PRRSV与PCV2双重感染引发副猪嗜血杆菌感染病例的诊断

张爱琼 ，梁海英，曾智勇＊，汤德元，王 彬，黄 涛，徐 国，叶百川，咸 文，何小莉

(贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

PRRSV与PCV2双重感染引发副猪嗜血杆菌感染病例的诊断

张爱琼 ，梁海英，曾智勇＊，汤德元，王 彬，黄 涛，徐 国，叶百川，咸 文，何小莉

(贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

猪圆环病毒病是指以圆环病毒2型（PCV2）为主要病原引起的断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、母猪繁殖障碍、猪呼吸道疾病综合征（PRDC）、猪皮炎和肾病（PDNS）的一系列疾病的总称[1]。其临床症状主要为体质下降、消瘦、生长缓慢、腹泻、呼吸困难、母猪繁殖障碍[2]。该病可导致猪群的免疫抑制，从而继发细菌性感染[3]。猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）俗称猪蓝耳病，是由繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种高度接触性传染病，母猪感染导致发热、厌食、流产、产死胎和木乃伊胎，仔猪感染出现呼吸系统疾病，仔猪发病率可高达100%，死亡率超过50%[4]。副猪嗜血杆菌病又称多发性纤维素性浆膜炎和关节炎，常常在PCV2和PRRSV发生时以继发感染的形式出现[5]。

近年来，PCV2和PRRSV混合感染的情况在养猪业越来越普遍[6-8]。王慧等[9]在2010—2011年期间，对豫鲁地区的170份病料进行病原检测时，发现发病猪存在多种混合感染，其双重感染中PCV2和PRRSV的感染最为严重，总感染率达到33.33%，其中哺乳仔猪和育肥猪的感染率分别为42.10%和50%。PCV2和PRRSV双重感染常引起严重的免疫抑制，并继发严重的细菌性感染，临床表现主要为呼吸系统障碍，病猪出现被毛粗乱、腹泻、消瘦等病症，给疫病的诊治带来很大的困难，同时也给养猪业造成巨大的经济损失。

2017年7 月，贵州六枝特区某新建猪场，在对引进保育猪进行疫苗免疫后，部分保育猪陆续出现腹泻，咳喘，消瘦最终死亡。为确诊病因，故将2只极度消瘦的腹泻病猪送实验室进行检测，现将检测诊断结果报告如下，以供参考。

1 临床及发病特征

据述，该新建猪场于2017年5月份，共引进240头保育猪，隔离观察1个月后，先后按程序进行了猪瘟（CSFV）、猪伪狂犬（PRV）和猪口蹄疫疫苗免疫。在疫苗免疫2周后，部分保育猪陆续出现精神委靡、采食量下降、腹泻、咳喘、消瘦、体温升高和被毛粗乱等临床症状，因腹泻、消瘦死亡保育猪已达80余头，采用多种抗生素药物治疗未见有效。

2 病理解剖特征

2只送检的病猪极度消瘦，解剖可见腹股沟淋巴结和颌下淋巴结肿大、出血，呈褐色；肺脏与胸腔粘连，表面可见纤维素性渗出物，肺尖叶、膈叶部分实变；心包积液，呈典型的“绒毛心”特征（图1）；结肠可见大量白色的猪结节虫（图2），其中一只猪脾脏大面积坏死（图3）；肾脏有瘀斑和点状出血，其他脏器病变特征不明显。

图1 典型的“绒毛心” 

图2 结肠可见大量白色的猪结节虫

图3 脾脏大面积坏死

3 诊断

通过对送检猪的发病情况、临床症状和剖检病理变化观察，初步诊断送检猪存在猪结节虫、副猪嗜血杆菌以及病毒的混合感染。根据送样要求，对病猪组织样品进行了CSFV、PRRSV、PRV和PCV2等病毒的RT-PCR/PCR检测。

适量采集2头送检病猪心、肝、脾、肺、肾等混合组织1份，反复研磨冻融3次后12 000 r/ min离心10 min，取上清，应用MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0核酸提取试剂盒提取核酸，分别进行CSFV、PRRSV、PRV和PCV2的 检 测。CSFV和PRRSV反应体系（50.0 μL）：2×1 Step Buffer 25.0 μL， 模 板9.0 μL， 上 下 游 引 物 各 1.0μL，Prime Script 1 Step Enzyme Mix 2.0 μL，RNase Free H2O 12.0 μL，反应程 序 为 50 ℃ 40 min ；95 ℃ 5 min ；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，37个循环；72 ℃ 10 min 。PRV 和PCV2反应 体 系 为（50.0 μL）：2×Taq酶25.0 μL，ddH2O 14.0 μL， 上 下 游引物各 1.0 μL，模板 9.0 μL。PRV反应程序为 ：94 ℃ 5 min ；94 ℃ 30 s，63 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，38个 循 环；72 ℃ 10 min。PCV2反 应 程 序 为：94 ℃ 5 min ；94 ℃ 1 min，57 ℃ 40 s，72 ℃ 2 min，38 个循环 ；72 ℃ 10 min。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测。检测结果如图4所示，PRRSV、PCV2均为阳性，CSFV、PRV均为阴性。

图4 病原检测结果

4 讨论

根据PCR/RT-PCR检测结果表明，送检病猪存在PCV2和PRRSV双重感染，临床发病特征、病理剖检病变表明送检猪继发有副猪嗜血杆菌感染和猪结节虫感染。PCV2感染可引起PMWS，多发生于5～12周龄的仔猪，初期表现为消化功能降低而后出现食欲不振、被毛粗乱无光泽、贫血、皮肤苍白或黄染，同时出现呼吸和消化系统症状，表现为咳嗽和腹泻[10]。PRRSV感染猪后一般表现为呼吸困难、沉郁，饲料转化率下降，四肢的内侧以及腹部的皮肤呈现出蓝紫色等，在发病的初期，急性病猪的体温会迅速升高，且精神委靡不振，而断奶仔猪表现更为明显，发育极其不良，被毛粗糙。PCV2和PRRSV均是免疫抑制性病原，能导致猪体产生免疫抑制、干扰和破坏猪体对其他病原体的抵抗能力，破坏免疫细胞，降低猪体的免疫力，从而引起多种病毒或细菌的混合感染，如PPV、附红细胞体和副猪嗜血杆菌等[11]，造成复杂临床症状，使临床诊断和治疗更加困难。副猪嗜血杆菌病主要引起肺、心包、腹腔和四肢关节浆膜的纤维素性炎症，临床上主要表现咳嗽、呼吸困难、消瘦、跛行、被毛粗乱[12]，在养猪过程出现PCV2、PRRSV和CSFV等病毒感染及饲养管理不当等因素均可诱发该病的发生。猪结节虫病是由结节虫寄生在猪的结肠、盲肠内所引起，感染严重时常见腹泻，黏膜脱落，猪只极度消瘦，发育迟缓。本次送检病猪就存在PCV2、PRRSV、副猪嗜血杆菌和猪结节虫感染多种病原混合感染的情况。

对于该猪场PCV2和PRRSV双重感染继发副猪嗜血杆菌和猪结节虫感染的情况，应科学地按照免疫程序，做好PCV2和PRRSV的疫苗免疫接种和抗体监测工作，控制PCV2和PRRSV的感染及蔓延，以降低危害。为预防继发副猪嗜血杆菌和其他细菌的感染，应降低猪群饲养密度、减少温差等的环境应激因素，注重药物保健，在饲料中添加适量的抗菌药物。对于猪结节虫可采用左旋咪唑、硫苯咪唑、伊维菌素、阿维菌素等抗寄生虫药物进行治疗，定期做好驱虫工作。戈登民等[13]2009年对PCV2与细菌混合感染采用自拟中药复方黄芪25 g、当归10 g、淫羊藿10 g、生地15 g、白芍15 g、板蓝根20 g、蒲公英30 g、紫草10 g、丹参10 g、薤白10 g、瓜蒌10 g、葶苈子15 g、黄芩10 g进行治疗，发现使用该中药复方具有疗程短，疗效确切，治愈率高的特点。针对PRRS，目前市场上尚无特效药，只能通过预防来减少其带来的危害，适当使用抗菌药物以控制猪群的细菌性继发感染，哺乳仔猪在断奶前后，可在饲料中添加适量的黄芪多糖和抗菌药物，以提高猪自身抵抗力预防猪蓝耳病的继发感染。

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2017-08-14）

省校合作计划项目，黔科合 LH 字 [2014]7670 号

张爱琼，女，在读硕士，研究方向 ：动物传染病病原分子生物学。E-mail：1147415844@qq.com

曾智勇（1978-），男，教授，博士，硕士生导师，从事动物传染病病原分子生物学研究