液质联用法测定水产品中孔雀石绿及其代谢物残留

□ 吴俊伟 姜 宇 营口市鲅鱼圈区产品质量监督检验所

液质联用法测定水产品中孔雀石绿及其代谢物残留

□ 吴俊伟 姜 宇 营口市鲅鱼圈区产品质量监督检验所

为测定水产品中的孔雀石绿和隐性孔雀石绿残留，建立水产品中两种成分的液质联用检测方法。结果表明，孔雀石绿和隐性孔雀石绿在一定的范围内浓度与响应值呈显著的线性关系。添加不同水平的孔雀石绿和隐性孔雀石绿，在样品中回收率均大于80%，具有回收率高、分析效率高和节省成本的特点，能满足水产品中孔雀石绿和隐性孔雀石绿的检测需求。

液质联用法；孔雀石绿；水产品

孔雀石绿（MG）属于人工合成的染料，因其价格低廉、使用方便，常用于鱼类水霉病等寄生虫病的防治，以延长鱼类的存活时间。实验研究表明，孔雀石绿进入人或动物机体后，可以通过生物转化，还原代谢成脂溶性的隐性孔雀石绿（LMG）。LMG具有高毒性、高残留和致癌、致突变等副作用，严重威胁消费者的身体健康。2002年5月，我国农业部将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》中，禁止用于所有食品动物。

质谱作为通用检测器，在串联液相色谱条件下，针对特定选择离子，可以定性定量检测，同时可以把杂质基线干扰降低。LC-MS/MS，在低浓度范围内检测尤显优势。本研究拟采用高效液相色谱串联质谱仪，建立水产品中孔雀石绿及其代谢物残留的检测方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

淡水鱼6种：购于农贸市场。乙腈、甲醇：色谱纯（Fisher公司）。中性氧化铝柱：1 g/3 mL（安捷伦科技）。标准品：孔雀石绿、隐性孔雀石（农业部环境保护科研监测所）。同位素内标：氘代孔雀石绿、氘代隐性孔雀石绿（德国Dr.Ehrenstorfer）

1.2 仪器与设备

AUW220D电子天平（日本岛津）、LCQQQ 1260-6420液相色谱质谱联用仪ESI离子源（美国安捷伦）、旋转蒸发仪（京东理化）、匀浆机、超声波水浴、漩涡振荡器、离心机和固相萃取仪。

1.3 仪器工作条件

色 谱 柱：SB-C181.8 μm 2.1×50 mm；色谱条件：通过优化，运用梯度洗脱效果最好（见表1）；流速：0.2 mL/min；柱温：40 ℃；进样量：10 μL；质谱条件：正离子ESI模式，雾化器40 psi，干燥气流速9 L/min，毛细管电压4 000 V，干燥气温度350 ℃。

表1 流动相梯度表

1.4 标准溶液的制备

临用时配成标准溶液：孔雀石绿和隐性孔雀石绿含量100 ng/mL，同位素内标氘代孔雀石绿和氘代隐性孔雀石10 ng/mL。

表2 经过优化的质谱条件

1.5 样品前处理

1.5.1 提取

称取5.00 g捣碎样品于50 mL离心管中，加入20 ng混合内标溶液，加入10 mL乙腈，超声震荡提取2 min，匀浆提取30 s（时间不能过长，否则内标分解），4 000 r/min离心5 min，上清液转移至25 mL比色管中。用10 mL乙腈洗刀头，合并到离心管中，涡旋震荡，超声震荡提取2 min，4 000 r/min离心5 min，合并上清液，用乙腈定容到25.0 mL备用。

1.5.2 净化

移取5.00 mL样品溶液加入已经活化的中性氧化铝柱，并用4 mL乙腈洗涤中性氧化铝柱，收集全部流出液，旋转蒸发进干，用流动相定容1 mL，过0.2 μm滤膜上机测定。

2 结果与分析

2.1 质谱条件的选择

实验室条件下对质谱的参数进行优化，具体见表2。

2.2 定量测定

结果以色谱峰面积按内标法定量[1]，以氘代孔雀石绿为内标计算孔雀石绿残留量，以氘代隐性孔雀石为内标物计算隐色孔雀石绿残留量。6个样品均未检出孔雀石绿及隐性孔雀石绿。

本方法的定量限为0.5 μg/kg，线性相关范围为0.1～100 μg/L。

孔雀石绿回归方程：

Y=0.25X-0.097，R2=0.999

隐性孔雀石绿回归方程：

Y=1.46X+0.188，R2=0.998

2.3 孔雀石绿的不同添加水平回收率

在样品中添加不同水平的孔雀石绿和隐性孔雀石绿的回收率＞80%，孔雀石绿添加量为5、20、100 μg/kg时，回收率为83.4%、87.3%、84.5%；隐性孔雀石绿添加量为5、20、100 μg/kg时，回收率为82.4%、86.5%、85.7%。

3 结论

研究建立的水产品中孔雀石绿及其代谢物隐性孔雀石绿的检测方法，简易可行，能有效减少杂质的同时提取目标化合物。建立的色谱条件能稳定且快速地进行定量检测，可以用于水产品的国内市场检测和监控。

[1]中华人民共和国国家质量监督检验检验总局.水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定GB/T 19857-2005[S].北京:中国标准出版社,2005.