流感病毒分型与亚型实时荧光定量PCR检测能力验证结果分析

魏明琳

（内蒙古通辽市疾病预防控制中心，内蒙古 通辽 028000）

流感病毒分型与亚型实时荧光定量PCR检测能力验证结果分析

魏明琳

（内蒙古通辽市疾病预防控制中心，内蒙古 通辽 028000）

目的验证本实验室对流感病毒分型能力，以及实时荧光定量PCR检测能力，提高本实验室的管理水平以及技术人员的检测水平。方法组建检测小组，为本实验室检测人员发放制备样品，对流感病毒进行分型，采用实时荧光定量PCR进行检测，分析比较检测的结果。结果经实时荧光定量PCR检测，抽取所有样品均匀性和稳定性都比较好（P＞0.05）。本实验室发放的总样品数是384个，经检测后结果与指定判定结果相同的样品有350个，合格率为91.14%。结论本实验室对流感病毒分型能力，以及亚型实时荧光定量PCR检测能力都比较好，相关技术人员的检测水平达到标准，能够为有关部门分析和预防流感提供有力的依据。

流感病毒；时荧光定量PCR；检测能力

流感又称流行性感冒，是一种比较常见的传染性疾病，该病传播速度快，传染的范围广，在我国发病率比较高。流感是由流感病毒引起，流感病毒一般分为甲、乙、丙三型[1]。流感在我国发病率高，主要症状是发烧发热、头疼畏寒、全身酸痛等，一旦患者感染流感病毒，则严重影响其生命安全和生活质量。流感病毒不仅类型众多，且极易发生变异，虽然分子生物学技术早就应用于对流感病毒的检测，但仍需提高监测结果的准确性。因此，针对流感病毒建立一个行之有效的检测方法，提高实验室监测能力，对治疗和控制流感有相当重要的意义。本研究主要对本实验室进行检测能力的分析，研究的结果和详细说明如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究所需仪器实时荧光定量PCR仪，PCR仪来自于Applied Biosystems AB美国应用生物系统公司，所需材料为制备样品、保存试管以及冰袋等。

1.2 一般方法

1.2.1 制备研究样品 选择世界卫生组织推荐的疫苗株鸡胚培养液，使用相关仪器验证后制成毒株，并添加稳定剂、保护剂等基础缓冲液[2]。样品均匀性检测方法：在各组样品中随机抽取10份进行实时荧光定量PCR检测，若CT值基本无差异，则表示均匀性比较好。样品稳定性检测方法：①将每种类型、每种稀释度的病毒样品抽取1支，置于室温中每天检测1次，待基本检测不出RNA指数为止。②将样品以冰袋密封，运送至合作单位进行检测，以观察运输途中样品的呈现的稳定性[3]。

1.2.2 样品的发放和运输 将所有样品进行编号，录入资料信息，按照流感病毒的分型和甲型亚型检测制定样品，随机发放给实验室。将样品放置与灭菌冻存管中保存，以冰袋密封，贴好项目名称、样品类型、实验室管理者等相关资料标签，运送至实验室。采用核酸提取方法检测样品。

1.3 评价指标和判定标准 将本次研究检测的样品分为3种类型，阴性样品有4份，强阳性样品有3份，弱阳性样品有3分，共10份。实验室若样品的检测结果和定性判定结果相同，则判定为合格。若样品的检测结果和定性判定结果相同，则判定为不合格。弱阳性样品排除本次检测之外。

1.4 统计学方法 选用软件SPSS 13.0进行数据分析，计数资料采用率（%）表示，组间比较采用χ2检验；计量资料采用均数±标准差（Mean±SD）表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 样品的均匀性和稳定性检测结果 在各组样品中，随机抽取10份-15份进行实时荧光定量PCR检测，结果显示，所有样品的CT值无组间差异、无组内差异（P＞0.05），说明样品的均匀性达到要求。对样品的稳定性进行检测，经过实际运输和室温放置等过程之后，有样品的CT值基本无变化，说明样品的稳定性比较好。

2.2 样品检测后的合格率情况 本次检测中，发放的总样品数是384个，经检测后结果与指定判定结果相同的样品有350个，合格率为91.14%，见表1。

表1 所有样品检测后的合格率情况比较

3 讨论

流感病毒属于RNA病毒，潜伏期短传染性强，且容易发生变异，因此加强对流感的预防和控制相当重要。实时荧光定量PCR检测是一种比较高效的检测手段，主要应用于检测各种临床疾病，如禽流感、麻疹、手足口病等传染病诊断，在食品安全、科学研究等领域也发挥着重要作用。实时荧光定量PCR检测法操作简单，能够通过绝对的定量检测出令人满意的效果，反应速度快，拥有较强的敏感性和直观性，可以对流感病毒进行快速准确的检测，应用前景广阔[4]。本实验室采用的荧光PCR仪检测效果较好，实验技术人员具有合格的操作技术，管理到位，检测能力达到相关标准。本研究结果显示，经实时荧光定量PCR检测，抽取所有样品均匀性和稳定性都比较好（P＞0.05）。本实验室发放的总样品数是384个，经检测后结果与指定判定结果相同的样品有350个，合格率为91.14%。因此，本实验室对流感病毒分型能力，以及亚型实时荧光定量PCR检测能力都比较好，相关技术人员的检测水平达到标准，能够为有关部门分析和预防流感提供有力的依据。

[1]王季秋,赵欣,王照,等.实时荧光定量PCR检测技术及其在病原微生物检测中的应用[J].中国地方病防治杂志,2016,16(5):517-519.

[2]邸红芹,杨永辉,朱桂云,等.改良多重实时荧光定量PCR检测流感A型和B型病毒[J].河北医药,2016,38(23): 3529-3532.

[3]方盛藩,郑夔,李小波,等.甲型H1N1流感病毒实时荧光定量PCR标准阳性模板的构建[J].中国卫生检验杂志,2015,15(1):1-3.

[4]刘丽娟,马雪征,甄维,等.流感病毒分型及亚型实时荧光定量PCR检测能力验证结果分析[J].中国卫生检验杂志,2015,25(23):4131-4132.