免疫层析法快速定量检测辣椒中罗丹明B

刘春森，罗 爽，王彦斐，彭 强，王 雄

免疫层析法快速定量检测辣椒中罗丹明B

刘春森1，罗 爽2，王彦斐3，彭 强3，*王 雄3

（1.四川省南充市产品质量监督检验所，四川南充 637000；2.四川省泸州市产品质量监督检验所，四川，泸州 646000；3.北京中检维康生物技术有限公司，北京 100004）

建立了免疫层析法快速定量检测辣椒中罗丹明B的分析方法，该方法的检出限为500 μg/kg，相对标准偏差低于10%，回收率为70%～110%，具有简便快速、灵敏准确、重现性好等优点，可以用于对辣椒中罗丹明B进行快速定量筛查检测。

快速定量检测；辣椒；罗丹明B；免疫层析

0 引言

罗丹明B（Rhodamine B） 又称玫瑰红B、蕊香红B、若丹明B或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料，曾经用作食品添加剂，但后来试验证明罗丹明B会致癌，在合成过程中会产生有毒的杂质，如苯酚、苯胺、醚等，已证明罗丹明B对动物具有致癌性，且可透过人体皮肤，引起头痛、呕吐、四肢酸痛等症状，现在已不允许用于食品染色[1-2]。罗丹明B是一种碱性工业染料，因其具有色泽鲜艳、着色稳定、价格低廉等特点，常被一些不法商家非法用作食品着色剂（以辣椒制品为主），严重危害了消费者的健康[3]。因此，建立快速可靠的检测方法非常重要。

目前，多数实验室仍采用非极性有机溶剂的方法将罗丹明B从食品中溶解并萃取出，再将萃取液过中性氧化铝固相萃取小柱吸，以达到吸附罗丹明B的效果，但非极性有机溶剂在洗脱油脂样品或食品内源性干扰物，然后再用极性溶剂将其从固相萃取柱上洗脱并收集，然后用仪器进行定性定量检测。此方法不仅需要精密昂贵的仪器，且操作过程复杂、时间较长，无法实现在小型实验室及现场检测。试验建立并验证了免疫层析法快速定量检测辣椒中罗丹明B的分析方法。

1 试剂仪器与检测方法

1.1 试剂

iCheck罗丹明B定量快检卡，研发组成由包被有胶体金偶联的罗丹明B抗体的微孔、喷涂有罗丹明B抗原检测线和羊抗鼠二抗的质控线和稀释缓冲液组成；乙醇（色谱纯），美国JT BEKER公司提供；玻璃纤维滤纸，美国VICAM公司提供；罗丹明B标准溶液：准确称取0.1 mg固体罗丹明B固体标准品溶液，于10 mL容量瓶中，加入少量色谱级甲醇溶液后，用甲醇定容至10 mL。除特别注明外，以上试剂均为分析级试剂，实验室用水均为纯净水。

辣椒样品，不同地区采购的不同种类的辣椒，分别收集四川、湖南、新疆、北京4个地区的红辣椒。

1.2 仪器

iCheckⅢ型食品安全定量快检仪，北京中检维康生物技术有限公司产品。

1.3 检测方法

1.3.1 样品的提取

提取1.0 g粉碎后辣椒样品于50 mL离心管中，加入10mL提取液乙醇，用多功能旋转混合器提取10 min（或者人工用手剧烈振荡3 min），用中速定性滤纸过滤，收集滤液即为待检样品。

1.3.2 快速定量检测步骤

吸取120 μL稀释缓冲液加入金标抗体微孔中，再加入30 μL滤液样品，用移液器吸打5次混匀，取100 μL加入到快检卡样品孔中。于37±2℃下温育反应10 min后，立即将快检卡放入定量快检仪中读数，结果即为样品的实际浓度。该方法的检出限为 500 μg/kg，检测范围为 500～5 000 μg/kg。注意：若读值为5 000 μg/kg或大于5 000 μg/kg时，需要将样品滤液用样品提取液乙醇进行一定比例的稀释，此结果需要乘以稀释因子。

2 结果与讨论

在不同种类的空白样品中添加罗丹明B的含量为 500，1 000，2 000，5 000 μg/kg质量浓度水平，然后按照胶体金法快速定量检测。

胶体金法快速定量法准确性和重复性的四川辣椒试验结果见表1，胶体金法快速定量法准确性和重复性的湖南辣椒试验结果见表2，胶体金法快速定量法准确性和重复性的新疆辣椒试验结果见表3，胶体金法快速定量法准确性和重复性的北京辣椒试验结果见表4。

表1 胶体金法快速定量法准确性和重复性的四川辣椒试验结果

从表1～表4中回收率和精密度数据可以看出，该方法检测罗丹明B的回收率均在70%～120%，室内4水平加标和5个平行性试验变异系数在20%以内。

3 结论

免疫层析法快速定量检测辣椒中罗丹明B，检出限为10 μg/kg，相对标准偏差低于10%，回收率为

表2 胶体金法快速定量法准确性和重复性的湖南辣椒试验结果

表3 胶体金法快速定量法准确性和重复性的新疆辣椒试验结果

表4 胶体金法快速定量法准确性和重复性的北京辣椒试验结果

70%～110%，变异系数小于10%，分析一个样品的时间为20 min内。该方法具有简便快速、准确可靠、重复性好的优点，可以用于对辣椒中罗丹明B进行快速定量筛查检测。

[1]卢士英，邹明强．食品中常见的非食用色素的危害与检测 [J]．中国仪器仪表，2009（8）：45-50.

[2]中华人民共和国卫生部．食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单（第一批） [S]．2008：12．

[3]林长虹，胡书玉，黄达锴，等．辣椒及其制品中罗丹明B的超高效液相色谱荧光检测 [J]．广东化工，2011（4）：140-141.◇

Rapid Detemination of Rhodamine B in Chili by Immunchlomatography

LIU Chunsen1，LUO Shuang2，WANG Yanfei3，PENG Qiang3，*WANG Xiong3
（1.Sichuan Nanchong Quality and Technical Supervision，Nanchong，Sichuan 637000，China；2.Sichuan Luzhou Quality and Technical Supervision，Luzhou，Sichuan 646000，China；3.Beijing Clovertech Co.，Ltd.，Beijing 100004，China）

Rapid determination Rhodamine B in chili by immunochromatography was developed.The limit of determination was 500 μg/kg，the relative standard deviations was below 10%.Recoveries of Rhodamine B spiked to samples were between 70%～110%.This method wassimple and rapid，sensitive and accurate，and reproducible.It could be uced to peper the Rhodamen B for rapid quantitative scueening tests.

Rhodamine B；rapid detemination；chili；immunochlomatography

TS207.3

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.10.045

1671-9646（2017） 10b-0056-02

2017-08-01

刘春森（1982— ），男，大专，助理工程师，研究方向为食品安全检测技术。

*通讯作者：王 雄（1963— ），男，博士，高级工程师，研究方向为食品安全检测与超微量分析化学。