分子印迹固相萃取-高效液相色谱联用检测猪肉中的磺胺类兽药残留

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(齐鲁工业大学食品科学与工程学院,山东济南 250353)

分子印迹固相萃取-高效液相色谱联用检测猪肉中的磺胺类兽药残留

李玲,赵晓磊,王璇,何金兴*

(齐鲁工业大学食品科学与工程学院,山东济南 250353)

采用本体聚合法,以磺胺二甲基嘧啶作为模板分子,甲基丙烯酸作为功能单体,甲基丙烯酸羟乙酯作为亲水性功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯和3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基丙烯酸酯同时作为交联剂,偶氮二异丁腈作为引发剂,合成磺胺二甲基嘧啶分子印迹聚合物,印迹聚合物对模板分子的饱和吸附量可以达到11.37 mg/g,选择性实验中印迹聚合物对磺胺类的吸附量明显大于竞争物,对7种磺胺类药物(磺胺二甲基嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺异噁唑、磺胺噻唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶)均具有特异性吸附效果。同时建立了固相萃取与高效液相色谱联用的方法检测猪肉中痕量磺胺类药物含量,结果表明该方法对加标的7种磺胺类药物检测限为1.7～4.5 μg/L,回收率可达73.9%～85.4%,且该检测方法简单、便捷、灵敏度高。

亲水性分子印迹聚合物,固相萃取,磺胺类兽药,高效液相色谱

分子印迹技术(molecularly imprinted technique,MIT)是将多种学科综合利用的一种交叉技术,在免疫学和生物化学的基础上,模拟抗体与抗原、酶和底物等分子间的反应,制备能够在空间结构上互补,在结合位点上特异性识别的聚合物的方法[1-2]。磺胺类兽药是一种人工合成的抗菌药物,因为具有使用方便,价格低廉,疗效好的优点,所以被广泛用于畜牧养殖业和人类临床用药[3],但存在不合理的过量使用现象,造成农兽药在动物组织中的残留,经人体食用之后,会影响人体造血系统、泌尿系统、消化系统、肾脏,危害人类身体健康[4],而且当在体内残留量达到一定水平时,还会致畸、致癌、致突变[5]。为了保证食品安全和人类健康,许多国家政府对磺胺类药物的最大残留限量做了相关规定。我国和欧盟多个国家规定动物性食品或组织中磺胺总量或者单种磺胺类药物的最大残留限量为100 μg/kg[6]。

磺胺类药物的检测方法分为基于生物抗体的免疫学检测方法和仪器分析方法。免疫学检测方法主要包括酶联免疫测定法[7]、荧光免疫测定法[8]、胶体金免疫测定法[9]。仪器分析法主要有气相色谱分析法[10]、高效液相色谱法[11-13]、超高效液相色谱法[14]、高效液相色谱-串联质谱法[15-16]、毛细管电泳法[17]、表面等离子共振法[18]。目前有很多学者将分子印迹技术与高效液相色谱法联用进行相关物质的检测。

黄镭[19]等制备了磺胺磁性分子印迹聚合物微球,制备的材料具有良好的超顺磁性,对模板分子具有高选择吸附性,姜吉刚[20]等采用沉淀聚合法制备微球形磺胺嘧啶分子印迹聚合物,简化了材料制备过程中的研磨步骤。本文采用传统的本体聚合方法,制备磺胺类分子印迹聚合物,并用此分子印迹聚合物填充固相萃取柱,建立分子印迹固相萃取-高效液相色谱联用技术,实现对猪肉样品中7种磺胺类药物的痕量检测,能对复杂的样品基质进行分离,简化了食品样品前处理技术。

1 材料与方法

1.1材料与仪器

磺胺噻唑(STZ)、磺胺二甲基嘧啶(SMZ)、磺胺异恶唑(SIZ)、磺胺嘧啶(SDZ)、磺胺甲氧嗪(SMP)、磺胺甲基嘧啶(SMR)、磺胺对甲氧嘧啶(SMT) Sigma公司;乙腈 色谱纯,天津光复精细化工研究所;甲醇(色谱纯)、偶氮二异丁腈(AIBN)(分析纯) 国药集团化学试剂有限公司;甲基丙烯酸(MAA) 分析纯,天津化学试剂厂;甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)、乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)、3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基丙烯酸酯(γ-MAPS) 分析纯,上海阿拉丁试剂有限公司;速灭威、氯磺隆、雌三醇 分析纯,天津市科密欧化学试剂有限公司;新鲜猪肉 当地家家悦超市。

LC-20AT高效液相色谱仪 日本岛津;HYB2回旋振荡器、DK-98-ⅡA 4数显恒温水浴锅 金坛市金南仪器厂;TU1901双光束紫外可见分光光度计 北京普析通用仪器有限公司;AL104电子天平 梅特勒-托利多仪器有限公司。

1.2实验方法

1.2.1 亲水性磺胺二甲基嘧啶分子印迹聚合物的制备 0.1 mmol的SMZ作为模板分子溶于6 mL乙腈中,功率600 W超声15 min后加入2 mmol的功能单体MAA。在振荡器上振荡3 h,转速设为160 r/min,模板分子与功能单体形成预聚合溶液。然后加入2 mmol亲水性功能单体HEMA,继续振荡1 h,加入6 mmol交联剂(3 mmol EGDMA和3 mmolγ-MAPS),充分搅拌1 h,最后加入25 mg引发剂AIBN,再搅拌0.5 h。通氮气5 min除去氧气,最后在水浴60 ℃条件下通过热引发聚合,水浴24 h,即可得到分子印迹聚合物。非印迹聚合物的制备过程同上,除了不加模板分子SMZ。

将合成的聚合物研磨成粉末后过筛,取400～500目聚合物用滤纸包裹,转移至索氏提取器中萃取80 h,萃取溶剂为甲醇∶甲酸(v∶v,9∶1),直至无模板分子检出。然后用20 mL 1 mol/L的盐酸和20 mL的甲醇洗涤2 h,最后用0.25 mol/L氢氧化钠、水反复冲洗,直至为中性,然后置于75 ℃烘干至恒重,即得磺胺二甲基嘧啶分子印迹聚合物颗粒。

1.2.2 材料吸附性能表征

1.2.2.1 吸附动力学实验 称取25.00 mg吸附材料于25 mL容量瓶中。用移液管准确加入5 mL 30 mg/L的SMZ-水溶液,分别在室温下振荡5、10、30、120、240 min后,3000 r/min 离心15 min。在波长为270 nm条件下,采用紫外-可见分光光度计测定上清液中SMZ的浓度,按照公式(1)计算聚合物对SMZ的吸附容量。

式(1)

式中,Ci和Cf分别表示吸附前溶液和吸附后目标分析物的浓度(mg/L),V表示分析物标准溶液的体积(mL),M为聚合物的加入量(mg)。

1.2.2.2 平衡结合实验 称取25.00 mg的吸附材料于25 mL容量瓶中,分别加入5 mL不同浓度的SMZ水溶液(20、30、40、70、100 mg/L),摇床充分振荡30 min,3000 r/min离心15 min。在270 nm的波长条件下,采用紫外-可见分光光度计测定上清液的吸光度值,并计算吸附容量。在相同的条件下做非印迹聚合物对SMZ的平衡结合实验。吸附容量按照式(1)计算。

Scatchcard方程可以用来分析实验制备的聚合物吸附性能,方程表示为:

式(2)

式中,Q表示吸附平衡时的吸附容量(mg/g),Qmax表示最大饱和吸附量(mg/g),Ci表示吸附溶液的初始浓度(mg/L)。

1.2.2.3 选择性结合实验 选择与磺胺类药物结构相似的速灭威、氯磺隆和雌三醇作为竞争物。准确称取25.00 mg的印迹聚合物和非印迹聚合物,分别加到25 mL容量瓶中,各加入10 mg/L的SIA、SDX、STZ、SMZ、SMR、SMP、SMT、速灭威、氯磺隆和雌三醇的混合水溶液5 mL,振荡30 min,然后3000 r/min离心15 min,在HPLC-DAD检测器上测得上清液中各分析物浓度,测得磺胺类药物波长为270 nm,速灭威为210 nm,雌三醇和氯磺隆为230 nm。根据吸附前后上清液与标准溶液浓度的比较,计算每种物质的吸附量、分配系数(Kd)、选择性系数(K)和相对选择性系数(K′)。计算公式如下:

式(3)

式(4)

式(5)

1.2.3 分子印迹固相萃取柱吸附过程 准确称取200.00 mg印迹聚合物于空的固相萃取小柱中,保留顶端和底端两侧的垫片并压紧,制得分子印迹固相萃取柱。分别用3 mL甲醇活化,3 mL去离子水平衡固相萃取柱之后,用50 mL,0.02 mg/L的7种磺胺药物混合标准水溶液作为样液,上样富集净化。目标分析物被吸附在分子印迹固相萃取柱上,未被吸附的部分随废液流出。分子印迹固相萃取柱用2.00 mL甲醇溶液以1.00 mL/min流速洗脱分子印迹固相萃取柱,收集洗脱液,在室温下用氮气流吹干后用1.0 mL的甲醇溶液复溶,经0.45 μm滤膜过滤后,取20 μL直接进样HPLC检测。富集净化完毕后,对分子印迹固相萃取柱用5 mL的甲醇和5 mL双蒸水彻底洗涤,以备下次富集使用。

1.2.4 色谱条件 色谱柱:ODS-C18(4.6 mm×250 mm),柱温:30 ℃,进样量:20 μL,流动相:甲醇∶水=22∶78(pH3),流速:1 mL/min,检测波长:270 nm。

1.3数据处理

实验数据处理及作图采用Excel 2010和Origin 8.0软件。

2 结果与讨论

2.1亲水性SMZ-MIPs反应条件的优化

分子印迹聚合物的制备过程中,很多因素都会影响合成的聚合物的性能,例如:溶剂的种类,模板分子、功能单体、交联剂的种类及三者之间的比例,催化剂的选择及聚合反应的温度和时间等。

2.1.1 溶剂体积的选择 在分子印迹聚合物的制备整个过程中,溶剂的选择十分重要。如果溶剂的选择不合适,会影响模板分子与功能单体的结合,导致制备的聚合物性能较差,严重的会不发生聚合,同时溶剂还具有致孔剂的作用。

磺胺二甲基嘧啶易溶于甲醇、乙腈、甲苯等有机溶剂中,难溶于非极性溶剂。乙腈和甲醇均为常用的溶剂,但是乙腈的极性较甲醇小,而且又是非质子化溶剂,所以本实验中选用乙腈作为反应溶剂。

反应过程中,溶剂的量也会影响合成的聚合物的形态和产量。溶剂量过多,会导致形成的聚合物硬度较低、结构松散,对聚合物的识别能力也相对较差;溶剂量过少,会导致形成的聚合物硬度过硬,使聚合物中的空穴减少,同时给模板分子的洗脱带来一定的困难,进而降低聚合物的识别力。选用0.1 mmol SMZ,2 mmol MAA和2 mmol HEMA,4 mmol EGDMA和2 mmolγ-MAPS,25 mg AIBN,探索不同体积的乙腈对制备的聚合物吸附量的影响,结果如表1。

表1 不同体积乙腈制备的分子印迹聚合物吸附容量的比较Table 1 Comparison of adsorption capacity ofMIP in different volumes of solvents

由表1可知,当乙腈的体积为6 mL时,所合成聚合物的吸附容量最大。说明该条件下,聚合物的空穴数量最多,识别性能最好,所以以6 mL乙腈作为溶剂制备分子印迹聚合物。

2.1.2 模板、功能单体、交联剂的比例优化 分子印迹聚合物的选择性与模板、功能单体和交联剂的比例有直接关系。为了保证所合成的聚合物具有足够的结合位点、一定的刚性和适度的柔性,对三者的比例进行优化。如果功能单体的量过多,会导致聚合体系中剩余的功能基团较多,聚合物对模板分子的特异性会减弱;而功能单体的量过少则会引起聚合物中的特定空穴位点不足,使特异性和吸附力减弱。若交联剂的比例过多,会引起聚合物体系过硬,导致吸附过程中目标物很难进入空穴导致吸附量降低;交联剂的比例过少,则会导致聚合物的刚性不足,有时甚至不足以成形[21]。

本实验以0.1 mmol SMZ为模板,MAA为功能单体,HEMA为亲水性功能单体,EGDMA和γ-MAPS为混合交联剂,AIBN为引发剂。对实验中MAA、HEMA、EGDMA和γ-MAPS各反应物之间的用量进行优化(见表2),选择最佳的比例。

表2 亲水性SMZ分子印迹聚合物制备过程中各反应物的不同配比Table 2 Various reagent ratios investigatedfor the preparation of the hydrophilic MIPs of SMZ

测定不同条件下聚合物的吸附量,结果显示,将0.1 mmol SMZ溶解在6 mL乙腈中,加入4 mmol功能单体,6 mmol交联剂,25 mg AIBN,即模板:功能单体:交联剂为0.1∶4∶6时,通过本体聚合法合成的聚合物对模板分子的吸附力及特异性识别力最强。

选择HEMA作为亲水性功能单体合成亲水性聚合物,优化了MAA和HEMA的比例(见表3),测定不同比例条件下,聚合物对SMZ水溶液的吸附性,结果显示,当MAA与HEMA比例为1∶1时,合成的聚合物在水相环境中对SMZ的吸附力最强。

表3 不同亲水性功能单体的配比对吸附量的影响Table 3 Effect of proportion of different hydrophilicfunctional monomers on adsorption

表4 不同交联剂比例对吸附量的影响Table 4 Effect of proportion of different crosslinking agent monomers on adsorption

选用0.1 mmol SMZ,6 mL乙腈,2 mmol MAA,2 mmol HEMA,25 mg AIBN,选择EGDMA和γ-MAPS作为混合交联剂,优化二者之间的比例(见表4),测定不同比例条件下,聚合物对SMZ水溶液的吸附性,结果显示,当二者之间比例是2∶1时,聚合物在水相环境中对SMZ的吸附力最强。

综上所述,实验中所用到的合成条件为0.1 mmol SMZ,功能单体为2 mmol MAA和2 mmol HEMA,交联剂为4 mmol EGDMA和2 mmolγ-MAPS,引发剂为25 mg AIBN,聚合温度为60 ℃,聚合时间为24 h。

2.2分子印迹聚合物吸附性能表征

2.2.1 吸附动力学实验 为了评价聚合物对磺胺二甲基嘧啶的吸附效率,测定不同时间(t)下聚合物对模板分子的吸附容量。结果见图1。由图可知,吸附5 min后,吸附容量基本达到最大吸附容量的51.3%,30 min即可基本达到吸附平衡,说明合成的聚合物具有较快的吸附动力学,适合用于固相萃取材料。

图1 SMZ-水溶液在分子印迹材料上的吸附动力学Fig.1 The kinetic binding adsorption ofSMZ onto imprinted sorbents注：SMZ-水溶液：5 mL 30 mg/L,分子印迹材料：25 mg。

2.2.2 平衡结合实验 为了评价聚合物对磺胺二甲基嘧啶的结合能力,在室温下测定印迹聚合物和非印迹聚合物对20～100 mg/L不同浓度的磺胺二甲基嘧啶-水溶液吸附量的变化趋势,以磺胺二甲基嘧啶-水溶液的浓度为横坐标,吸附量为纵坐标,绘制磺胺二甲基嘧啶吸附等温线。吸附容量是评价分子印迹聚合物对模板分子的结合力强弱的重要参数,由图2可知,随着磺胺二甲基嘧啶溶液浓度的增加,印迹聚合物和非印迹聚合物对SMZ的吸附量均有不同程度的增加。当SMZ的初始浓度为100 mg/L时,印迹聚合物和非印迹聚合物对模板分子磺胺二甲基嘧啶的吸附容量分别为2.63 mg/g和1.32 mg/g,印迹聚合物对SMZ的吸附量大约是非印迹聚合物吸附量的2倍,经Scatchard分析得知印迹聚合物的饱和吸附量可以达到11.37 mg/g,说明相较于非印迹聚合物,印迹聚合物对模板分子的吸附性较好。

图2 印迹聚合物和非印迹聚合物对磺胺二甲基嘧啶的吸附等温线Fig.2 Loading isotherm of SMZ ontoimprinted and nonimprinted sorbents

2.2.3 选择性实验 选择与模板分子结构相似的速灭威、氯磺隆、雌三醇,同时与7种磺胺类药物竞争,测定分子印迹聚合物对这十种溶液的选择性情况。结果见表5。

从表5可以看出,印迹聚合物对磺胺类药物的吸附量要远远大于非印迹聚合物对磺胺类药物的吸附量。并且印迹聚合物对速灭威、氯磺隆和雌三醇的吸附量较小,明显低于非印迹聚合物对速灭威、氯磺隆和雌三醇的吸附量。说明该法所合成的吸附材料对7种磺胺类药物具有较强的选择识别性。其原因主要是在聚合过程中,模板分子磺胺二甲基嘧啶与功能单体甲基丙烯酸的键合,使配体进行有序的排列,从而形成了一定的立体化学结构。当模板分子被洗脱后,磺胺二甲基嘧啶存在的部位形成了特定的空穴,该空穴赋予聚合材料一定的特异性。非印迹聚合物中不存在这种特定的立体空穴,所以对磺胺类兽药的选择性较低[22]。

2.3色谱条件的选择

实验中选用ODS-C18色谱柱,甲醇:水(pH3)作为流动相,检测波长为270 nm,色谱图见图3。由图可知,7种磺胺类药物的分离效果较好,分离度均在1.5以上,且峰型较好。在21 min内即可完成对7种磺胺类药物的分离,所以本实验选用该色谱条件进行检测样品中的磺胺类药物。

图3 7种磺胺类标准品混合溶液的色谱图Fig.3 Chromatogram of mixed solutions ofseven sulfonamides standards

2.4固相萃取条件优化

2.4.1 洗脱剂种类的选择 50 mL,0.02 mg/L的7种磺胺混合药物水溶液作为上样液,选择不同种类的溶剂作为洗脱剂(甲醇、乙腈、二氯甲烷和氨水)对富集后的固相萃取柱进行洗脱,用回收率表示洗脱效果。测定结果见图4。由可以看出甲醇和乙腈作为洗脱剂时,回收率均可达到70%以上,氨水和二氯甲烷作为洗脱剂时,回收率仅能达到40%以上。考虑到乙腈的成本较高且毒性较大,因此最终选用甲醇作为洗脱剂。

图4 不同洗脱剂淋洗固相萃取柱磺胺类药物的回收率Fig.4 Recoveries of SAs in MISPE with different eluent

2.4.2 洗脱液体积的优化 选用不同体积(0.5～3 mL)的甲醇对富集后的固相萃取柱进行洗脱。结果见图5。由图可知,随着甲醇体积的增加,磺胺类药物的回收率也在逐步增加,但是当甲醇体积大于2 mL时,回收率并没有明显的变化,说明2 mL的甲醇可以将7种磺胺类药物洗脱下来。所以,实验中最终选择2 mL的甲醇作为洗脱剂。

图5 不同体积洗脱液淋洗MISPE的回收率Fig.5 Recoveries of SAs in MISPEwith different eluent volume

2.4.3 上样pH的优化 50 mL,0.02 mg/L的磺胺混合药物作为工作液,以2 mL甲醇作为洗脱剂,考察不同pH条件下(3～8),分子印迹聚合物对磺胺类药物的吸附效果，结果见图6。从图中可以看出,磺胺类药物的回收率随着pH的增大而增大,当上样液的pH在6时,水相中的磺胺类药物可以富集到分子印迹聚合物上,回收率均可达到70%以上,有利于印迹聚合物中结合位点与待测物之间的结合。所以实验选择样品的上样液pH为6。

图6 不同上样液pH目标物的回收率Fig.6 Recoveries of SAs in MISPEwith different sample pH

2.5线性关系及富集倍数

选用最佳固相萃取条件,上样pH6,2 mL甲醇作为洗脱剂的情况下,测定亲水性磺胺二甲基嘧啶分子印迹聚合物对50 mL不同浓度(1,2,5,15,20 μg/L)7种磺胺类药物的富集效果。以磺胺类药物浓度为横坐标,相对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线见图7。7种磺胺类药物的线性方程和相关系数见表6。该方法的线性相关系数R2均>0.99,线性关系良好,可以将此方法用于实际样品的检测。根据S/N=3,测得7种磺胺类药物的最低检出限,结果见表7。

表9 猪肉的加标回收率Table 9 Recoveries of 7 SAs in pork

表6 7种磺胺类药物浓度与峰面积的线性关系及相关系数Table 6 linear equation,correlation coefficientfor the correlation curves of 7 SAs

图7 7种磺胺类药物的标准曲线Fig.7 The standard curves of 7 SAs

分析物RSD(%)最低检测限(μg/L)磺胺嘧啶2.792.6磺胺噻唑3.781.7磺胺甲基嘧啶3.822.3磺胺二甲基嘧啶2.652.1磺胺异恶唑5.164.3磺胺甲氧嗪3.273.6磺胺对甲氧嘧啶4.974.5

分别取0.5、1、2、5、8 mg/L的7种磺胺类混合标准溶液作为工作溶液,取20 μL的工作溶液直接进样,富集倍数用富集标准曲线的斜率与标准工作曲线斜率的比值表示。结果见表8,该固相萃取柱对7种磺胺类物质的富集倍数均大于72,富集能力较强,可以将其用于实际样品的检测[23]。

表8 7种磺胺类药物的富集倍数Table 8 The enrichment factors of 7 SAs

2.6方法的添加回收率

为了评价方法的适用性,在当地超市购买猪肉样品为原料。在最优的萃取条件下,以制备的磺胺二甲基嘧啶分子印迹聚合物为填料对空的固相萃取柱进行填充,确定猪肉样品中没有残留的磺胺类药物。对样品进行加标实验,分别添加20、15、10 μg/kg三个浓度的7种磺胺类药物混合液,用固相萃取柱对样品进行净化、富集后测定加标样品的回收率和相对标准偏差,结果见表9,样品的添加回收色谱图见图8。由图可知,猪肉中添加的7种磺胺类药物的回收率范围为73.9%～85.4%,回收率偏低,可能与前处理过程中损失有关,但符合规定的痕量物质检测要求的回收率范围(70%～120%)。所以该方法可以用于检测猪肉中的7种磺胺类药物。

图8 7种磺胺类兽药的猪肉样品添加回收色谱图,Fig.8 Recovery chromatogram of spiked porksamples of 7 sulfonated veterinary注:添加浓度10 μg/kg。

3 结论

本方法制备的亲水性分子印迹聚合物对7种磺胺类兽药具有较高的吸附容量和较好的选择性,在优化的固相萃取条件下,制备的材料对磺胺类兽药的富集倍数大于72,可用于实际样品中磺胺类兽药残留的富集、净化。同时所建立的分子印迹固相萃取-高效液相色谱方法具有方法简单、快速、灵敏度高的特点。

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Determinationofsulfonamidesinporkbymolecularimprintedsolidphaseextractioncombinedwithhighperformanceliquidchromatography

LILing,ZHAOXiao-lei,WANGXuan,HEJin-xing*

(College of Food Science and Engineering,Qilu University of Technology,Jinan 250353,China)

Hydrophilic molecularly imprinted polymers for sulfamethazine were synthesized by bulk polymerization method with sulfamethazine(SMZ)as the template molecule,methacrylate as the functional monomer,hydroxyethyl methacrylate as hydrophilic functional monomers,ethylene glycol dimethacrylate and 3-(trimethoxysilyl)propyl acrylate as the cross-linker,azobisisobutyronitrileas the initiator. The adsorption capacity of the imprinted polymer to the template molecule can reach 11.37 mg/g.The adsorption capacity of the smectic polymer to the sulfonamides in the selective experiment was significantly larger than that of the competitor. The results showed that the hydrophilic molecularly imprinted polymers had a higher affinity and selectivity for 7 sulfonamides(sulfamethazine,sulfadiazine,sulfamethoxazole,sulfonamidoxazole,sulfathiazole,sulfa p-methoxyprimidine,sulfamethoxypyrimidine). At the same time,solid phase extraction coupling to high performance liquid chromatography(HPLC)were used to detect trace sulfonamides in pork. The results showed that the detection limits of 7 kinds of sulfonamides were 1.7～4.5 μg/L and the recoveries were 73.9%～85.4%. The method was simple,convenient and sensitive.

hydrophilicmolecularly imprinted polymers;solid phase extraction;sulfonamides;HPLC

TS207

A

1002-0306(2017)19-0249-07

10.13386/j.issn1002-0306.2017.19.046

2017-05-02

李玲(1991-),女，硕士研究生,研究方向:食品安全检测技术,E-mail:492985480@qq.com。

*通讯作者:何金兴(1978-),男，博士,副教授,研究方向:食品样品前处理技术,E-mail:jinhe@qlu.edu.cn。

国家自然基金青年基金(31301470)。