青(成)年梅花鹿口蹄疫疫苗免疫试验报告

吕见涛 陈法荣 杨玉澜 江海玲 李苗德 方朝柱 吕 濛

(1.新昌县畜牧兽医局，新昌，312500；2.新昌县沃产生物制品有限公司，新昌，312500)

青(成)年梅花鹿口蹄疫疫苗免疫试验报告

吕见涛1陈法荣1杨玉澜1江海玲1李苗德1方朝柱1吕 濛2

(1.新昌县畜牧兽医局，新昌，312500；2.新昌县沃产生物制品有限公司，新昌，312500)

采用牛口蹄疫疫苗对梅花鹿进行不同时段不同剂量免疫注射，定期进行抗体检测，以了解和掌握梅花鹿注射疫苗后鹿只免疫抗体的产生和消长规律，进而探明梅花鹿口蹄疫免疫的最佳程序和方法，确定梅花鹿口蹄疫的免疫计划，为广大梅花鹿饲养者进一步做好梅花鹿口蹄疫疫病的防控工作、提高梅花鹿群体保护率提供依据和方法。

梅花鹿；口蹄疫疫苗；免疫程序

1 前言

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄类动物(包括梅花鹿Cervusnippon)共患的急性、热性、接触性传染病。目前我国梅花鹿口蹄疫免疫只是参照牛羊免疫方法进行免疫，国内公开发表的文献中未见有关梅花鹿口蹄免疫方案与免疫程序方面的研究报道，因此，参照牛羊免疫方法来对免疫梅花鹿，缺乏充分的科学依据，而且防治效果也不确切。为探索和掌握梅花鹿注射牛口蹄疫疫苗后，梅花鹿免疫抗体的产生和消长规律，从而确定梅花鹿的免疫计划程序，降低发病率，为梅花鹿人工饲养产业的健康发展提供保障。2005年，在宁波市北仑区科学技术局的支持下，设立了《梅花鹿口蹄疫免疫程序研究》课题项目。我们对梅花鹿的口蹄疫免疫效果开展了试验研究。

2 材料与方法

2.1 实验动物

新昌县镜岭镇张伯华梅花鹿场提供体重50～100 kg/头，1周岁以上成(青)年梅花鹿15头。

2.2 麻醉、苏醒药物

陆眠灵(曾用名：鹿眠宁、特制眠乃宁注射液)，吉兽药试字(2004)005009，规格为2 mL×10支/盒，2005年6月19日生产，保质期3 a。

陆醒宁(曾用名：速醒灵、特制苏醒灵4号注射液)，吉兽药试字(2004)005010，规格为2 mL×10支/盒，2005年6月20日生产，保质期3 a。

2.3 口蹄疫疫苗和测定诊断液

一免用疫苗：内蒙古生物药品厂生产的牛口蹄疫AsiaI-O型双价灭活疫苗，批号20050516。二免用疫苗：乾元浩生物股份有限公司保山生物药厂生产的牛口蹄疫O型-亚洲1型双价灭活疫苗(兽用)，生产批号20050925004。

检测诊断液由中国农科院兰州兽药研究所提供，口蹄疫抗原批号为060531。

2.4 分组

选定新昌县镜岭镇张伯华梅花鹿场1周岁以上健康成(青)年梅花鹿15头，随机分为4个组。第1组梅花鹿4头，用牛口蹄疫双价苗2 mL/头，免疫1次后定期测定口蹄疫免疫抗体消长规律；第2组梅花鹿4头，用牛口蹄疫双价苗2 mL/头，相同剂量(间隔20 d)免疫2次后定期测定口蹄疫免疫抗体消长规律；第3组梅花鹿4头，牛口蹄疫双价苗不同剂量(首免2 mL/头，间隔20 d二免3 mL/头)免疫2次后定期测定口蹄疫免疫抗体消长规律；第4组梅花鹿3头，未经牛口蹄疫双价苗免疫，也进行抗体测定，用于对照。

2.5 具体实施免疫采血的方法

首先将试验梅花鹿用陆眠灵麻醉[1 ]，再实施免疫采血(或采血免疫)，然后再用陆醒宁将试验梅花鹿苏醒，具体操作方法和要求详见本文作者制订的《梅花鹿口蹄疫免疫技术操作规范》。

2.6 试验鹿只口蹄疫免疫抗体检测

采用正向间接血凝试验，操作方法按说明书进行，在血凝板上将待检血清用稀释液依次稀释为1∶0、1∶2、1∶4……1∶1 024，同时设阴性血清和阳性血清对照组，每孔各加25 μL正向间接血凝抗原，充分振荡均匀。室温静止2 h后判断结果。以50%红细胞出现凝集的最大稀释倍数为该血清的效价。血清抗体血凝结达到≥1∶32(根据浙牧防发〔2006〕25号要求)(即log25)判为免疫合格(具有保护力)，否则判为免疫不合格。

3 试验结果

3.1 各组抗体水平测量结果

第1组经牛口蹄疫双价苗给鹿只1次免疫，首免日、首免后20 d、40 d、60 d、120 d、180 d采血测定抗体(图1)，平均抗体水平分别为2.75、3.75、6.25、8、6.25、4.5。

第2组用牛口蹄疫双价苗相同剂量(间隔20 d)给鹿只2次免疫，首免日、二免日(首免后20 d)、二疫后20 d(首免后40 d)、首免后60 d、首免后120 d、首免后180 d采血测定抗体(图1)，平均抗体水平分别为2.0、3.0、5.75、9.0、7.0、5.0。

第3组用牛口蹄疫双价苗不同剂量(间隔20 d)给鹿只2次免疫，首免日、二免日(首免后20 d)、二疫后20 d(首免后40 d)、首免后60 d、首免后120 d、首免后180 d采血测定抗体(图1)，平均抗体水平分别为2.0、3.25、7.75、8.5、7.75、5.75。

第4组未经牛口蹄疫双价苗免疫(用于对照)。在试验开始日、20 d、40 d、60 d、120 d、180 d测定抗体(图1)，平均抗体水平分别为2.0、2.0、2.67、2.67、2.33、2.67。

图1 青(成)年梅花鹿口蹄疫疫苗免疫抗体水平变化曲线Fig.1 The change curve of immune antibody level of FMD vaccine on youth(adult)sika deer

3.2 各组抗体有效保护率结果

第1组有效保护率分别为0%、0%、100%、100%、100%、50%。第2组有效保护率分别为0%、0%、100%、100%、100%、100%。第3组有效保护率分别为0%、0%、100%、100%、100%、100%。第4组有效保护率全部为0%(表1)。

表1 青(成)年梅花鹿口蹄疫疫苗免疫抗体有效保护率(%)

Tab.1 The antibody effective rate of protection on young(adult) sika deer which were injected with FMD vaccine

4 讨论

4.1 未经牛口蹄疫双价苗免疫的鹿只，不具有效保护率。

4.2 牛口蹄疫双价苗用于梅花鹿口蹄疫免疫是可行的，梅花鹿免疫后所产生的抗体有效保护率达到了该型号口蹄疫的预防要求。

4.3 用于试验接种的一免和二免疫苗均由浙江省统一采购，虽厂家不同，但疫苗型号一致，得到的免疫效果说明用不同厂家牛口蹄疫O型-亚洲1型双价灭活疫苗试验同样保证了抗体有效保护率。

4.4 间隔20 d实施2次免疫，比只有1次免疫的梅花鹿有效保护率要高，且保护期长；相同剂量间隔20 d 2次免疫与不同剂量间隔20 d 2次免疫，其免疫有效保护率有一定差异，但不明显。

4.5 梅花鹿牛口蹄疫双价苗1次免疫后20 d内抗体水平较低(3个组平均抗体分别为3.25、3.0、3.25)，未能达到有效保护率。分析认为：牛口蹄疫双价苗是油佐剂疫苗，对机体的免疫刺激缓而长有关，有待进一步查证。

4.6 根据口蹄疫免疫抗体的消长规律和试验结果的综合分析，推荐青(成)年梅花鹿的口蹄疫免疫计划程序和方案为：首免后20 d实施二免，首免后190 d左右再次免疫，以后每年免疫2次，一免疫苗用量为2 mL/头，二免疫苗用量为3 mL/头。

[1 ] 郑兴涛.茸鹿饲养新技术[M].北京：金盾出版社，1998：182-188.

The Immunity Test Report of Foot-and-Mouth Disease Vaccine on Juvenile and Adult Sika Deer

Lv Jiantao1Chen Farong1Yang Yulan1Jiang Hailing1Li Miaode1Fang Chaozhu1Lv Meng2

(1.Xinchang Animal Husbandry and Veterinary Bureau，Xinchang，312500，China；2.Xinchang Wochan Biological Products Co.，Ltd.，Xinchang，312500，China)

Sika deer(Cervusnippon)were injected with different doses of bovine foot-and-mouth disease(FMD)vaccine in different periods.We checked the antibody regularly to understand the growth and decline of antibodies after injection.We identified the optimal schedule and methods for immunizations for FMD in sika deer.We designed a procedure to enhance immunity.Our results provide sika deer feeders with the scientific foundation and methods to promote prevention and control of FMD，and to increase the efficiency of sika deer population protection.

Sika deer；Foot-and-mouth disease vaccine(FMD)；Immunization procedure

稿件运行过程

2016-11-21

修回日期：2016-12-08

发表日期：2017-08-10

S858.25

A

2310-1490(2017)03-491-03

宁波市北仑区科学技术局《梅花鹿口蹄疫免疫程序研究》课题项目(200502C1011017)

吕见涛，男，56岁，高级兽医师；主要从事动物疫病防控工作方面的研究。E-mail：j6022896@163.com