三种检测结核分枝杆菌方法的应用评价

王训霞

【摘要】 目的 评估荧光二极管（LED）直接涂片法、酸性罗氏培养法、Bactec MGIT 960培养法检测结核分枝杆菌临床应用价值。方法 317例临床确诊结核病患者痰样本， 每例痰样本均分为3份， 分别采用LED直接涂片法、酸性罗氏培养法和Bactec MGIT 960培养法进行检测， 比较三种方法培养阳性率， 以及阳性率较高的两种检测方法培养所需时间、污染率。结果 317例痰液标本中， Bactec MGIT 960培养法、酸性罗氏培养法阳性率均高于LED直接涂片法阳性率， 差异具有统计学意义（χ2=97.71、44.69， P<0.01）；Bactec MGIT 960培养法阳性率显著高于酸性罗氏培养法， 差异具有统计学意义（χ2=11.80， P<0.01）。酸性罗氏培养法和Bactec MGIT 960培养法的检出时间分别为33.0 d（25.0～40.0 d）、14.0 d（9.0～18.0 d）， 比较差异有统计学意义（Z=-19.601， P<0.01）。317例痰液标本中， 酸性罗氏培养法污染率为4.7%（15/317）， Bactec MGIT 960培养法污染率为5.0%（16/317）， 比较差异无统计学意义（χ2=0.03， P>0.05）。结论 Bactec MGIT 960培养法可以显著提高培养阳性率、缩短培养时间。

【关键词】 结核分枝杆菌快速培养；Bactec MGIT 960系统； 酸性罗氏培养

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.29.111

据世界卫生组织报告2014年全球共有150万人因结核病死亡。我国传染病监测信息系统肺结核报告发病数近几年均位居甲、乙类传染病的第二位。结核病细菌学检查是结核病诊断和治疗方案的主要依据。然而现有的结核病实验室诊断方法远不能满足临床诊治的需要， 建立快速、敏感、特异的诊断方法， 对于结核病防治工作具有重要意义[1]。Bactec MGIT 960系统培养是结核杆菌快速培养的新技术， 采用荧光二极管直接涂片（简称LED直接涂片法）及酸性罗氏培养法和Bactec MGIT 960快速培养三种检测方法对确诊的结核患者的痰液标本进行检测， 比较评价三种检测方法的应用价值。现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 收集河南省安阳市结核病防治所2016年1～6月317例结核病确诊患者合格痰液标本， 每例样本均分为3份， 同时做LED直接涂片法、酸性罗氏培养、Bactec MGIT 960快速培养。

1. 2 仪器与试剂 美国BD公司Bactec MGIT 960全自动分枝杆菌培养药敏仪；山东海尔CLASSⅡTYPEA2型生物安全柜， 上海森信实验仪器有限公司DRP-9802恒温培养箱， 安徽中佳科学仪器有限公司MC-3518高速离心机， 涡旋振荡器， 2 ml无菌吸管。Bactec MGIT 960全自动分枝杆菌培养基、分枝杆菌生长指示管及添加剂、杂菌抑制剂均是美国BD公司提供；酸性罗氏培养基和LED直接涂片法染色试剂为珠海贝索生物技术有限公司产品， 所有试剂和培养基均在有效期内使用。

1. 3 LED直接涂片法 严格按照《结核病实验室诊断技术培训教程》要求进行[2]。

1. 4 酸性罗氏培养方法 在生物安全柜内将1～2 ml痰液标本加入1～2倍的4% NaOH到前处理管中， 涡旋震荡30 s至痰标本充分液化， 室温静置15 min后， 用无菌吸管吸取0.1 ml

痰标本， 接種到酸性罗氏培养基斜面的中部和上部。将培养基放置在斜面放置架上置于恒温培养箱内（36±1）℃孵育。接种后第3日和第7日观察培养情况， 以后每周观察1次， 直到第8周末。判定结果：培养基上生长出不透明， 黄色， 粗糙菜花样菌落为阳性。

1. 5 Bactec MGIT 960分枝杆菌液体培养方法 在生物安全柜内将2～5 ml痰液标本加入1～2倍的NaCl-NaOH混合溶液到离心管中涡旋震荡30 s至痰标本充分液化， 室温静置

15 min后， 向离心管中加入磷酸盐缓冲液至45 ml， 拧紧管盖后放到低温冷冻离心机3000 g离心15 min， 弃去上清液， 加入1 ml磷酸盐缓冲液混匀后用无菌吸管吸取0.5 ml处理后的痰标本加到MGIT管中盖紧管盖混匀， 放入Bactec MGIT 960全自动分枝杆菌培养药敏仪内进行培养。仪器报告阳性结果后及时涂片并使用萋尼氏染色镜检确认。

1. 6 观察指标 比较三种方法培养阳性率， 以及阳性率较高的两种检测方法培养所需时间、污染率。

1. 7 统计学方法 采用SPSS16.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验；均值采用Mann-Whitney检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 三种分枝杆菌检测方法阳性率比较 317例痰液标本中， Bactec MGIT 960培养法、酸性罗氏培养法阳性率均高于LED直接涂片法阳性率， 差异具有统计学意义（χ2=97.71、44.69， P<0.01）；Bactec MGIT 960培养法阳性率显著高于酸性罗氏培养法， 差异具有统计学意义（χ2=11.80， P<0.01）。见表1。

2. 2 两种培养方法检测时间比较 酸性罗氏培养法和Bactec MGIT 960培养法的检出时间分别为33.0 d（25.0～40.0 d）、14.0 d（9.0～18.0 d）， 比较差异有统计学意义（Z=-19.601， P<0.01）。

2. 3 两种培养方法污染率比较 317例痰液标本中， 酸性罗氏培养法污染率为4.7%（15/317）， Bactec MGIT 960培养法污染率为5.0%（16/317）， 比较差异无统计学意义（χ2=0.03， P>0.05）。endprint

3 讨论

肺结核是我国预防控制的重大传染病之一给公共卫生和社会带来了很大的负担。细菌学早期诊断是结核病防治的关键， LED直接涂片法的优点是操作简单、快速， 但是阳性率太低。结核分枝杆菌繁殖缓慢[3， 4]。酸性罗氏培养法被认为是结核病诊断的“金标准”， 但是其培养时间长， 需要1～2个月，

对于临床治疗指导合理化用药方案有极大的局限性， 导致很多肺结核患者没有得到及时的发现和合理治疗[5-7]。在结核病例的诊断技术上， 迫切需要一种简捷、快速的技术方法， 能在最短时间内对病例所携菌株耐药性做出判断， 以期缩短为患者制定合理化疗方案重新开始治疗所需时间[3， 8]。Bactec MGIT 960 系统是以液体培养基为基础的新一代荧光检测系统， 可大大缩短培养时间[9]， 它是专业的分枝杆菌培养鉴定及药敏自动化实验仪器系统， 是通过检测液体培养基中消耗氧气的量来确定是否有细菌生长[5]。本结果显示， LED直接涂片法阳性率为14.5%， 酸性罗氏培养法阳性率为37.9%， Bactec MGIT 960培养法的阳性率为51.4%。Bactec MGIT 960培养法的阳性率要显著高于LED直接涂片法和酸性罗氏培养法（P<0.05）。酸性罗氏培养法的检出时间分别为33.0 d（25.0～40.0 d）， Bactec MGIT 960培养法的检出时间为14.0d（9.0～18.0 d）。Bactec MGIT 960培养法检测需要的时间远低于酸性罗氏培养法（P<0.05）。在进行培养操作时应严格按照实验操作规程进行操作， 降低培养基的污染率， 以免造成假阳性影响结果。

综上所述， Bactec MGIT 960系统分枝杆菌液体培养方法检测结核分枝杆菌阳性率高， 检测时间短， 在結核病早期诊断中具有重要的应用价值。

参考文献

[1] 梁亚萍， 高漫. BACTEC MGIT 960用于结核分枝杆菌快速培养的初步评价.中国预防医学杂志， 2011， 12（6）：521-522.

[2] 赵雁林， 中国防痨协会基础委员会.结核病实验室诊断技术培训教程.北京：人民卫生出版社， 2014：20-22.

[3] 王谦信， 陈兆俊， 陆英， 等.两种培养技术在结核分枝杆菌培养中的比较.现代预防医学， 2014， 41（14）：2617-2618.

[4] 陈晓， 杨青， 徐根云， 等.Bactec MGIT 960 系统与改良罗氏培养基法用于培养分枝杆菌的比较.临床检验杂志， 2011， 29（5）：396-397.

[5] 赵雁林， 逄宇.结核病实验室检验规程. 北京：人民卫生出版社， 2015：39-40.

[6] 张立群， 王云霞， 周敏， 等. 4种不同结核分枝杆菌检测方法对结核病的诊断价值比较. 中华医院感染学杂志， 2010， 20（11）：1633-1635.

[7] 张涛， 吕纯芳， 卢留珠， 等. BACTEC MGIT960系统快速培养分枝杆菌的效果评价. 临床肺科杂志， 2011， 16（5）：717-718.

[8] 安月善， 吴英子. 应用BACTECMGIT960分枝杆菌检测系统对301例患者的分析. 中国伤残医学， 2013（11）：302-303.

[9] 李晓非， 黄山， 梁桂亮， 等. 6种检测方法在HIV合并结核分枝杆菌感染诊断中的应用价值分析. 检验医学与临床， 2017， 14（3）：378-380.

[收稿日期：2016-08-19]endprint