HPLC法测定山葡萄藤中白藜芦醇的含量

吴艳丽，杨鸿雁，郭君钦

（吉林省药品检验所，吉林 长春 130033）

HPLC法测定山葡萄藤中白藜芦醇的含量

吴艳丽，杨鸿雁，郭君钦

（吉林省药品检验所，吉林 长春 130033）

目的研究建立山葡萄藤质量标准的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定山葡萄藤中白藜芦醇的含量。色谱柱：Alltima HP C18 5 μm（250×4.6）mm；流动相：乙腈-水（29:71）；流速：0.8 ml/min；柱温：35℃；检测波长：306 nm；结果白藜芦醇在0.02～0.31 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999）；平均加样回收率为102.67%，RSD=0.79%（n=6）。结论该方法简便易行，准确，可作为控制山葡萄藤质量的方法。

山葡萄藤；HPLC；白藜芦醇

山葡萄藤为葡萄科植物山葡萄Vitis amurensis Rupr的干燥藤茎。山葡萄藤中含白藜芦醇，白藜芦醇可预防癌症的发生及发展，还具有雌激素样作用，可用于治疗乳腺癌等疾病。

1 仪器与试药

岛津 LC-2010C高效液相色谱仪；白藜芦醇对照品。乙腈，纯化水。

样品：七星山药业有限公司、金泉宝山药业有限公司、东丰药业有限公司、新安药业有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 测定波长的选择

取白藜芦醇对照品的70%乙醇溶液，经Shimadzun UV-2550型分光光度计在200～400 nm波长范围内进行光谱扫描，得光谱图，白藜芦醇在306.10 nm波长处有最大吸收，故选定测定波长为306 nm。

2.2 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Alltima HP C18 5μm（250×4.6）mm；流动相：乙腈-水（29：71）；检测波长：306 nm；柱温：35℃；流速：0.8 ml·min-1。

2.3 对照品溶液制备

取白藜芦醇对照品，制成每1 mL含20 μg的溶液，即得。

2.4 供试品溶液溶液制备

取本品粗粉1.0 g，精密称定，精密加入70%乙醇50 mL，称定重量，加热回流提取2小时，冷却至室温，即得。

2.5 相色谱

在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各5 μl，分别注入液相色谱仪，测得各液相色谱图（图1、2），供试品色谱中，在与白藜芦醇对照品色谱相应的位置上有相应的色谱峰，保留时间为8.7 min左右，理论板数以白藜芦醇峰计N=16670。

图1 白藜芦醇对照品高效液相色谱图

图2 山葡萄藤样品高效液相色谱图

2.6 线性关系考察

精密吸取对照品溶液（白藜芦醇：20.84 μg·ml-1）1 μL、3 μL、5 μL、7 μL、9 μL、15 μL，按上述色谱条件分别注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积对进样量进行线性回归，回归方程为：Y＝9098863.8X+22102 r＝0.9999，线性范围在0.02～0.31 μg。

2.7 回收率试验

精密称取已知含量（0.6246 mg·g-1）的山葡萄藤样品0.5 g，6份，各精密加入白藜芦醇对照品溶液（12.504 μg·ml-1）25 mL和70%乙醇溶液25 mL，摇匀，按2.4项下方法提取制备供试品溶液，依法测定，结果回收率分别为103.46%，101.90%，103.21%，101.81%，103.57%，102.12%；平均回收率为102.67%，RSD=0.79%，表明本法准确度较好。

3 样品测定

依正文方法测定4家药厂提供的4批样品，结果分别为0.0648%，0.0910%，0.0703%，0.2901%。

4 讨 论

试验中发现白藜芦醇对照品溶液和供试品溶液在放置过程中峰面积随时间的延长而缓慢减小，但在24小时内基本稳定，RSD为1.5%。

由上述方法学试验示出，本含量测定方法具有一定的精密性，稳定性，重复性和准确性，可作为本产品的质量控制方法。

文献报道中多见对葡萄酒、葡萄皮和葡萄籽中白藜芦醇的含量分析，目前，山葡萄藤已应用于中药制剂中，本文对山葡萄藤中白藜芦醇含量进行了测定，为葡萄藤的开发利用提供了参考。

[1] 向 阳,张 彤,张 煊,马 龙.高效液相色谱法测定葡萄皮和葡萄籽中白藜芦醇的含量[J].卫生研究,2003,32(5):490.

[2] 刘达雄,栾玉明,区伟全,王国玲,蒋卓勤.国产葡萄酒中白藜芦醇含量分析[J].中国卫生检验杂志,2008,18(12):2813.

R284.2

B

ISSN.2095-8242.2017.38.7499.01

本文编辑：吴玲丽