低共熔溶剂萃取荧光法快速检测辣椒油中的罗丹明B

林纯忠，王韦达，陈美婷，刘慧强，张 清，杜业刚

（1.深圳市龙华区动植物检验检测中心，广东 深圳 518131；2.深圳市计量质量检测研究院，广东 深圳 518100）

低共熔溶剂萃取荧光法快速检测辣椒油中的罗丹明B

林纯忠1，王韦达2，陈美婷2，刘慧强2，张 清1，杜业刚2

（1.深圳市龙华区动植物检验检测中心，广东 深圳 518131；2.深圳市计量质量检测研究院，广东 深圳 518100）

罗丹明B是一种碱性工业染料，由于它对人体具有潜在的致癌毒性而被禁止添加在食品中。然而，一些不法商贩用罗丹明B作为食品着色剂掺杂在辣椒油中。利用由氯化胆碱和乙二醇（摩尔比为1∶3）合成的低共熔溶剂作为提取介质，酶标仪作为荧光信号检测器实现了辣椒油中罗丹明B的快速定性检测。

罗丹明B；低共熔溶剂；酶标仪；氧杂蒽染料

罗丹明B又称碱性玫瑰精（分子结构如图1所示，pKa=3.7），是一种人工合成的氧杂蒽染料，作为荧光试剂被广泛应用在金属离子识别，蛋白标记等领域，但由于它对人体存在潜在的致癌、致畸性，被欧洲食品安全局禁止应用于食品中。然而，一些不法商家在利益的诱惑下将罗丹明B用作着色剂对辣椒油进行染色，以增加产品的色泽。尽管食品中罗丹明B的检测方法已有众多的报道，例如高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法、酶联免疫分析法等，但这些方法检测周期长，不适用于对大批量的辣椒油进行快速筛查。因此，有必要建立一种可以对罗丹明B进行快速定性的检测方法。近年来，低共熔溶剂作为一类新型绿色环保溶剂在分离技术领域引起了广泛的关注。杨国武等人发现，由氯化胆碱和乙二醇按照摩尔比1∶3组成的低共熔溶剂（DES-1）可以从辣椒油中选择性萃取罗丹明B。考虑到罗丹明B的荧光特性，我们产生了通过直接读取提取液荧光信号对罗丹明B进行定性检测的想法。为了将这一想法付诸实践，我们利用酶标仪收集了提取液的荧光数据。

图1 罗丹明B分子结构式

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

多功能酶标仪（BioTek SynergyTM HTΧ，美国）；IKAGENIUS 3涡轮器：德国IKA公司；HERMLE Z323高速离心机：德国Hermle-Labortechnik公司；微孔过滤膜（0.22 μm）：美国Millipore公司；离心管（15 mL）：美国康宁公司。

甲醇（色谱纯）：Merck公司；正己烷（色谱纯）：Merck公司；氯化胆碱（分析纯）：Aladdin公司；乙二醇（分析纯）：上海凌峰化学公司；罗丹明B标准物质（纯度95.0%）：Dr.Ehrenstorfer GmbH公司；罗丹明B溶解于甲醇中制备成储备液（1.00 mg/L）。低共熔溶剂（DES-1）的合成：称取27.908 g氯化胆碱和24.811 g乙二醇加入茄形瓶中，氮气保护下加热至100℃，磁力搅拌至反应液呈澄清透明状，冷却至室温即可。

1.2 样品前处理

称取约1 g样品，精确至0.001 g，置于15 mL离心管中，分别加入低共熔溶剂（DES-1）和正己烷1.0 mL和5.0 mL，涡旋震荡1 min，于7 500 rpm离心5 min，用吸管取走上面的正己烷层，向剩余物中再次加入5.0 mL正己烷，涡旋震荡1 min；于7 800 rpm离心3 min，用吸管取走上面的正己烷层，残留物用甲醇定容至5.0 mL，过0.22 μm微孔滤膜，供检测用。

1.3 荧光分析条件

测样体积为200 μL，激发波长为530/25 nm，检测波长为590/35 nm。

2 结果与讨论

实验结果如图2所示，样品提取液的荧光强度随着罗丹明B浓度的增加而增强，且单个样品的荧光检测过程仅需要数秒即可完成，大大缩短了样品的检测周期。

图2 罗丹明B不同添加水平的辣椒油提取液的荧光强度图

实验结果说明，辣椒油中是否含有罗丹明B可以通过酶标仪直接读取样品提取液的荧光信号进行快速定性，该方法的定性检出限为200 μg/kg，可应用于大批量辣椒油的快速定性筛查，为保障食品安全提供一种新的便捷技术。

3 实际样品检测

市场随机抽取辣椒油样品50份，应用所建立的分析方法对这些样品进行了罗丹明B的快速定性检测。实验结果显示，在抽取的辣椒油样品中未检测到罗丹明B的特征荧光信号，检测结果的准确性也得到了高效液相色谱仪（HPLC）的进一步验证。另外，在添加罗丹明B的样品中（添加水平为600 μg/kg），酶标仪均检测到了较强的荧光信号。说明利用低共熔溶剂（DES-1）萃取结合酶标仪建立的罗丹明B快速定性方法具有潜在的市场应用价值。

4 结论

我们首次利用低共熔溶剂萃取结合酶标仪建立了罗丹明B的定性分析方法，该方法操作简单，分析快速，可适用于大批量辣椒油的快速筛查工作，为食品安全提供了一种全新的便捷技术。

［1］陈家逸，苏伟，王恩举.基于1，8-萘酰亚胺与罗丹明B间荧光共振能量转移的高选择性Hg2+比率荧光探针［J］.高等学校化学学报，2016（37）.

［2］王颖，李钟卉，钟文英，等.罗丹明B硅纳米粒子探针及其在蛋白芯片检测中的应用［J］.中国科学，2010（40）.

R187

A

10.15913/j.cnki.kjycx.2017.21.032

2095－6835（2017）21－0032－02

林纯忠（1976—），男，广东揭阳人，硕士，工程师，研究方向为农产品安全及食品化学分析。林业刚（1978—），男，博士，研究方向为食品化学分析。

〔编辑：张思楠〕