不同前处理方法测定林蛙牛骨胶囊中钙含量实验对比研究

赫玉芳 王 雪 赵昱玮 司学玲 于 淼 南敏伦▲

1.吉林省中医药科学院，吉林长春 130012；2.吉林农业大学，吉林长春 130118；3.修正药业集团长春高新制药有限公司，吉林长春 130012；4.长春三德天晟科技有限公司，吉林长春 130012

不同前处理方法测定林蛙牛骨胶囊中钙含量实验对比研究

赫玉芳1王 雪2赵昱玮1司学玲3于 淼4南敏伦1▲

1.吉林省中医药科学院，吉林长春 130012；2.吉林农业大学，吉林长春 130118；3.修正药业集团长春高新制药有限公司，吉林长春 130012；4.长春三德天晟科技有限公司，吉林长春 130012

目的建立保健食品林蛙牛骨胶囊中钙的含量测定方法。方法样品采用湿法消解﹑微波消解法﹑压力罐消解及干法灰化处理样品，以火焰原子吸收光谱法对林蛙牛骨胶囊中钙的含量进行对比研究，比较不同消解方法的精密度﹑重复性及回收率等。结果湿法消解﹑微波消解法﹑压力罐消解测定林蛙牛骨胶囊中钙平均回收率分别为99.16%﹑98.90%﹑97.83%。结论采用微波消解法进行前处理更简便﹑更快捷，测得样品中钙的含量也相对较高，更适用于林蛙牛骨胶囊中钙含量的测定。

火焰原子吸收光谱法；林蛙牛骨胶囊；钙

林蛙牛骨胶囊中的钙是其主要的功效成分也是人体所必需的营养物质，并且在维持人体循环﹑神经﹑内分泌﹑消化﹑骨骼﹑免疫等多项生理功能具有调节作用。测定样品中钙的含量主要按照GB 5009.92-2016《食品安全国家标准 食品中钙的测定》进行测定，其中样品的前处理方法对实验结果有影响，本文主要针对样品前处理湿法消解法﹑微波消解法﹑压力罐消解法及干法灰化对钙含量测定的影响进行比较分析研究[1]。从而对林蛙牛骨胶囊中钙的含量进行测定分析，确定最佳的前处理方法，为制定林蛙牛骨胶囊中钙的含量测定方法提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

林蛙牛骨胶囊自制；氧化镧﹑高氯酸﹑盐酸﹑硝酸（均为优级纯）北京化工厂；水为超纯水；碳酸钙（纯度为99.99%）中国计量科学研究院。

1.2 仪器与设备

AA-6300C型原子吸收光谱仪（配火焰原子化器，钙空心阴极灯）（日本岛津）；分析天平（Sartorius）；MSP-6600微波消解仪（杭州德茂科技有限公司）；可调式电热炉（永康市格力王实业有限公司）；可调式电热板（武汉格莱莫检测设备有限公司）；压力消解罐（滨海正红塑料厂）；马弗炉（上海均珂仪器科技有限公司）。

2 方法与结果

2.1 测定依据

按GB 5009.92-2016《食品安全国家标准 食品中钙的测定》中第一法火焰原子吸收光谱法测定林蛙牛骨胶囊中钙的含量。

2.2 样品处理

2.2.1 湿法消解 取林蛙牛骨胶囊，研细，取0.5g，精密称定，置消化管中，加入10mL硝酸及0.5mL高氯酸，在可调式电热板上消解（参考条件：120℃/h﹑升至180℃/3h﹑升至200～220℃)。消解至消化液为无色透明或稍微带黄色，若消化液颜色较深,再加硝酸,继续消化。消化结束后，取出消化管,用水转移至500mL量瓶中，加入50mL镧溶液（20g/L），并定容至刻度，备用[1-2]。

2.2.2 微波消解 取林蛙牛骨胶囊，研细，取0.5g，精密称定，置微波消解罐中，加入5mL硝酸，120℃升温 5min，恒温 5min，160℃升温 5min，恒温10min，180℃升温 5min，恒温 10min，冷却后取出，在140℃电热板上驱赶酸至1mL左右。放冷后，用水转移至500mL量瓶中，加入50mL镧溶液(20g/L)，并定容至刻度，备用[1-2]。

2.2.3 压力罐消解 取林蛙牛骨胶囊，研细，取0.5g，精密称定，置消解罐中，加入5mL硝酸。盖好内盖，旋紧不锈钢外套，放入干燥箱，于150℃保持5h。冷却后取出消解内罐，在140℃电热板上驱赶酸至1 mL左右。放冷后，用水转移至500mL量瓶中，加入50mL镧溶液（20g/L），并定容至刻度，备用[1-2]。2.2.4 干法灰化 取林蛙牛骨胶囊，研细，取0.5g，精密称定，置坩埚中，小火加热至无烟，取出，放入马弗炉中，在550℃灰化4h，取出。加入数滴硝酸，小火加热蒸干，再放入550℃马炉中，灰化2h，取出，用适量硝酸溶液（1+1）溶解转移至至500mL量瓶中，加入50mL镧溶液（20g/L），并用水定容至刻度，备用[1-2]。

2.3 仪器条件

波长（nm）：422.7；灯电流（mA）：10；狭缝宽（nm）：1.3；燃烧头高度（mm）：3；空气流量（L/min）：9；乙炔流量（L/min）：2[1]。

2.4 标准曲线的绘制

准确称取2.4963g碳酸钙，置1000mL容量瓶中，加（1+1）盐酸溶液溶解，加水定容至刻度，摇匀，作为钙标准储备液；准确吸取钙标准储备液5mL于50mL量瓶中，加（5+95）硝酸溶液至刻度，混匀，作为钙标准中间液；分别吸取钙标准中间液0﹑0.5﹑1.0﹑2.00﹑4.00﹑6.00mL 于 100mL 量瓶中，另在各容量瓶中加入5mL镧溶液（20g/L），最后加（5+95）硝酸溶液定容至刻度，混匀。此配制的钙标准系列溶液中钙的质量浓度分别为 0﹑0.500﹑1.00﹑2.00﹑4.00和6.00mg/L。用原子吸收光谱法测定，以浓度为横坐标，吸收值为纵坐标，计算回归方程，实验结果表明，钙在0～6.00mg/L之间线性良好，线性方程为A=0.0048C+0.0035，r=0.9998。

2.5 精密度试验

取林蛙牛骨胶囊，取0.5g，研细，精密称定，分别按“2.1”项下方法分别制备供试品溶液，每个样连续测定6次，计算样品中钙的含量及RSD，结果表明，湿法消解﹑微波消解﹑压力罐消解﹑干法灰化测定钙的含量分别为：3.75×103﹑3.98×103﹑3.84×103﹑3.62×103mg/kg，RSD 分 别 为 1.25%﹑1.33%﹑1.84%﹑1.77%；表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取林蛙牛骨胶囊，取0.5g，研细，精密称定，分别按“2.1”项下方法进行平行试验6份，计算样品中钙的含量及RSD，结果表明，湿法消解﹑微波消解﹑压力罐消解﹑干法灰化测定钙的含量分别为：3.77×103﹑3.96×103﹑3.82×103﹑3.53×103mg/kg，RSD分别为 1.36%﹑1.28%﹑1.90%﹑2.55%；表明除干法灰化外，其余三种样品处理方法均具有良好的重复性。

2.7 加样回收率试验

除干法灰化外，其余三种样品处理方法进行回收率测定，取林蛙牛骨胶囊（钙含量分别为3.77×103﹑3.96×103﹑3.82×103mg/kg），研 细，取0.25g，精密称定，共6份，分别精密加入一定浓度的钙标准品溶液，测定，计算回收率。结果见表1。

3 讨论

目前市场中销售的保健食品大多为高钙保健食品，多以骨及骨髓为原料，这种原料中含有的金属离子较多，如：Mn2+﹑Mg2+﹑Fe3+﹑Cu2+﹑Zn2+等，采用常用的EDTA法进行定量时，金属离子会对反应进行干扰，反应终点颜色不容易观察[3-5]。一般滴定法中均加入柠檬酸铵来消除镁的干扰，但是，柠檬酸铵不仅可以掩蔽镁离子，也能掩蔽钙离子，对钙的含量测定有影响，若是将测定液的pH值调至12～13，测定液中的镁可形成沉淀，但是，钙和指示剂形成络合物，所以，一般滴定反应测定的结果均不准确。本文采用原子吸收光谱法测定保健食品林蛙牛骨胶囊中钙含量，较EDTA法具有结果更加准确﹑选择性好﹑干扰小﹑简单﹑快速的特点[6-10]。

通过采用不同前处理方法测定林蛙牛骨胶囊中钙含量进行对比分析研究，实验结果表明，采用湿法消解﹑微波消解法及压力消解法均能满足样品中钙分析的要求。但干法灰化法处理的样品重现性较差，不适合本样品钙含量测定的样品前处理。湿法消解法及压力消解法测定样品中钙的含量相对较低，并且湿法消解时间较长，环境影响较大。但是利用微波消解法可以避免上述问题，具有时间较短，测定偏差小，消化液使用量少，对环境的污染小等特点，样品处理更简便快捷，测定结果更准确[10-15]。

表1 加样回收率试验结果

目前为止，微波消解是比较先进的样品前处理技术，样品中物质分子在电磁场作用下发生瞬时极化，样品与消解液混合物吸收微波能量之后，由于离子传导与偶极子转动，产生内部热效应，迅速提高反应体系的温度，消解液分解试样，使被测组分释放出来便于测定。本文通过采用湿法消解法﹑微波消解法﹑压力罐消解法及干法灰化等不同的前处理方法测定林蛙牛骨胶囊中钙的含量进行比对研究，表明微波消解法前处理方法更适用于林蛙牛骨胶囊中钙的含量测定。

[1] 中华人民共和国国家标准.GB 5009.92-2016食品安全国家标准 食品中钙的测定[S].中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会，2016.

[2] 贺琼.测定葡萄糖酸钙钙片中钙含量的方法比较[J].广州化工，2013，41（9）：159-161.

[3] 郝鹏飞，黄昀，李勇，等.不同产地辣椒叶中钙，铁，锌元素含量比较分析[J].食品与药品，2013（2）：48-51.

[4] 于俊峰.常见补钙制剂钙含量测定方法的研究[J].科技创新与应用，2012（2）：250-251.

[5] 冉华康.钙尔奇D600片含量测定方法改进[J].中国药师，2009，12（10）：1487-1488.

[6] 张贵伟，陈树娣，汤璐，等.微波消解-电感耦合等离子体原子发射光谱法同时快速测定食品中钙﹑铁﹑锌﹑钠﹑钾﹑镁﹑铜和锰 [J].广东化工，2013（12）：123-124.

[7] 过治勇，王丰舟.混合酸消解-EDTA滴定法测定头发中钙 [J].河南预防医学杂志，2012，23（5）：369-370.

[8] 李敏，王紫纹.各类补钙产品中钙的改进依地酸滴定测定法 [J].职业与健康，2013，29（3）：336-338.

[9] 丁素君，尹丽.奶粉中钙含量测定方法的比较[J].医护论坛，2010，17（10）：170-171.

[10] 宋岳，商博东.强化食品中钙含量测定方法探讨[J].口岸卫生控制，2012，17（1）：28-30.

[11] 王红霞，张稳婵.食品中钙含量测定的方法比较[J].运城学院学报，2009，27（5）：26-28.

[12] 王宝丽，李思茹，徐柯心，等.清血八味片中钙离子的含量测定 [J].环球中医药，2017，10（5）：523-526.

[13] 校军彦，孟淑敏.ICP-OES法同时测定复方锌铁钙颗粒中锌铁钙含量[J].煤炭与化工，2015，38（5）：69-72.

[14] 万婷婷，罗爱平，尹彦洋,等.微生态补钙制剂的生物利用研究 [J].食品科学，2011，32（11）：292-295.

[15] 胡昌文，刘元生，刘念，等.ICP-OES法测定碱式碳酸钴中镍﹑铜﹑铁﹑钠﹑锌﹑钙 [J].无机盐工业，2015，47（5）：64-65.

Comparative study on the determination of calcium content in Linwa Niugu Capsule by different pretreatment methods

HE Yufang1WANG Xue2ZHAO Yuwei1SI Xueling3YU Miao4NAN Minlun1
1.Jilin Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130012,China;2.Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China;3.Xiuzheng Pharmaceutical Group Changchun High Tech Pharmaceutical Co.Ltd.,Changchun 130012,China;4.Changchun Sande Tiansheng Technology Co. Ltd.,Changchun 130012,China

ObjectiveTo establish a method for determination of calcium content in Linwa Niugu Capsule.MethodsThe samples were treated by wet digestion,microwave digestion,pressure digestion and dry ashing.Calcium content in Linwa Niugu Capsule were contrastive studyed by flame atomic absorption spectrometry.The precision,repeatability and recovery rate of different digestion methods were compared.Results The average recoveries of calcium in the Linwa Niugu Capsule were respectively 99.16%,98.90%,and 97.83%,which were determined by wet digestion,microwave digestion,pressure tank digestion and dry ashing method.ConclusionIt is easier and faster to pretreat with microwave digestion method,and the content of calcium in the sample is relatively higher,which is more suitable for the determination of calcium in Linwa Niugu Capsule.

Flame atomic absorption spectrometry;Linwa Niugu Capsule;Calcium

R284. 1

A

2095-0616（2017）19-35-03

吉林省科技发展计划项目（20150307013YY）。

2017-06-28）