濒危药材胡黄连离体再生技术研究

张高翔，金涛，王利

（1.西藏职业技术学院农业科学技术学院，西藏拉萨 850000；2.西藏自治区农牧科学院农业资源与环境研究所，西藏拉萨 850000）

濒危药材胡黄连离体再生技术研究

张高翔1，金涛2，王利1

（1.西藏职业技术学院农业科学技术学院，西藏拉萨 850000；2.西藏自治区农牧科学院农业资源与环境研究所，西藏拉萨 850000）

【目的】旨在为以后人工大面积栽培提供理论基础。【方法】通过对胡黄连再生分化的研究，建立起胡黄连再生体系。【结果】MS培养中添加一定浓度的6-BA，能较好地诱导不定芽的正常分化，有利于提高胡黄连不定芽分化的6-BA质量浓度是2～4 mg/L，芽分化率最高可达22.2%，且不定芽生长健壮，但过高浓度的 6-BA (5 mg/L) 不利于芽的分化。【结论】MS培养基中添加6-BA 2 mg/L 和NAA 0.05 mg/L 能够更好地分化出不定芽，并生健壮，其中不定芽分化率可达23.0%。

胡黄连；再生；西藏

胡黄连为玄参科胡黄连属多年生草本植物，是玄参科婆婆纳族的最原始类群之一，具有较高的科学价值和药用价值。目前，胡黄连已被列为国家二级保护野生珍稀濒危植物，也是藏东南特有药材之一，市场上所用胡黄连多来自于西藏亚东地区其余均为进口[1-4]。

本实验主要对胡黄连离体培养体系进行系统研究，旨在打破传统繁殖方式，保护现有的胡黄连野生资源，并对其实现可持续的开发利用，为西藏胡黄连人工栽培奠定基础，为规模化生产提供科学依据，为市场提供稳定的药材，也为进一步研究胡黄连的生理习性及药用价值提供条件。

1 材料和方法

1.1 材料

选用西藏地区野生胡黄连种子作为实验材料。

1.2 方法

1.2.1 无菌苗的培养

先筛选采回的胡黄连种子，由于胡黄连种子细小，采用水选的方法进行筛选。

将筛选过的种子在超净工作上用75%酒精消毒45～50 s、1 g/L汞消毒10 min，无菌水冲洗3次[5]，接种在MS培养基上，每个培养瓶接种5～7粒种子，在25℃、16 h光照/8 h黑暗条件下培养，光强2 000～2 500 Lx的条件下进行离体培养。10天后逐渐出现发芽，30～50天后无菌苗长成（图1），可以作为离体培养的试材进行实验。

图1 胡黄连无菌苗

1.2.2 不定芽诱导和分化

以胡黄连的无菌苗为供试材料，对其幼嫩茎段（1cm左右）进行培养。

首先进行不同质量浓度6-BA的筛选，选出最佳6-BA浓度为2 mg/L；在最佳6-BA质量浓度的基础上筛选出最佳0.4 mg/L NAA的最佳浓度；最后选用2mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA两种质量浓度配比，研究了对胡黄连幼嫩茎段的不定芽诱导效果。

分化率（%）=分化的总芽数/接种外植体数×100%。

1.2.3 生根诱导

不定芽生长至1.0～1.5 cm高时，自芽基部切下，转入0.3 mg/L NAA的MS生根培养基中诱导生根，20天后观察记录。

1.2.4 再生苗的移栽

当有4～7个不定根分化出后，开瓶口锻炼10～15天，洗去根部的培养基，栽入培养土（蛭石、珍珠岩、园土的比例为1∶1∶3）中，在温度20～22℃，空气相对湿度为80%～90%的室内培养7～10周，在幼苗约有3 cm高时，进行正常栽培管理。

2 结果与分析

2.1 不同质量浓度激素6-BA对不定芽诱导的影响

由表1可知，MS培养基中加入2 mg/L 6-BA对胡黄连不定芽诱导效果最好，不定芽分化系数为22.2%（图2），比对照（CK）有所提升；当6-BA为3和4 mg/L时，仍有较多的不定芽分化，但褐化较多，不定芽生长易徒长，长势较弱，叶色浅，后期炼苗死亡率较高；5 mg/L 6-BA对不定芽诱导效果最差，无不定芽分化，表明6-BA在较低质量浓度（2～4 mg/L）有利于不定芽的诱导分化，而高质量浓度（5 mg/L）对不定芽诱导分化有一定的抑制作用，不定芽有待率低，甚至不能诱导出不定芽。

表1 不同浓度6-BA对不定芽的诱导效果

图2 不定芽的分化

2.2 6-BA与不同质量浓度NAA配比对不定芽的诱导影响

由表2可知，在对外植体诱导不定芽中，以MS培养基中添加2mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA和2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA的分化系数较高，不定芽的分化系数分别为23.0%和12.5%。因此认为，MS+2 mg/L 6-BA中添加0.05 mg/L NAA的激素对不定芽的诱导有促进作用；而2 mg/L 6-BA与相对较低浓度（0.05～0.3 mg/L）NAA配比有利于不定芽诱导，但随着NAA浓度的提高，反而不利于不定芽的诱导。因此在较低浓度的NAA情况下，有利于不定芽的萌发。

表2 2 mg/L 6-BA与不同质量浓度NAA配比不定芽的诱导结果

2.3 不定芽生根的诱导及再生苗的移栽

当不定芽长至1.0～1.5 cm时，即可切下接种到生根培养基进行不定根的诱导。以MS培养基添加0.3mg/L NAA为最好。小苗移入生根培养基后约20天即可产生不定根，40天左右便可出瓶。不定根诱导率达28%。将锻炼好的幼苗移栽至基质中（蛭石、珍珠岩、园土的比例为1∶1∶3），进行培养。

3 结论

影响植物再生频率的主要因素是培养基中的激素含量[6-7]。本实验在MS培养中添加一定浓度的6-BA，能较好地诱导不定芽的正常分化，有利于提高胡黄连不定芽分化的6-BA质量浓度是2～4 mg/L，芽分化率最高可达22.2%，且不定芽生长健壮，但过高浓度的6-BA（5 mg/L）不利于芽的分化。

在MS基本培养基中同时加入细胞分裂素（6-BA）和生长素（NAA），更有利于不定芽的诱导，本研究表明，MS培养基中添加2 mg/L 6-BA和0.05 mg/L NAA能够更好地分化出不定芽，并生健壮，其中不定芽分化率可达23.0%。

在整个实验中，由于胡黄连生长较慢，实验周期比预想要长很多，并且外植体较小，在培养过程中死亡率较高；在后期炼苗过程中，由于苗子较小，死亡率较高，这些都是在以后的实验中需要克服的。总之，建立胡黄连的离体快繁体系，打破传统繁殖方式，为胡黄连人工栽培奠定基础，为规模化生产提供科学依据，也为进一步研究胡黄连的生理习性及药用价值提供条件，同时也为胡黄连的种质资源保存提供新的思路。

[1]江苏新医学院中药大辞典编写组.中药大辞典(下册)[M].上海:上海科学技术出版社,1996.

[2]国家药典委员会.中国药典(一部)[S].2005.

[3]付立国.中国植物红皮书—稀有濒危植物(第一册)[M].北京:科学出版社,1992.

[4]泽仁旺姆,于顺利,尼珍,等.独一味等13个藏药植物种在西藏的分布和资源量调查[J].北京农业,2012(12):56-60.

[5]曹孜义,刘国民.实用植物组织培养教程[M].兰州:甘肃科学技术出版社,1996.

[6]潘瑞帜,董愚得.植物生理学[M].北京:高等教育出版社,1995.

[7]刘庆昌,吴国良.植物细胞组织培养[M].北京:中国农业大学出版社,2003.

Tissue Culture and Plantlet Regeneration of Endangered Medicinal-- Picrorhiza scrophulariiflora Pennell

Zhang Gao-xiang1,Jin tao2,Wang li1
(1.Tibet Vocational Technical College，College of agricultural science and technology,Tibet Lhasa 850000；2.Tibet academy of Agriculture and animal husbandry Science,Agricultural resource and environment research institute,Tibet Lhasa 850000)

【Objective】The aim is to provide a theoretical basis for artificial large scale cultivation in the future.【Method】This passage discusses the method for the differentiation of shoot regeneratio .【Result】The differentiation of shoot regeneration was 22.2% with 6-BA 2--4 mg/L.But ,the high concentration of 6-BA (5 mg/L) is not conducive to bud differentiation.【Conclusion】It could improve the differentiation of shoot in MS medium complementing with 6-BA or NAA.

Tibet；Picrorhiza scrophulariiflora Pennell；regeneration

S567.239

A

2096-0387（2017）05-0030-03

2016年度西藏自治区高校青年教师创新支持计划资助项目“濒危药材胡黄连立体快繁体系建立的研究”（QCZ2016-87）。

张高翔（1982—），女，河南信阳人，硕士，讲师，研究方向：园艺植物栽培及繁育。