甲状腺冷冻切片速冻方法的研究

张翠霞 方庆全 陈世东

甲状腺冷冻切片速冻方法的研究

张翠霞1方庆全1陈世东2

目的探讨甲状腺冷冻切片较佳的速冻方法。方法通过实验，比较不同速冻方法对甲状腺冷冻切片制片质量的影响。结果预先在冷冻切片托头上制作一层厚约0．1 cm的胶水冻成的“冰垫”，速冻甲状腺组织前，取出预先制作的“冰垫”托头，于室温中回暖 3～5 s 后，将切取组织置于“冰垫”托头上，再加适量胶水，将托头连同组织放置于已经预先冷冻至-25℃的冻台上速冻是一种较佳的速冻方法。结论优化甲状腺组织速冻方法，可减少甲状腺冷冻切片时的崩裂现象、减少冷冻切片的冰晶与裂隙现象，显著提高冷冻切片质量。

甲状腺；冷冻切片；速冻；质量

随着医学技术的发展，冷冻切片得到了广泛应用[1-2]。冷冻制片技术是术中快速病理诊断的基石，如何在有限的时间内又快又好地完成制片，不仅是病理诊断的需要，更是术中医师的迫切要求[3]。而制作甲状腺组织冷冻切片时，切片易出现组织崩裂、冰晶、裂隙等情况[4]。为此，作者通过实验，探讨较佳的甲状腺冷冻切片速冻方法。

1 资料与方法

1.1 资料

收集厦门大学附属第一医院病理科2017年1—6月的30例甲状腺冷冻切片标本，患者年龄22～71岁，平均年龄（37.9±11.2）岁。

1.2 设备与试剂

设备：LEICA CM1950冷冻切片机（德国莱卡）；试剂：普通胶水、AAF液（由乙酸A : 95%乙醇A : 甲醛F = 5 : 85 : 10组成）。

1.3 制作“冰垫”托头

取若干个冷冻切片机配套的托头，加上约 0.3 cm 厚胶水后，置于冷冻切片机的冻台上速冻，胶水冻成冻块后，用冷冻切片机将托头上冻块修平并修至余下约0.1 cm厚，形成带“冰垫”托头，置于预先设置为-25℃的冷冻切片机冻台上备用。

1.4 不同速冻方法下甲状腺冷冻切片的制备

取术中新鲜甲状腺标本，每例切取6块大小为 1.5 cm×1.5 cm×0.3 cm 的甲状腺组织，取出预先制作的“冰垫”托头，于室温中回暖 3～5 s 后，随机取其中1块甲状腺组织置于“冰垫”托头上，再加适量胶水，将托头连同组织放置于已经预先冷冻至-25℃的冻台上速冻，待甲状腺组织与后加的胶水冻成冻块时，按常规进行切片、固定、染色、中性树胶封固[5]，显微镜观察（A组）；随机再取1块组织，立即放置于已预先冷冻至-25℃、未于室温回暖的“冰垫”托头上，余操作同A组（B组）；随机再取1块组织，操作基本同A组，不同的是：将托头连同组织放置于已预先冷冻至-18℃的冻台上速冻，余操作同A组（C组）；随机再取1块组织，立即放置于已预先冷冻至-25℃、未预先制作“冰垫”的托头上，余操作同A组（D组）；随机再取1块组织，放置于常温托头上，加适量胶水后，置于-25℃的冻台上速冻，余操作同A组（E组）；剩余的1块组织置于常温托头上，加适量胶水，托头底部蘸少许自来水后放置于已经预先冷冻至-25℃的冻台上速冻，余操作同A组（F组）。比较6种不同速冻方法下甲状腺冷冻切片组织块崩裂机率、速冻的时间（组织放置于冷冻切片机冻台上至刚刚冻成冻块的时间），及无冰晶、无裂隙、组织结构清晰等指标的得分情况。

1.5 制片质量观察指标

无冰晶、无裂隙、组织结构清晰指标各10分，由2名副主任以上医师进行双盲评片，每项指标数据为评分均值。

1.6 统计学分析

应用SPSS 20.0 进行分析，计数资料率的比较采用χ2检验，计量资料均呈正态分布，用（均数±标准差）表示，2组间比较采用student-t 检验，多组间使用方差分析，以 P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 组织块崩裂现象

A、C、E、F组未出现冷冻组织块崩裂现象，B组 13.3%（4/30）、D组16.7%（5/30）出现冷冻组织块崩裂现象，B、D 2组分别与其它4组比较差异均有统计学意义（χ2=4.29、5.45，P均＜0.05）。

2.2 速冻时间

A、B、C、D、E、F组平均速冻时间分别为（83.4±11.2）s、（82.7±10.1）s、（107.1±12.8）s、（86.4±9.6）s、（169.6±17.7）s、（85.1±9.7）s，A组平均速冻时间显著少于 C、E 组（P均＜0.05）；A、B、D、F 4组平均速冻时间差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.3 制片质量的比较

不同速冻方法甲状腺冷冻切片无冰晶、无裂隙、组织结构清晰指标的得分情况见表1。由表1可见，A、B、D、F 4组无冰晶、无裂隙、组织结构清晰指标的得分组间比较，差异均无统计学意义（P均＞0.05）；C、E 2组无冰晶、无裂隙、组织结构清晰指标的得分均低于A组（P均＜0.05）。

2.4 托头夹持稳定性

A、B、C、D、E 5组的托头夹持稳定性好，未出现夹持不稳现象 ；F组有4个托头底部因蘸水太多，托头底部与周围粘附冰块过多，需要去除多余冰块后，托头才能与冰冻切片机的夹头稳定地夹持。F组托头夹持稳定性与其它5组比较，差异均有统计学意义（χ2均=4.29，P均＜0.05）。

3 讨论

冷冻切片是采用冷冻的方法使组织在较短时间内变硬切成薄片，其原理是利用物理降温的方法，使组织达到一定硬度进行切片的一种方法[6]。冷冻切片技术在病理诊断中具有举足轻重的作用[7-8]。

速冻是冷冻切片的关键步骤之一，速冻的目的是使组织在较短时间变硬，以便于后续的切片工作。B组将组织块放置于预先制作的“冰垫”托头时，未将托头取出于室温回暖 3～5 s，导致组织与托头粘附不牢固，后续切片时组织块崩裂率达13.3%；C组用-18℃的冻台进行速冻，速冻速度较慢，因此产生的冰晶与裂隙较多，组织结构也较为不清晰；D组组织块放置于预先冷冻至-25℃、未预先制作“冰垫”的托头上速冻，组织与托头粘附不牢固，后续切片时组织块崩裂率达16.7%；E组组织放置于常温托头上，再放入冷冻切片机冻台上速冻，速冻速度慢，因此产生冰晶与裂隙多，组织结构也较为不清晰；F组在托头底部蘸少许自来水后放置于冻台上速冻，水能提高托头与冻台接触的紧密性，所以速冻速度较快，但在托头底部蘸少许水时，蘸水太少则效果较差，蘸水太多则会影响托头与冷冻切片机夹头的夹持稳定性。

综上所述，A组的速冻方法冷冻速度快，可减少甲状腺冷冻切片时的蹦裂现象，减少冷冻切片的冰晶与裂隙现象，托头夹持稳定性好，可提高冷冻切片质量，值得推荐。

表1 不同速冻方法甲状腺冷冻切片相关指标评分结果（分）

[1] 张红红． 冷冻切片与术中细胞学诊断卵巢肿瘤的对比研究[J]． 中国卫生标准管理，2016，7（11）：185-186．

[2] Sala P，Morotti M，Menada MV，et a1． Intraoperative frozen section risk assessment accurately tailors the surgical staging in patients affected by early-stage endometrial cancer：the application of 2 different risk algorithms[J]． Int J Gynecol Cancer，2014，24（6）：1021-1026．

[3] 薛晓伟 孙保存，王伟，等． 首届全国病理技术“华夏杯”冷冻切片总决赛结果分析［J］． 中华病理学杂志，2016，45（6）：413-414．

[4] 秦岭，蔡江义． 冷冻切片结合细胞学涂片在卵巢肿瘤病理诊断中的临床价值[J]． 中国继续医学教育，2016，8（7）：39-40．

[5] 丁伟，王德田，董建强，等． 简明病理学技术[M]． 杭州：浙江科学技术出版社，2014：83-84．

[6] 王德田，董建强． 实用现代病理学技术[M]． 北京：中国协和医科大学出版社，2012：80．

[7] 黄波涛，林秀峰，朱云，等． 甲状腺微小乳头状癌的冷冻病理特征与中央区淋巴结转移的相关性研究[J]． 诊断病理学杂志，2016，23（6）：444-447．

[8] 张海巍． 甲状腺微小乳头状癌的术中冰冻病理诊断分析[J]． 中国卫生标准管理，2016，7（36）：159-161．

Study on the Quick-Frozen Method of Thyroid Frozen Section

ZHANG Cuixia1FANG Qingquan1CHEN Shidong21 Department of Pathology, The First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen Fujian 361003, China; 2 Department of Clinical Laboratory

ObjectiveTo explore a better quick-frozen method of thyroid frozen section.MethodsThe effect of different frozen methods on the quality of thyroid frozen section was compared.ResultsIt was a kind of better quick-frozen method that pre-made a frozen mat made of 0.1 cm thick glue on the frozen section holder ,and took it out to pick up 3～5 s at room temperature and placed the thyroid tissue on the top of the frozen mat, and then placed the holder with the thyroid tissue in the freezing microtome at -25℃ after adding right amount of glue on the holder.ConclusionOptimizing the quick-frozen method of thyroid frozen section can reduce the crack, the ice crystal and the fracture, and significantly improve the quality of the thyroid frozen section.

thyroid; frozen section; quick-frozen; quality

R365

A

1674-9316（2017）23-0139-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．23．069

1 厦门大学附属第一医院病理科，福建 厦门 361003；2检验科

陈世东