HCPT/PEG—PLA纳米胶束中HCPT含量测定的方法学建立

马萍+金武龙

【中图分类号】R739.8 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2017）10-00-01

1 实验材料

1.1 仪器

TU-1901双光束紫外可见分光光度计：北京普析通用仪器有限责任公司；AL204电子天平：梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；KH5200E型超声波清洗器：昆山禾创超声仪器有限公司。

1.2 药品与试剂

10-HCPT标准品（HPLC≥98%）四川省维克奇生物科技有限公司 批号：130314；单甲氧基聚乙二醇外消旋聚乳酸共聚物mPEG5000-PDLLA30000 济南岱罡生物工程有限公司 ；HCPT/PEG-PLA纳米胶束（本实验室自制）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 吸收波长的选择

准确量取10mg HCPT标准品置于200ml容量瓶中，用甲醇定容，得到储备液的浓度为0.05mg/ml。量取一定体积的储备液，甲醇稀释定容，配制成浓度为1ug/ml的HCPT标准品溶液。以甲醇为空白，用紫外分光光度计于200-400nm波长范围内扫描标准溶液的波谱，结果（见图1-1）。称取一定量的mPEG-PLA共聚物载体，将其溶于甲醇，制备共聚物甲醇溶液，在200-400nm波长范围内进行波普扫描，结果（见图1-2）。称取一定量的HCPT/PEG-PLA纳米胶束冻干粉，甲醇溶解后进行波谱扫描，结果（见图1-3）。由扫描图谱可知HCPT标准溶液在384nm处有吸收，此处无杂质峰干扰，故选用384nm作为检测波长。

2.2 标准品溶液配制

准确量取10mg HCPT标准品，放入200ml棕色容量瓶中，用甲醇定容，混匀。准确量取混匀的HCPT标准液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml，分别置于10ml棕色容量瓶中，甲醇定容，备用。

2.3 HCPT标准曲线的绘制

取配好的一系列不同浓度的溶液用紫外分光光度计在波长384nm处测定紫外吸收，以甲醇为空白，测得各溶液的吸光度（见表1-1），计算回归方程：y=0.1127x-0.015 （R=0.9995） 并绘制吸光度与HCPT浓度的标准曲线，（见图1-4）。

2.4 精密度考察

分别取上述制备的低、中、高（2、4、7ug/ml）三种浓度的HCPT溶液，用紫外分光光度计测定吸光度。日内精密度的测定方法为：1天内不同时间点测定5次。日间精密度的测定方法为：每天测定1次，连续测定5天，根据测定结果计算日内及日间精密度，结果（见表1-2）。

结果表明，低、中、高三种浓度的HCPT标准溶液日内精密度和日间精密度的RSD均小于5%，符合方法学要求。

2.5 回收率实验

精密量取空白胶束15份，每5份为一个剂量组，分为三组，每组加入不同浓度HCPT标准品溶液，使三组胶束的终浓度分别为2 ug/m1（低浓度）、4 ug/m1（中浓度）、7ug/m1（高浓度），超速离心后，取上清液測定HCPT含量，并计算回收率，结果（见表1-3）。

2.6 测定胶束的包封率

药物的包封率（entrapmenteffieieney， EE）是评价胶束质量的重要指标，它是指胶束中载入的药物质量与加入制备体系中药物质量的比。一般情况下包封率越高制剂质量相对越好。取一定量的HCPT胶束冻干粉，加入甲醇使胶束破坏，药物释放，用紫外分光光度计测吸光度，结合HCPT含量测定标准曲线，按下列公式计算包封率：HCPT/PEG-PLA纳米胶束包封率计算公式：包封率（EE%）=（胶束中HCPT的质量/HCPT投药量）×100%。

3 讨论

HCPT/PEG-PLA纳米胶束中HCPT含量测定方法常采用紫外分光光度计或高效液相色谱（HPLC）法。由于HCPT在紫外区有吸收，本部分建立了紫外分光光度法测定HCPT含量的方法，为制备剂型和优化处方提供了科学而实用的分析方法和评价手段。较HPLC方法的复杂、费时，UV能够简单、方便、快速的测定HCPT的含量。故在筛选处方工艺，评价制剂质量时，可采用UV法粗略却快速地检测HCPT/PEG-PLA纳米胶束中主药的含量，可节省时间，减少浪费。

4 结论

本文建立了紫外分光光度计测定HCPT含量的方法与标准。经紫外扫描确定药物吸收波长为384nm，且载体在此波长处无吸收，不干扰测定。

药物浓度在2.0-7.0ug/ml范围内线性关系良好，回归方程为：y=0.1127x-0.015 （R=0.9995），日内、日间精密度均小于5%，平均回收率为99.4%，方法简便、可行。endprint