银杏叶复方对脾虚性断奶仔猪肠黏膜形态、上皮淋巴细胞和杯状细胞数量的影响

黄素华 ,李 焰,游 伟,曾福炎,邓晓林,李晓冰

(1.龙岩学院生命科学学院,福建 龙岩 364000;2. 福建省生猪疫病防控工程技术研究中心,福建 龙岩 364000;3.福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室,福建龙岩 364000)

银杏叶复方对脾虚性断奶仔猪肠黏膜形态、上皮淋巴细胞和杯状细胞数量的影响

黄素华1,2,李 焰1,3*,游 伟1,曾福炎1,邓晓林1,李晓冰1

(1.龙岩学院生命科学学院,福建 龙岩 364000;2. 福建省生猪疫病防控工程技术研究中心,福建 龙岩 364000;3.福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室,福建龙岩 364000)

为研究银杏叶复方对脾虚性断奶仔猪肠黏膜形态、上皮淋巴细胞和杯状细胞数量的影响,试验选择25日龄健康断奶仔猪30头,随机分成3组,即银杏叶复方组、脾虚模型组和对照组,每组5个重复,每个重复2头.颈部注射利血平加饥饱失常法建立脾虚性腹泻模型,银杏叶复方进行治疗.预试7 d后进行正式试验,试验期为30 d.结果表明:银杏叶复方组回肠绒毛高度显著高于脾虚模型组(P<0.05),十二指肠、回肠隐窝深度显著低于脾虚模型组(P<0.05);银杏叶复方组十二指肠绒毛高度/隐窝深度(V/C)显著高于脾虚模型组(P<0.05),回肠V/C极显著高于脾虚模型组(P<0.01);银杏叶复方组十二指肠杯状细胞数、空肠和回肠上皮内淋巴细胞数目显著高于模型组(P<0.05).可知,银杏叶复方有修复脾虚性断奶仔猪的小肠组织的作用.

银杏叶复方;脾虚性断奶仔猪;肠黏膜形态;淋巴细胞;杯状细胞

现代化养猪场普遍采用早期断奶技术,导致仔猪出现消化道发育不完全、免疫力低下和腹泻等问题[1].中兽医理论认为,早期断奶仔猪腹泻的病因为脾弱湿盛、伤食积热,辨证多属脾虚[2].消化系统的免疫作用主要是通过小肠的免疫来实现,脾虚泄泻的发生机制与肠道黏膜免疫调节有关[3].如何增强动物肠道黏膜的免疫功能是提高脾虚断奶仔猪免疫功能、防止腹泻发生的关键.目前,对银杏叶及其提取物的开发应用的相关研究较多,但银杏叶用于经济动物上的研究较少.据文献报道[4],银杏叶提取物可以抑制断奶仔猪肠黏膜通透性的增加,保护肠黏膜屏障功能.但有关银杏叶及其制剂影响脾虚性断奶仔猪的研究尚不多见.本课题组前期研究发现,银杏叶复方可修复脾虚性腹泻断奶仔猪的肝脾损伤[5]、增强脾虚证小鼠[6]和肉兔[7]的免疫作用.本试验将进一步探讨银杏叶复方对脾虚性断奶仔猪肠黏膜形态、上皮淋巴细胞和杯状细胞数量的影响,为银杏叶在断奶仔猪中的应用提供理论依据.

1 材料与方法

1.1 银杏叶复方的制备 银杏叶复方由银杏叶、黄芪、党参、白术、茯苓、砂仁和陈皮组成(比例为10∶15∶15∶12∶15∶6∶9).以上方剂采用传统水煎法煎煮:蒸馏水预行浸泡2 h,加热煎煮2次,第1次保持微沸30 min,滤出药液;药渣加温水再煮沸,仍保持微沸30 min,滤出药液;合并2次滤液,小火浓缩至1 g/mL(按照生药量计算)[6].

1.2 断奶仔猪脾虚模型的建立 采用饥饱失常法(对断奶仔猪采取不喂与喂饱,隔日交替)加每天颈部注射利血平(0.10 mL/kg)造模使其脾虚[8],3 d后仔猪便出现便溏或便软,肛周污秽,继而出现纳呆、四肢无力、活动减少、毛色枯槁或竖毛、贪睡、喜卧、行动缓慢、反应迟钝等症状,表明脾虚模型复制成功[5].

1.3 试验分组 选择体重为(6.50±0.60)kg、25日龄健康断奶仔猪30头,随机分成3组.银杏叶复方组每天颈部注射0.10 mL/kg利血平加饥饱失常法造模,并灌服20 mL银杏叶复方制剂;脾虚模型组每天颈部肌肉注射0.10 mL/kg利血平加饥饱失常法造模,并灌服20 mL生理盐水;对照组每天颈部注射0.10 mL/kg生理盐水,并灌服20 mL生理盐水.每组5个重复,每个重复2头.预试期7 d,正式试验期30 d.

1.4 指标测定 第30天试验结束后,禁食12 h,放血处死后切取十二指肠、空肠和回肠中段,在体积分数为10%甲醛溶液固定后,制成切片观察.参照李焰等[7]所用的方法测定肠绒毛高度和隐窝深度,绒毛高度/隐窝深度(V/C),计数肠上皮间淋巴细胞和杯状细胞.

1.5 统计分析 应用统计软件SPSS 16.0进行单因素方差分析(One-Way ANOVA)和 Duncan′s多重比较,所有数据用均值±标准差表示.以P<0.05表示差异显著,P<0.01表示差异极显著.

2 结果与分析

2.1 银杏叶复方对脾虚性断奶仔猪肠黏膜形态的影响 由图1可知,银杏复方组的十二指肠绒毛排列紧密而有规律,且绒毛高度显著高于脾虚模型组(P<0.05).脾虚模型组十二指肠绒毛低矮,排列不规则;银杏复方组肠绒毛均完整,无脱落现象;脾虚模型组空肠肠绒毛存在脱落现象,绒毛周边不完整,固有层与上皮层存在分离现象,对照组也存在上皮层与固有层分离现象;脾虚模型组回肠肠绒毛低矮,排列不规律,固有层与上皮层存在分离现象,对照组绒毛短,排列较散乱,而银杏叶复方组肠绒毛结构均完整.

图1 各组肠道光镜图(HE,X40)

由表1可知,银杏叶复方组回肠绒毛高度显著高于脾虚模型组(P<0.05),十二指肠、回肠隐窝深度显著低于脾虚模型组(P<0.05).银杏叶复方组十二指肠V/C显著高于脾虚模型组(P<0.05),回肠V/C极显著高于模型组(P<0.01).

表1 银杏叶复方对脾虚性断奶仔猪肠黏膜形态的影响(n=10)

2.2 银杏叶复方对脾虚性断奶仔猪上皮内淋巴细胞和杯状细胞数量的影响 由表2可知,脾虚模型组空肠和回肠上皮内淋巴细胞数目显著低于对照组和银杏叶复方组(P<0.05);脾虚模型组十二指肠上皮内淋巴细胞数目显著低于对照组(P<0.05),银杏叶复方组上皮内淋巴细胞数目较脾虚模型组有所提高(P>0.05);对照组和银杏叶复方组十二指肠杯状细胞数目均显著高于脾虚模型组(P<0.05),脾虚模型组空肠杯状细胞数目显著低于对照组(P<0.05),银杏叶复方组较脾虚模型组有所提高(P>0.05);各组回肠杯状细胞数目差异不显著(P>0.05).

表2 银杏叶复方对脾虚性断奶仔猪肠上皮内淋巴细胞和杯状细胞数量的影响(n=10)

图2 各组肠道细胞光镜图(X400)

由图2可看出,十二指肠绒毛上皮细胞大体上呈单层排列,但部分出现细胞轮廓不清晰,排列不规则现象.上皮内淋巴细胞以小淋巴细胞为主,胞核大而圆,浓染,胞浆少,多分散于小肠上皮基膜附近,少数位于上皮核层和顶层.散于上皮内的淋巴细胞数目脾虚模型组少于银杏叶复方组.回肠和空肠杯状细胞被染成紫红色,高脚杯状,分布于高柱状的柱状细胞之间,多数集中分布在靠近肠腺部位,较少分布于靠近绒毛顶端附近.

3 讨 论

研究表明,小肠绒毛高度的增加会增强小肠对营养物质的吸收,隐窝深度的增加则意味着吸收功能降低,二者比值是肠道消化吸收功能的重要指标之一.小肠黏膜结构和功能受损情况下,V/C会下降[9].本试验中,银杏叶复方组回肠绒毛高度显著高于脾虚模型组,十二指肠、回肠隐窝深度显著低于脾虚模型组.银杏叶复方组十二指肠V/C显著高于脾虚模型组,回肠V/C极显著高于模型组.银杏叶复方组十二指肠杯状细胞数、空肠和回肠上皮内淋巴细胞数目显著高于模型组.表明银杏叶复方可用于修复受损肠道,维护与养护断奶仔猪的小肠黏膜组织.

上皮淋巴细胞是最先发生免疫反应的细胞,其数目可反映小肠局部黏膜屏障的完整性[10].本试验中,银杏叶复方组的空肠、回肠上皮内淋巴细胞显著高于脾虚模型组,说明银杏叶复方对脾虚断奶仔猪肠黏膜免疫屏障有一定促进作用.杯状细胞同样是重要的免疫相关细胞,它可能在肠黏膜损伤后的重建过程中起关键作用,这与其分泌的黏液对上皮起润滑保护作用有关[11].本试验中,银杏复方组的十二指肠肠段杯状细胞数量显著高于脾虚模型组,说明银杏复方剂对小肠黏膜免疫细胞有保护作用.

"脾虚证"是以消化功能低下为主的多器官和多系统功能减弱的综合病理变化,仔猪断奶产生应激状态时,肠形态和肠黏膜屏障受损.已有研究表明,银杏叶提取物可提高肠道吸收能力[12],促进断奶仔猪生长[13],主要是由于银杏叶含有黄酮类和萜内酯,具有促进毛细血管循环以及营养脾胃和心脑脏器功能的作用.本研究利用银杏叶与黄芪、白术、党参、茯苓、砂仁、陈皮等中草药配制银杏叶复方制剂,银杏叶复方可修复受损肠道,维护与养护断奶仔猪的小肠黏膜组织.因党参、黄芪为补气健脾、益血首选药物,黄芪多糖可改善脾虚小鼠的消化吸收功能;党参具益气生津、健脾补肺之功[14];白术苦温而善于燥湿,茯苓甘淡而善于渗湿,白术、茯苓合而用之,一燥一湿,相辅相成;砂仁也有化湿开胃,温脾止泻,陈皮常与党参、白术、茯苓等配合应用,既能健脾,又能理气[15].所以黄芪、党参、白术、茯苓、砂仁、陈皮配以银杏叶相得益彰.

4 结 论

在本试验条件下,银杏叶复方有维持和保护仔猪小肠黏膜的作用.研究运用中药方剂的君臣佐使理论,将银杏叶配以黄芪、党参、白术、茯苓、砂仁、陈皮等中药,发挥其更好的疗效,为研制以银杏叶为主的中草药饲料添加剂提供了一定的理论依据.

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Effects of Compound Ginkgo Biloba on the Morphology of Intestinal Mucosa and Number of Intraepithelial Lymphocytes and Goblet Cells in Weaned Pigs with Spleen Deficiency

HUANG Su‐hua1,2, LI Yan1,3*, YOU Wei1, ZENG Fu‐yan1, DENG Xiao‐lin1, LI Xiao‐bin1

(1. Collge of Life Science, Longyan University, Fujian Longyan 364000, China; 2. Fujian Provincial Engineering &
Technology Research Center for the Prevention and Control of Swine Diseases, Fujian Longyan 364000, China; 3. Fujian Provincial Key Laboratory for the Prevention and Control of Animal Infectious Diseases and Biotechnology, Fujian Longyan 364000, China)

In order to research the effects of compound ginkgo biloba on the morphology of intestinal mucosa and number of intraepithelial lymphocytes and goblet cells in weaned pigs with spleen deficiency, A total of 30 aged 25 days weaned piglets were randomly divided into 3 groups: control group, spleen deficiency model group and ginkgo biloba Compound treated group. Each group comducted 5 replicate experiments and each experiment repeated 2 piglets. Reserpine and poorly feeding methods were used to establish spleen deficiency diarrhea model followed by treated with ginkgo biloba Compound. The preliminary feeding periods were 7 d and the experiment feeding periods was that in 30 d. The results showed that the height of the ileacvillus was significantly higher in ginkgo biloba compound groups than that in spleen deficiency model group(P<0.05), the duodenal and ileac crypt depth were significantly lower in ginkgo bilobal compound group than that in spleen deficiency mode group (P<0.05). Ginkgo bilobal compound group showed much more duodenal V/C than spleen deficiency model group (P<0.05),and much more ileac V/C than spleen deficiency model group (P<0.01).Ginkgo bilobal compound group showed much more duodenal goblet cells , ileac and jejunal lymphocytes than spleen deficiency model group (P<0.05). The compound Ginkgo biloba can repair the small intestine tissues in spleen deficiency weaned pig.

Compound ginkgo biloba; Spleen deficiency weaned pig; Morphology of intestinal mucosa; Lymphocytes cells; Goblet cells

S828 .5

A

10.19556/j.0258-7033.2017-11-086

2017-05-24;

2017-09-12

国家自然科学基金面上项目(31470129);福建省科技厅重大专项(2014NZ0002-3);龙岩市科技局项目(2014LY24);龙岩学院动物营养科研创新团队

黄素华(1968-),女,福建龙岩人,硕士,副教授,主要从事植物天然产物的提取及应用,E-mail:1007388985@qq.com

*通讯作者:李焰(1968-),女,四川安县人,硕士,教授,主要从事饲料添加剂研究,E-mail:529783204@qq.com