优生咨询产前诊断的羊水细胞培养分析

王春莲

(广西贺州市妇幼保健院，广西 贺州 542800)

优生咨询产前诊断的羊水细胞培养分析

王春莲

(广西贺州市妇幼保健院，广西 贺州 542800)

目的探究羊水细胞培养，在优生咨询产前诊断的意义。方法选取我院2015年1月至2016年1月进行优生咨询产前诊断的962例孕妇，962例孕妇在产前诊断时，疑有胎儿染色体异常的情况，对孕妇实行羊水细胞培养的方式，来进行产前的诊断，对孕妇的胎儿的染色体异常进行分析，分析主要核型。结果962例孕妇的羊水细胞培养，出现19例异常染色体核型，其中18三体1例， 21三体7例，结构异常5例，性染色体异常6例。结论羊水细胞培养对于优生咨询产前诊断有重要的意义，能够有效地发挥作用，判断胎儿染色体异常的核型，是孕妇选择是否终止妊娠的重要依据。

优生咨询；产前诊断；羊水细胞培养

我国每年出生的，染色体异常的新生儿有很多，对孩子和家庭带来许多负面影响，主要原因是没有进行产前诊断。优生咨询产前诊断的主要目的，是为导致畸胎的因素，或者可能出现的遗传病等疾病提供依据，从而使孕妇和家属进行选择，是否终止妊娠[1]。产前诊断在发达国家是临床产科的重要一部分。随着我国优生意识的提高，对产前筛查，产前诊断的要求也越来越高。目前在优生咨询产前诊断中，最常用的方式是羊水细胞培养。采用羊水细胞培养的方式，可以对孕妇的染色体核型进行有效分析，判断胎儿的异常情况。但是这种方式也有一些负面作用。虽然羊水穿刺检查具有一定的创伤性，但无创伤的方式还不够成熟，应用广泛并且经济可行、发展成熟的还是羊水细胞培养[2]。羊水细胞检查能够对胎儿的先天畸形、染色体病、血液系统遗传病、先天代谢异常等进行诊断。为探究羊水细胞培养，在优生咨询产前诊断的意义，选取我院例孕妇进行研究，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2015年1月至2016年1月进行优生咨询产前诊断的962例孕妇。孕妇明确研究目的，签署知情同意书，并同意进行羊膜腔穿刺。962例孕妇年龄17岁到46岁之间，平均年龄27.3±3.6岁，孕周16周到25周之间，平均孕周20.1±0.5周。其中有高龄孕妇136例，有服药史孕妇11例，不良孕产史孕妇有102例，经过彩超检查显示胎儿畸形的有42例，唐氏征筛查高风险的有678例。962例孕妇全部进行羊水标本的采集和细胞培养。

1.2 方法

1.2.1 在B超的引导下，临床医生对孕妇进行羊膜腔穿刺。孕妇在抽取羊水前排空膀胱，并采取侧卧的姿势，使用无菌注射器，避开胎头、胎体、胎盘，先抽取孕妇羊水1毫升到2毫升，并弃去。再使用2支无菌注射器，每只10毫升，一共抽取20毫升后，送到实验室进行检验。孕妇的穿刺针口要使用无菌纱布覆盖，避免出现感染的问题。孕妇需要卧床休息两小时后才能离开，在两天内禁止性生活，并且一周内活动要适度。在超净台上，孕妇的羊水标本装到两支无菌离心管中，羊水每分钟1200转，离心十分钟吸弃上清。然后留取大约0.5毫升的羊水和细胞沉淀物，混匀之后分别接种，使用斜面培养管，里面盛有2毫升的羊水完全培养液。接着使用培养箱，在里面静止培养六天。经过显微镜观察，有散在的，或者成堆的梭形细胞在贴壁生长，换液，并在隔天对细胞的生长情况进行观察。如果细胞增殖比较旺盛，可以在分裂细胞多的时候收获。如果细胞的增殖情况不同步，在见到七个到九个大克隆就可以传代，第二天通过显微镜观察，如果细胞密度合适，抓住重要时机进行收获。

1.2.2 加入秋水仙素，浓度是25μg/ml，滴入一滴，继续培养三小时到四小时，然后收获细胞。在离心管中倒入培养液，加入大约0.2毫升的胰酶-EDTA消化液。加入大约2毫升的氯化钠溶液，放入恒温箱中，温度37℃。三到五分钟后，通过显微镜观察，细胞已经脱落。用离心管吸入液体，使用生理盐水冲洗瓶壁，温度37℃，也用离心管吸入。液体每分钟1200转，离心十分钟，弃掉上面清液，大约留取0.5毫升。然后用手轻轻弹管底，加入1毫升的低渗液，由氯化钾和拘櫞酸纳组成。低渗六分钟后，加入固定液，由冰乙酸和甲醇组成，滴完后混匀，静止六分钟后，液体每分钟1200转离心十分钟，弃上清。加入4毫升的固定液混匀，固定25分钟后，同样离心十分钟，弃上清。继续加入4毫升的固定液，再次离心、固定，弃上清。观察沉淀的细胞有多少，再加入新的固定液，使用合适的滴片浓度，吹匀后，采用湿冰片进行制片。放入烤箱烤片，温度75℃，时间三小时。用胰酶消化，吉姆萨染色液染色，分析G显带。

1.3 判定标准 使用显微镜，常规计数，分析G显带核型。使用染色体核型分析软件，采集分析核型，如果有数目异常的，记数中期分裂相。变异染色体再做N显带和C显带。

2 结果

对962例孕妇进行羊水细胞培养，出现19例异常染色体核型，其中其中18三体1例， 21三体7例，结构异常5例，性染色体异常6例。见表1

表1 羊水细胞培养异常染色体核型的类型(n/%)

3 讨论

有关资料显示，我国每年大约有30万到40万的缺陷儿出生，其中因为遗传因素引起的在25%左右。常见的遗传因素，是染色体异常，目前还没有有效的方式进行治疗，因此要做好预防工作。临床一般采用羊水细胞培养的方式，分析染色体核型，进行优生咨询产前诊断。主要针对有不良孕产史孕妇、高龄孕妇、高风险孕妇、或者夫妇一方有染色体异常、B超发现胎儿异常孕妇进行产前诊断，为孕妇和家属提供参考依据，避免染色体异常的胎儿出生。在本次调查研究中，出现的19例异常染色体核型，其中18三体1例， 21三体7例，结构异常5例，性染色体异常6例。在检测中，预防三体综合征是优生咨询的重点，即13三体、18三体和21三体。21三体又称唐氏综合征，它是一种比较常见的染色体病，产儿主要的症状是智力低下。通常发病率是0.01%～0.02%。大约有四分之三的孕妇会选择自发流产，如果胎儿出生，基本上没有自理的能力，有的患儿可以活到成年，家庭将会背负巨大的精神压力和经济压力。在B超检测中，只有1例孕妇显示出异常，其他21三体胎儿，都是通过羊水细胞培养检测出来的。不少孕妇存在侥幸心理，B超检测后，可能不愿意进行产前羊水或者脐血的诊断，胎儿出生后很可能确诊为21三体，影响胎儿和家庭的正常生活[3]。通常认为，母亲生育年龄越高，三体的发生率也会随之增高，随着现代生活方式的变化，三体异常有逐渐年轻化的趋向。

3.1 常染色体结构异常，通常是双亲遗传的。在本次检测中，21三体的比率最高，达到了36.84%，它一般只是遗传物质的转移，没有丢失，所以表型显示正常。基本上所有的染色体都会出现倒位，9号染色体的频率最高。如果羊水检测出倒位、易位、罗氏易位染色体异常的情况，需要夫妻双方进行染色体检查。有一方的染色体异常，那么下一代染色体异常的风险就会比较高[4]。夫妻双方的染色体检查如果和胎儿一致，可以继续妊娠，但是如果核型不一致，可能原因是生殖细胞新生突变。如果孕妇不同意终止妊娠，需要进一步诊断，减少畸形儿的出生。

3.2 性染色体异常主要是其X或者Y的结构、数目出现异常，本次检测出两例，2例核型47，XXY。这种核型的胎儿，长大后有自理能力，通常不会影响正常的生活，父母可以自行选择。另外4例核型45，XO，这种核型胎儿在宫内存活率比较低，容易流产。存活后，胎儿可能身材矮小，发育不全，智力比一般人低，大致正常[5]。长大后也会有生活生理能力，需要父母进行选择。

综上所述，羊水细胞培养对于优生咨询产前诊断有重要的意义，能够有效地判断胎儿染色体异常的核型，是孕妇选择是否终止妊娠的重要依据。要提高孕妇优生咨询产前诊断的认识，做好孕妇的产前宣传工作，使孕妇能够了解产前诊断的重要性，了解如果没有有效的产前诊断，可能发生的危害。从而使孕妇能够自觉接受检查，配合检查，进行羊水细胞培养检测，及时查出是否有异常情况，避免出现漏诊，保证达到优生的目的。

[1] 罗小金, 胡亮, 杨艳,等. 615例产前诊断羊水染色体异常与多态性核型分析[J]. 中国优生与遗传杂志, 2015(5):37-39.

[2]李玉. 孕中期孕妇B超引导下羊水细胞染色体产前诊断安全性探讨[J]. 中国优生与遗传杂志, 2014(11).

[3]肖雪, 钱源, 杨智丽. 513例孕妇羊水产前诊断结果分析[J]. 中国优生与遗传杂志, 2015(1):29-29.

[4]初云霞, 贺方华. 有产前诊断指征的孕中期孕妇进行羊水细胞染色体核型分析的意义[J]. 中国妇幼保健, 2015, 30(22):3856-3858.

[5]刘慈, 刘学军, 辛虹,等. 羊水细胞培养用于染色体病产前诊断分析[J]. 河北医药, 2014(8):1132-1134.

10.3969/j.issn.2095-9559.2017.05.077

2095—9559(2017)05—3443—02

2016-10-17