两种重组禽流感病毒H5亚型疫苗免疫效果的研究

奉 佳，杨 辉，颜克旭，刘增再，谭 丹，陈 智，宁华杰

（湖南省长沙市动物疫病预防控制中心，湖南长沙410013）

两种重组禽流感病毒H5亚型疫苗免疫效果的研究

奉 佳，杨 辉，颜克旭，刘增再，谭 丹，陈 智，宁华杰※

（湖南省长沙市动物疫病预防控制中心，湖南长沙410013）

为了更好地评价禽流感疫苗免疫效果，有效预防高致病性禽流感的发生，选用两种重组禽流感病毒H5亚型疫苗（Re-6株、Re-6株+Re-8株）对14日龄雏鸡开展免疫效果的比较试验，结果表明：从免疫抗体水平来看，免疫Re-6株疫苗的A组鸡群在首免后90d抗体水平维持在7log2以上,之后逐渐下降；免疫Re-6株+Re-8株疫苗的B、C组鸡群在首免后28d达到高峰，随之下降，当C组在56日龄加强免疫后，至180d抗体水平仍维持在7.6log2以上。从群体免疫抗体合格率来看，A组免疫合格率至180d低于70%标准，B、C组免疫合格率一直保持70%以上，但C组比B组免疫合格率更高。H5亚型疫苗（Re-6株、Re-6株+Re-8株）均能产生较好的免疫效果，但（Re-6株+Re-8株）疫苗的有效保护期更长，尤其是加强免疫之后，免疫保护率更高。因此建议家禽免疫H5亚型（Re-6株+Re-8株）疫苗，蛋鸡适当加强免疫，从而达到有效预防禽流感的目的。

禽流感；H5亚型疫苗；免疫效果

高致病性禽流感（H i ghl y Pat hogeni c Avi an Inf l uenza,H PAI）是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的以禽类为主的烈性传染病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报告的动物传染病，我国将其列为一类动物疫病。

目前，各国对禽流感的预防和控制采取措施各不相同，我国采用疫苗免疫和扑杀相结合的防控策略，疫苗免疫仍是当前预防高致病性禽流感的重要手段[1]。自2005年开始，我国开始实施H 5N1亚型高致病性禽流感全面免疫政策，期间疫苗毒株由Re-1株、Re-4株、Re-5株不断更替[2]。近年来，由于全国各地禽流感流行毒主要抗原位点变异数量增多、变异程度加剧，毒株流行趋势不断转变，为了提高疫苗与流行毒株的匹配性，更好地防控禽流感，2015年12月10日，农业部办公厅下发《关于调整高致病性禽流感疫苗种毒的通知》（农办医[2015]51号），我市禽流感政府采购苗由重组禽流感病毒灭活疫苗（H 5N1，Re-6株）调整为重组禽流感病毒H 5亚型二价灭活疫苗（H 5N1，Re-6株+Re-8株）。为更好地防控高致病性禽流感，长沙市动物疫病预防控制中心开展了两种重组禽流感病毒H 5亚型疫苗免疫效果的研究。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验疫苗

重组禽流感病毒灭活疫苗 (H 5N1亚型，Re-6株)，批号：2015088；重组禽流感病毒H 5亚型二价灭活疫苗（H 5N1亚型，Re-6株+Re-8株），批号：2016030，均由肇庆大华农生物药品有限公司提供。

1.1.2 试验试剂

禽流感病毒H 5亚型Re-6株血凝抑制试验抗原，批号：2015021；禽流感病毒H 5亚型Re-6株阳性血清，批号：2015004；禽流感病毒H 5亚型Re-8株血凝抑制试验抗原，批号：2016005；禽流感病毒H 5亚型Re-8株阳性血清，批号：2016001，均由哈尔滨维科生物技术有限公司提供。

1.1.3 试验动物

浏阳市淳口镇某家禽养殖场内14日龄雏鸡（广东清远鸡）。

1.2 试验方法

1.2.1 试验分组及设计：试验分组见表1。

表1 两种重组禽流感病毒H5亚型疫苗免疫试验分组情况

A组、B组和C组首免后分别于28d、60d、90d、120d、150d、180d随机采集60只鸡血样；每次采样D组随机采集30只鸡血样，同时检测禽流感病毒H 5亚型Re-6株、Re-8株的H I抗体效价。

1.2.2 检测方法及判定

血凝（H A）和血凝抑制（H I）试验严格按照高致病性禽流感诊断技术（GB/T 18936-2003）中血凝（H A）和血凝抑制（H I）试验方法,结果判定以完全抑制4H AU抗原的血清最高稀释倍数作为H I滴度。只有阴性对照孔血清滴度不大于2l og2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，实验结果才有效。H I价小于或等于3l og2判定H I试验阴性，H I价等于4l og2为可疑，需重复试验，H I价大于或等于5l og2为阳性。当H I价为阳性时，判定为免疫抗体合格。

2 结果

2.1 两种重组禽流感病毒H5亚型疫苗免疫后H5亚型Re-6株、Re-8株HI抗体水平

表3 各组H5亚型Re-8株HI抗体均值

试验结果表明，首免后28d禽流感病毒（Re-6株）免疫鸡群（A、B、C组）抗体效价均值7.8～8.0 l og2。A组Re-6株有效保护期为5个月（150d）左右，B、C 组 Re-6株在 6个月（180d）以上。D组在不免疫基础上，鸡群28d抗体效价均值为3.5 l og2。禽流感病毒（Re-8株）免疫鸡群（B、C组）在首免 28d抗体效价均值 7.8～8.0l og2，60d B组抗体水平下降至 6.1 l og2，C组因56日龄加强免疫一次，抗体水平一直维持在7.9 l og2，未免疫鸡群（A、D组）H I抗体效价均值在0～4.4 l og2，详见表 2、3，图 1。

图1 不同组别禽流感病毒H5亚型Re-6株、Re-8株HI抗体效价比较

2.2 两种重组禽流感病毒H5亚型疫苗免疫后H5亚型 Re-6株、Re-8株群体抗体免疫合格率比较

试验结果表明，B、C组首免后28d禽流感病毒（Re-6株）和禽流感病毒（Re-8株）群体抗体免疫合格率100%，180d C组群体抗体免疫合格率高于B组6.1个百分点。A组鸡群免疫禽流感病毒（Re-6株）疫苗90d群体抗体免疫合格率达100%，120d后群体抗体免疫合格率下降明显，180d比120d下降48.3%，禽流感病毒（Re-8株）疫苗群体免疫合格率在(11.1～61.7)%，详见表4、5。

表4 各组禽流感病毒H5亚型Re-6株免疫抗体合格率

表5 各组禽流感病毒H5亚型Re-8株免疫抗体合格率

3 讨论与分析

3.1疫苗免疫是当前防控高致病性禽流感的主动措施和关键环节。近年来，Cl ade2.3.2.1分支毒株、Cl ade2.3.4.4分支毒株成为在我国大范围存在的优势毒株[2]。为有效控制疫情发生，农业部决定将生产种毒Re-6株更换成Re-6株+Re-8株。本研究表明，重组禽流感病毒H 5亚型二价灭活疫苗（H 5N1亚型，Re-6株+Re-8株）针对当前流行毒株能产生良好的抗体反应，具有较强的抗原针对性，能抵御病毒攻击，达到免疫预防的效果。

3.2从表2、3可见，禽流感病毒（Re-6株）免疫鸡群在首免28天后均达到较高抗体效价 (抗体效价均值7.8～8l og2)，能有效保护鸡群，符合H 5禽流感疫苗在免疫后第25～30天抗体水平达到高峰[3]。120d加强免疫组（C组）抗体均值明显高于不加强免疫组（B组）2～3滴度，加强免疫比不加强免疫的效果明显，与金大春[4]、张济培[5]结论一致，禽流感疫苗2次免疫的免疫效果较好。

3.3从图1可见，试验用抗原效价为Re-6株鸡胚液H A效价不低于1∶512、Re-8株鸡胚液H A效价不低于1∶256的疫苗免疫后，Re-6株、Re-8株免疫持续期可达6个月以上，与Bol t z等[6]报道禽流感加强免疫后5个月效价大幅下降时间有所延长，可能与试验家禽的日龄、品种不同，对禽流感免疫产生H I抗体时间和所能达到的高度及维持的时间存在差异。

3.4从表4、5可见，A组禽流感（Re-6株）群体免疫抗体合格率在180d低于农业部要求的70%的标准，群体免疫不合格，达不到免疫保护要求，应加强免疫。B、C组群体免疫抗体合格率（88.3～100%）高于农业部要求的70%的标准，从而能够有效地控制动物疫病的发生和流行。群体免疫抗体合格率是衡量免疫质量、预警重大疫病的指标之一。

[1]曾显营，田国彬，冯华朋，等.H5N1亚型禽流感灭活疫苗种毒Re-6株的生物学特性及免疫原性研究[C].第三届中国黄羽肉鸡行业发展大会，2012：233-237.

[2]蒋文明，李金平，侯广宇，等.H5亚型高致病性禽流感病毒抗原性变异分析[J].中国动物检疫，2016,33（9）：27-32.

[3]张评浒，任涛，唐应华，等.免疫程序与母源抗体对H5禽流感疫苗免疫鸭和鹅HI抗体水平的影响[J].中国兽医科技，2005,35（8）：638-642.

[4]金大春，王跃川，潘杭君，等.快速型肉鸡禽流感母源抗体消长变化的观察及最佳首免日龄的探讨 [J].中国家禽，2008,30（24）：54-55.

[5]张济培，陈建红，陈响坤，等.肉鹅H5亚型禽流感疫苗免疫效果的研究[J].中国畜牧兽医，2006,33（12）：94-97.

[6]Boltz D A，Douangngeun B，Sinthasak S，et al.Fieldassessment of an H5N1 inactivated vaccine in chickens and ducks in Lao PDR[J].Archives of Virology，2009，154（6）：939-944.

S851.34

A

1006-4907（2017）05-0028-03

10.3969/j.issn.1006-4907.2017.05.013

奉佳（1982～），女，瑶族，湖南溆浦人，兽医师，硕士，主要从事动物疫病防控工作，66775070@qq.com。

宁华杰，317660608@qq.com

2017-09-17