酶标仪测定真菌毒素检测技术的探究

杨凤莉

摘要：真菌毒素是真菌在其生长环境里所产生的次级毒性代谢产物，其会导致农产品大幅减产，使农产品品质下降，阻碍农产品出口。本文就如何使用酶标仪测定真菌毒素的原理及方法进行了论述，并特别提出了酶标仪使用注意事项，以提高测定样品的精确度和工作效率。

关键词：酶标仪；真菌毒素；检测技术

1.引言

我国地域广阔，北起黑龙江南至广东各省份都可以种植粮油作物，虽然各地气候差异巨大，耕作方式不同，但作物受到真菌毒素污染的现象十分普遍。它的污染可发生在农作物（例如：玉米、花生、小麦等）的田间生长、收获、贮藏、运输、加工阶段；食品药品（例如：啤酒、咖啡、调味料、中草药等）的加工、储藏阶段。被真菌毒素污染的农产品被人误食后会对人体健康造成危害，另外用被真菌毒素污染的作物制成饲料，再去喂养禽类、畜类、鱼类等动物，真菌毒素可以由被污染的动物性食品，最终通过食物链危害到人的健康。真菌毒素严重影响着农产品、食品药品的质量安全、品质，给人类和动物造成危害。目前，许多国家依据公共卫生意义和商业目的，都制定了食品和饲料中真菌毒素的限量。因此需要灵敏、精确地对样品进行分析的仪器，以确保其含量低于规定的限量。本文将介绍真菌毒素的种类、危害、以及酶标仪测定真菌毒素检测技术的原理及注意事项。

2.真菌毒素的种类及危害

真菌食物中毒是指产毒霉菌寄生在粮油、食品、中药或饲料上，在适宜条件下产生有毒代谢物，人畜摄食后导致的中毒。中毒没有传染性，根据作用的靶标器官或引起的病理现象，可将真菌毒素分为肝脏毒、肾脏毒、神经毒等。食用被真菌毒素污染的食品有致癌、致畸、致突变的风险。人畜进食被其污染的粮油食品可导致急、慢性真菌毒素中毒症[1]。

2.1黄曲霉毒素

黄曲霉毒素早在1993年就被世卫组织划为一类致癌物。主要有B1、B2、G1、G2、M1、M2。它们的结构式不同，其毒性及危害也有很大差异。其中，黄曲霉毒素B1的毒性及致癌性最强，对农产品及食品的安全性影响很大，值得关注。

2.2赭曲霉毒素

在其众多种类中，赭曲霉毒素A的毒性最强，其是自然界中的主要天然污染物。国际癌症研究机构（IARC）认为赭曲霉毒素A是一种人类可能的致癌剂。除此之外，赭曲霉毒素A对人体的免疫系统、神经系统会造成危害以及可能致畸、致突变。

2.3展青霉毒素

展青霉毒素又叫棒曲霉毒素，是一种免疫抑制剂。展青霉毒素是一种神经毒素，其能诱发实验动物肿瘤，并对消化系统和皮肤组织具有损害作用，还具有致畸性、致突变性和致癌性。

2.4单端孢霉烯族化合物

这是一组生物活性和化学结构相似的有毒代谢产物。单端孢霉烯族化合物可影响动物的免疫系统使免疫力下降，抗感染能力降低。

2.5玉米赤霉烯酮（ZEA）

玉米赤霉烯酮（ZEA）又名F-2毒素，会引起中枢神经系统造成危害，中毒后会产生诸如恶心、发冷、头痛的症状。

3.酶标仪测定真菌毒素检测技术研究

3.1酶标仪

酶标仪即酶联免疫检测仪（ELISA Reader），是酶联免疫吸附试验的专用仪器。可简单地分为半自动和全自动两大类，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一个比色计，即用比色法来分析抗原或抗体的含量[2]。ELISA测定一般要求测试液的最终体积在250ul以下，用一般光电比色计无法完成测试。因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。

3.2酶标仪测定的原理

在特定波长下，检测被测物的吸光值。光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。检测单位用OD值表示，OD是optical delnsity（光密度）的缩写，OD=1og（1/trans），其中trans为检测物的透光值。根据兰伯―比尔定律，OD值与光强度成下述关系：E=OD=logΙ0/Ι，其中：E表示被吸收的光密度；Ι0为在检测物之前的光强度；Ι为从被检测物出来的光强度。

OD值由下述公式计算：E=OD=C×D×E其中：C为检测物的浓度；D为检测物的厚度；E为摩尔因子。

3.3 ELISA实验原理

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗体的微孔中依次加入标本或者标准品、生物素化的抗体，HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物显色。底物在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标蛋白呈正相关。用酶标仪在（450nm）波长下测定测定吸光度，计算样品浓度[3]。

3.4酶标仪的使用注意事项

标仪是一种精密的光学仪器，因此良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性，还能够延长其使用寿命。

①仪器应放置在无磁场和干扰电压的位置；

②仪器应放置在低于40分贝的环境下；

③为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射；

④操作时环境温度应在15℃-40℃之间，环境湿度在15%-85%之间；

⑤操作电压应保持稳定；

⑥操作环境空气清洁，避免水汽，烟尘。保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。

3.5操作注意事项

酶标仪的功能是用来读取酶联免疫试剂盒的反应结果，因此要得到准确结果，试剂盒的使用必须规范。在酶标仪的操作中应注意以下事项：

①使用移液器加液，移液头不能混用；

②洗板要洗干净。如果条件允许，使用洗板机洗板，避免交叉污染；

③嚴格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确；

④请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成后请洗手；

⑤如果使用的样品或试剂具有污染性、毒性和生物学害，请严格按照试剂盒的操作说明，以防对操作人员造成损害；

⑥不要在测量过程中关闭电源；

⑦对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果；

⑧使用后盖好防尘罩。

4.总结

真菌毒素严重影响着农产品、食品药品的质量安全、品质，给人类和动物造成危害。目前，许多国家依据公共卫生意义和商业目的，都制定了食品和饲料中真菌毒素的限量。因此需要灵敏、精确地对样品进行分析的仪器，以确保其含量低于规定的限量。本文介绍了真菌毒素的种类、危害、以及如何利用酶标仪测定真菌毒素的原理及注意事项，具有一定的实际意义。

参考文献：

[1]王红星，桃正国.饲料中的真菌毒素的危害性及其防治措施[J].兽药与饲料添加剂，2005（03）：19-20.

[2]李萌萌，关二旗，卞科，崔贵金.真菌毒素的辐照降解及产物解析研究进展[J].粮食与饲料工业，2013，（01）.

[3]胡娜，徐玲.真菌毒素检测方法研究进展[J].食品科学，2007（08）.endprint