5 000个细胞,记录CD4+T细胞和CD8+T细胞分别占淋巴细胞的百分比。
1.2.2 TNF-α和IL-2含量检测 治疗第4周和第8周时,分别抽取两组病人空腹静脉血,使用ELISA试剂盒,严格按照说明书,测定两组病人血清TNF-α和IL-2含量。
1.2.3 肿瘤复发率和中位生存期 比较两组病人1年、2年、3年肿瘤复发率和中位生存期变化。
2.1 两组病人血清TNF-α和IL-2比较 治疗第4周和第8周时,试验组脑胶质瘤病人血清IL-2和TNF-α含量明显增加,与对照组比较,差异有统计学意义(Plt;0.05)。详见表1。
组别 第4周 TNF-αIL-2 第8周 TNF-αIL-2对照组1.04±0.137.04±0.211.00±0.166.92±0.36试验组4.37±0.271)19.16±1.261)4.24±0.231)19.05±1.851) 与对照组比较,1)Plt;0.05。
2.2 两组病人外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞数量比较 治疗第4周和第8周时,试验组病人CD4+T细胞和CD8+T细胞数量明显升高,差异有统计学意义(Plt;0.05)。详见表2。
组别 第4周 CD4+T细胞CD8+T细胞 第8周 CD4+T细胞CD8+T细胞对照组36.37±4.3228.97±3.2935.29±5.2727.80±5.67试验组39.37±0.891)32.27±2.361)38.42±3.431)31.18±0.891) 与对照组比较,1)Plt;0.05。
2.3 两组病人肿瘤生存率和复发率比较 与对照组比较,试验组脑胶质瘤病人2年和3年肿瘤复发率明显降低;3年和5年生存率明显提高(Plt;0.05)。两组病人1年肿瘤复发率和生存率比较,差异无统计学意义(Pgt;0.05)。详见表3、表4。
表3 两组病人肿瘤复发率比较 例(%)
表4 两组病人肿瘤生存率比较 例(%)
脑胶质瘤传统治疗方法为手术切除、术后放疗和化疗,虽然手术切除后,暂缓肿瘤的压迫症状,但手术治疗后易复发,致死率、致残率均较高。肿瘤病人接受手术治疗后进行化疗药物和放射治疗,损伤和抑制病人机体的免疫系统,导致病人免疫功能下降,不仅获得不良的治疗效果,还可能发生一些不良反应。因此,治疗肿瘤关键是解决肿瘤病人机体的免疫功能低下。
近代药理研究表明,LBP可增强机体的免疫功能,无论是对机体体液免疫还是对细胞免疫[1-5]。本研究观察LBP对脑胶质瘤病人外周血免疫功能调节的作用。免疫细胞如CD4+T细胞和CD8+T细胞在机体外周血中比例及细胞因子在血清中含量,均可反映机体免疫功能强弱。机体的抗肿瘤免疫主要依靠T淋巴细胞介导的细胞免疫,血液中发挥功能T淋巴细胞分为两个亚群CD4+T细胞和CD8+T细胞,而CD8+T细胞是在CD4+T细胞辅助和其产生的大量细胞因子作用下才能杀伤肿瘤细胞。有研究结果表明:肿瘤病人外周血中,当CD8+T细胞和CD4+T细胞在外周血所占比例减少时,机体抗肿瘤免疫应答降低,有利于肿瘤发生。CD4+T细胞是一群具有调节体液和细胞介导免疫功能细胞,分为Th1型和Th2型细胞。Th1型细胞释放白介素-2和干扰素-γ(IFN-γ),参与细胞介导的免疫反应,Th2细胞释放白介素-4、5、10,参与体液介导的免疫反应。CD8+T细胞是细胞毒性T细胞,对机体内肿瘤细胞具有杀伤作用。成熟的CD8+T细胞激活后表达Fas配体(FasL),它们与Fas配结后诱导表面Fas分子发生三聚化,之后与传导分子结合,由后者聚集并激活半胱天冬蛋白酶-8(caspase-8)杀伤瘤细胞,Fas途径认为是杀伤靶细胞主要方式[6-9]。本研究结果显示,经LBP治疗第4周和8周时,试验组脑胶质瘤病人外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞比例增加,与对照组比较差异有统计学意义(Plt;0.05)。说明LBP可明显增加病人外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞数量,有利于机体对肿瘤细胞起到杀伤作用。
细胞因子IL-2在机体免疫功能的调节起重要作用[10-12],IL-2能增强外周血中免疫细胞如单核细胞产生大量TNF-α,达到杀伤肿瘤细胞目的。IL-2能激活淋巴因子活化的杀伤细胞(LAK细胞)和自然杀伤细胞(NK细胞),NK细胞激活后能释放IFN-γ和其他细胞因子杀伤瘤细胞。LAK细胞不但杀伤机体新出现的肿瘤细胞,且也杀伤不同种类的肿瘤细胞[13-16]。TNF-α除对肿瘤细胞直接杀伤作用外,TNF-α在CD8+T细胞成熟为效应T细胞,转化为记忆性T细胞过程中起重要作用。TNF-α含量减少时发生效应性CD8+T细胞数量下降,使其不转化为记忆性T细胞,这些结果表明,TNF-α不仅对肿瘤细胞具有直接杀伤作用,还可通过增强CD8+T细胞作用抑制肿瘤细胞生长。有研究结果表明,LBP治疗第4周和8周时,试验组脑胶质瘤病人外周血TNF-α和IL-2含量增加,有利于杀伤肿瘤细胞。
本研究中对照组和经枸杞多糖治疗组的1年复发率和生存率,差异无统计学意义(Pgt;0.05);治疗组3年、5年复发率均明显低于对照组,3年、5年生存率均明显高于对照组,差异有统计学意义(Plt;0.05)。表明枸杞多糖可降低术后脑胶质瘤病人3年、5年的复发率和提高3年、5年的生存率,但对1年复发率和1年的生存率影响不明显。这可能与枸杞多糖提高术后脑胶质瘤病人机体免疫功能密切相关。
综上所述,枸杞多糖能促进脑胶质瘤病人与杀伤肿瘤有关的免疫细胞和细胞因子含量增加,增强病人机体的免疫能力达到杀伤肿瘤目的,并降低脑胶质瘤的复发率和延长病人的生存期。但其确切的分子生物学机制及其信号转导机制还不清楚,有待进一步研究。
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2016-11-12)
(本文编辑 薛妮)
R739.4 R255.2
B
10.3969/j.issn.1672-1349.2017.20.040
1672-1349(2017)20-2632-03
河北省科技计划项目(No.15277781D)
1.河北省秦皇岛市海港医院(河北秦皇岛 066000);2.河北工程大学;3.河北省邯郸市疾病预防与控制中心;4.河北省永年县第一医院;5.河北省邯郸市妇幼医院
单铁英,E-mail:sty751218@163.com
信息:单铁强,单铁英,董静,等.枸杞多糖对脑胶质瘤病人免疫调节作用及其预后的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志,2017,15(20):2632-2634.