外周血长链非编码RNA在心肌梗死早期诊断中的应用

唐艺加 陈 旸

(四川省医学科学院 四川省人民医院心内科，四川 成都 610071)

外周血长链非编码RNA在心肌梗死早期诊断中的应用

唐艺加 陈 旸

(四川省医学科学院 四川省人民医院心内科，四川 成都 610071)

目的探讨外周血长链非编码RNA(lncRNA)在心肌梗死(MI)早期诊断中的应用。方法选择2015年11月至2016年2月该院心血管内科收治的MI患者22例为MI组，同期体检的健康成人15例为对照组，所有研究对象入院后即刻(0 h)采肘静脉血2管，MI患者在入院后6、12、24、48、72、96 h分别采血一次，得到的血清和血浆分别用于检测心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)浓度和尿路上皮癌相关抗原(UCA)1表达水平。结果除入院时MI组血清cTnⅠ与对照组比较未见明显变化(P>0.05)，其余任意时间点上MI组均显著高于对照组(P<0.05)。MI组血浆中UCA1表达水平在6、12、24、48 h时均显著低于对照组(均P<0.05)，其余时间两组差异无统计学意义(均P>0.05)。依据疾病史将患者分为单纯MI组(12例)、高血压MI组(7例)、糖尿病MI组(3例)和联合患病组(3例)，分析显示在0、12、72 h时各组UCA1表达水平均无统计学差异(均P>0.05)。结论UCA1能够作为MI的潜在生物学标志物，其在MI发病后不同时段具有显著的变化，并且特异性良好，但是目前尚不清楚其作用机制，有待于进一步研究确认。

心肌梗死；长链非编码RNA；尿路上皮癌相关抗原1

目前临床上以心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)为常用的心肌梗死(MI)标志物〔1〕，但一些心脏疾病如心力衰竭、心房颤动和非心脏疾病如严重的慢性肾病、败血症等都可以导致cTnⅠ升高，干扰诊断特异性〔2〕。非编码RNA(ncRNA)是一类不翻译成蛋白质的RNA，近几年研究发现这些RNA广泛参与了大量生理活动的调控和疾病的病理过程〔3〕。长链非编码RNA(lncRNA)是其中一类长度在200 bp以上的ncRNA〔4〕，研究发现其中一些lncRNA可以在体液中检测到，也有研究发现某些lncRNA与心脏和血管的功能有密切关系，尿路上皮癌相关抗原(UCA)1〔5〕就是一种兼具上述两种特性的lncRNA，目前尚无报道其与MI的关系，本研究旨在评价血清中UCA1在MI诊断中的应用价值。

1 材料与方法

1.1临床资料 选择2015年11月至2016年2月四川省人民医院心血管内科收治的MI患者22例作为MI组，年龄41～73〔平均(61.02±11.83)〕岁，其中男14例，女8例，高血压病史10例，糖尿病史6例，吸烟史11例。纳入标准：①符合世界卫生组织(WHO)制定的MI诊断标准〔1〕，即典型的临床表现、特征性的心电图变化、血清标志物改变，3者具2即可诊断；②发生MI后2 h内入院，且未进行任何治疗；③住院期间无严重并发症发生。排除标准：①心脏疾病史；②恶性肿瘤；③3个月内外科手术史。选择同期来我院体检的健康成人15例为对照组，均通过冠状动脉造影排除冠心病，年龄42～68〔平均(59.58±7.28)〕岁，其中男9例，女6例，高血压病史6例，糖尿病史2例，吸烟史5例。两组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经我院伦理委员会审查通过研究对象均知情同意。

1.2标本采集 研究对象入院后即刻(0 h)采肘静脉血2管，此外MI患者在入院后6、12、24、48、72、96 h分别采血一次，每次2管，一管即刻送医院检验科检测cTnⅠ；另一管用抗凝管采集后在室温下静置30 min，3 000 r/min离心20 min取上层血浆，用焦碳酸二乙酯(DEPC)处理过的EP管分装并标记后存放于-20℃冰箱中备用，待样本收集齐全后统一检测。

1.3逆转录聚合酶链反应(PCR)检测UCA1 将血浆置于冰上解冻，采用Trizol法提取血浆样本中的总RNA，用去酶水溶解后备用。采用Bio-rad公司的反转录试剂盒将RNA逆转录成cDNA，逆转录步骤：25℃ 5 min，42℃ 30 min，85℃ 5 min，4℃保持。得到的cDNA采用荧光定量PCR(qPCR)的方法检测UCA1的表达水平，采用Bio-rad公司SsoFast Supermix试剂盒，反应程序：98℃预热30 s，98℃变性5 s，61℃退火/延伸5 s，读板，40个循环。反应引物由大连宝生物公司设计合成，上游引物5′-ACGCTAACTGGCACCTTGTT-3′，下游引物5′-TGGGGATTACTGGGGTAGGG-3′。

1.4统计学方法 应用SPSS17.0软件进行t检验、单因素方差分析、χ2检验。

2 结 果

2.1两组cTnⅠ水平比较 与对照组比较，除入院时MI组血清cTnⅠ未见明显变化(P>0.05)，其余任意时间点MI组均显著高于对照组(P<0.05)。MI组血清cTnⅠ浓度迅速增加至24 h时达到峰值，并持续至48 h，随后缓慢下降。见表1。

2.2两组UCA1水平比较 与对照组比较，MI组血浆中UCA1表达水平在6、12、24、48 h时均显著降低(均P<0.05)，其余时间两组差异无统计学意义(均P>0.05)。MI组血浆UCA1表达水平随时间增加迅速降低，12～24 h时即达到最低值，48 h后开始上升，并迅速恢复至正常水平。见表2。

2.3高血压及糖尿病对UCA1的影响 依据疾病史将患者分为单纯MI组(既无高血压也无糖尿病，12例)、高血压MI组(仅有高血压而无糖尿病，7例)、糖尿病MI组(仅有糖尿病而无高血压，3例)和联合患病组(既有高血压也有糖尿病，3例)。取0、12、72 h的UCA1表达水平进行分析，不同组间在各时间点UCA1表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。见表3。

表1 两组不同时间血清cTnⅠ水平比较

表2 两组不同时间血浆UCA1表达水平比较

表3 不同分组UCA1表达水平比较

3 讨 论

MI是在冠状动脉粥样硬化的基础上，由于供血急剧减少甚至中断导致的相应心肌缺血坏死性疾病。MI发病急骤，发病前常没有临床征兆，发病后伴有严重的并发症，尤其是心室颤动和心脏破裂，甚至导致死亡 。我国MI的发病率为45/10万～55/10万〔6〕。WHO推荐使用的生物学标志是cTnⅠ，它是cTn家族中特异性存在于心肌中的一种蛋白，具有高度器官特异性，进入血液后能够长时间存在，检测窗口长〔7〕。随着临床上的广泛使用，发现cTnⅠ升高除了见于MI外，还可发生在任何导致心肌细胞损伤或通透性改变的疾病和病理状态下。

自从人类基因组计划以来，发现人类基因组DNA转录为RNA后仅2%可翻译成蛋白质〔8〕，剩余98%未翻译成蛋白质的RNA被称为ncRNA。以往这些ncRNA被认为是“基因噪声”，然而随着分子生物学的发展，越来越多的ncRNA被发现与基因表达、转录、翻译具有密切关系，在人体的生长、代谢、疾病的过程中发挥重要作用〔9〕。lncRNA长度超过200 bp，因此具有更复杂的二级结构，目前已发现的功能包括调控细胞周期、凋亡〔10〕。UCA1是在膀胱细胞癌中发现的一种lncRNA，由于其高度表达被作为膀胱癌的潜在生物标志物〔11〕。研究表明其参与了胚胎发育过程，在28 w的妊娠组织中，UCA1在心脏、子宫、膀胱中高表达，而在肝、肾、肺、胃等组织中表达下降〔12〕。而在成人组织中，UCA1仅在心脏和脾脏中表达，且在心脏中的表达水平更高〔13〕。本研究结果表明UCA1在MI中发生了显著变化，具有作为生物学标志物的潜力，与cTnⅠ相比，检测窗口期更短，但也提示其可能与病程发展关系更密切，变化更敏感。同时本研究结果还表明UCA1在血浆中的表达水平仅与MI有关，而与这些基础疾病无关，提示UCA1具有良好的特异性。

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2Kashlov JK，Donev IS，Doneva JG，etal.Serum levels of RIPK3 and troponin I as potential biomarkers for predicting impaired left ventricular function in patients with myocardial infarction with ST segment elevation and normal troponin I levels prior percutaneous coronary intervention〔J〕.Biosci Trends，2016；10(4)：294-9.

3Su Y，Wu H，Pavlosky A，etal.Regulatory non-coding RNA：new instruments in the orchestration of cell death〔J〕.Cell Death Dis，2016；7(8)：e2333.

4夏 天，肖丙秀，郭俊明，等.长链非编码RNA的作用机制及其研究方法〔J〕.遗传，2013；35(3)：269-80.

5Li Y，Wang T，Li Y，etal.Identification of long-non coding RNA UCA1 as an oncogene in renal cell carcinoma〔J〕.Mol Med Rep，2016；13(4)：3326-34.

6吴学丽.年龄对心肌梗死发病时间规律的影响〔J〕.中国卫生标准管理，2015；6(12)：19-20.

7Pickering JW，Greenslade JH，Cullen L，etal.Validation of presentation and 3 h high-sensitivity troponin to rule-in and rule-out acute myocardial infarction〔J〕.Heart，2016；102(16)：1270-8.

8Cui Y，Lu S，Tan H，etal.Silencing of long non-coding RNA NONHSAT009968 ameliorates the staphylococcal protein a-Inhibited osteogenic differentiation in human bone mesenchymal stem cells〔J〕.Cell Physiol Biochem，2016；39(4)：1347-59.

9Li J，Zhuang C，Liu Y，etal.Synthetic tetracycline-controllable shRNA targeting long non-coding RNA HOXD-AS1 inhibits the progression of bladder cancer〔J〕.J Exp Clin Cancer Res，2016；35(1)：99.

10Sun L，Li Y，Yang B.Downregulated long non-coding RNA MEG3 in breast cancer regulates proliferation，migration and invasion by depending on p53′s transcriptional activity〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，2016；478(1)：323-9.

11Li F，Hu CP.Long non-coding RNA urothelial carcinoma associated 1 (UCA1)：insight into its role in human diseases〔J〕.Crit Rev Eukaryot Gene Expr，2015；25(3)：191-7.

12Daneshvar K，Pondick JV，Kim BM，etal.DIGIT Is a conserved long noncoding RNA that regulates GSC expression to control definitive endoderm differentiation of embryonicstem cells〔J〕.Cell Rep，2016;17(2)：353-65.

13简 杰，郑少忆.长链非编码RNA在心肌保护中的作用探讨〔J〕.岭南心血管病杂志，2016;22(4)：481-4.

陈 旸(1975-)，男，硕士，副主任医师，主要从事老年心脏病学研究。

唐艺加(1975-)，男，硕士，主治医师，主要从事介入心脏病学研究。

R541.4

A

1005-9202(2017)20-5025-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.20.031

〔2017-01-11修回〕

(编辑 滕欣航)