抗纤软肝颗粒对四氯化碳加乙醇诱导肝纤维化大鼠的影响*

严骏松 周金辉 程良斌

1.湖北中医药大学2014级硕士研究生班 (湖北 武汉，430061) 2.湖北省中医院肝病研究所

·实验研究·

抗纤软肝颗粒对四氯化碳加乙醇诱导肝纤维化大鼠的影响*

严骏松1周金辉1程良斌2△

1.湖北中医药大学2014级硕士研究生班 (湖北 武汉，430061) 2.湖北省中医院肝病研究所

目的：观察中药抗纤软肝颗粒对四氯化碳(CCl4)加乙醇诱导肝纤维化大鼠的影响。方法SD雄性大鼠40只，随机分为3组。分别为模型对照组(M)15只，抗纤软肝颗粒组(K)15只，正常对照组(N)10只。M、K组大鼠分别以40%CCl4橄榄油液腹腔注射，2次/w，并以5%乙醇为唯一饮水；N组大鼠同期注射等剂量的橄榄油。造模同时，K组大鼠即予抗纤软肝颗粒2g/100g/d(中等剂量)灌胃，1次/d；M、N组大鼠同期予等量生理盐水灌胃，共7周。观察大鼠肝脏病理学变化及血清总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、球蛋白(Glo)、Alb/Glo比值、ALT、AST的变化。结果K组大鼠肝细胞变性坏死及肝纤维化程度较M组明显减轻，结缔组织明显减少，纤维间隔显著变薄，未见明显假小叶；M组大鼠血清Alb显著降低，ALT、AST均有明显升高(P<0.05)；K组大鼠Alb回升，ALT及AST明显下降，与M组比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论抗纤软肝颗粒可通过保护肝细胞，降解纤维组织起到抗肝纤维化的作用。

抗纤软肝颗粒；肝纤维化大鼠；药效

AbstractsObjective:To observe the influence of Kangxian Ruangan granules(KXRG) on hepatic fibrosis induced by carbon tetrachloride and ethanol.Methods:Fourty SD male rats were divide into 3 groups randomly: model control group (M) with 15 rats, KXRG group (K) with 15 rats and normal control group (N) with 10 rats. Group M and group K were injected with 40% carbon tetrachloride olive oil at abdominal cavity twice per week. In addition, 5% ethyl alcohol was the only drinking water. group N was injected with olive oil with same quantity at the same time. When modeling, group K was given by gavage once a day with 2g/100g/d (mild moderate dose) KXRG; group M and group N were given by gavage once a day with 2g/100g/d normal saline (NS) for a total of 7 weeks. Observing the hepatic pathologic changes of experimental rats and the influence of the experiment on total protein, albumin, globulin, ALB/Glo ratio, ALT and AST.Results:hepatocyte degenerative necrosis and fibrosis level in group K were lower than group M. In addition, connective tissues decreased obviously, fibrous septum became thinner significantly, there was no visible pseudolobule.ALB in group M decreased significantly, ALT and AST increased significantly (P<0.05). compared with group M ,ALB in group K rised again, ALT and AST decreased significantly (P<0.05).Conclusion:Kangxian Ruangan granule could prevent hepatic fibrosis by protecting the hepatocyte.

KeyWordsKangxian Ruangan granule; hepatic fibrosis; medical efficacy;

尽管国内外对肝纤维化的发病机制有了越来越深入的了解，但在治疗方面，进展却比较缓慢。现代医学治疗肝纤维化的药物和技术不断发展,但是由于肝纤维化的发生发展机制复杂,患者病情多样性等因素，其疗效不十分理想,加上药物价格昂贵，副作用和不良反应大,这也阻碍了肝纤维化治疗的发展,目前，慢性肝病肝纤维化的治疗，仍缺乏较安全有效的理想药物[1.2]。因此，人们把研究目光越来越多地投向了中医药。抗纤软肝颗粒是湖北省中医院肝病研究所临床有效的抗肝纤维化经验方，现为院内中成药制剂，经十多年临床应用证实其对肝纤维化具有显著疗效。本次实验，我们采用CCl4加乙醇建立大鼠肝纤维化模型，观察大鼠肝组织的病理学改变、肝功能变化，研究抗纤软肝颗粒抗肝纤维化作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验药物及试剂 ①抗纤软肝颗粒由海藻、鳖甲、牡蛎、莪术、丹参等组成，由湖北省中医院制剂科生产(批准文号：鄂药制字Z20113145)，生药含量为2g/100g。②分析纯CCl4由成都金山化学试剂有限公司提供，批号为071020；市售白云边牌食用白酒(乙醇体积分数为45%)，批号20080309F2；肝功能TP、Alb、Glo、ALT、AST试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 实验动物与造模方法

1.2.1 实验动物 健康雄性SD大鼠40只，体重200±20g，购自武汉大学医学院实验动物中心。合格证号：SCXK(鄂)2003-0004。

1.2.2 动物喂养及造模方法 将40只大鼠以普通饲料适应性喂养1W后，按随机数字表分为3组。分别为正常对照组10只(N)，模型对照组15只(M)，抗纤软肝颗粒组15只(K)。实验动物饲养于8个同等大小不锈钢鼠笼内，每笼5只，置安静、通风、室温(20～25℃)、湿度60%～75%的实验室环境，保持室内和笼内卫生；饲料为普通条杆状饲料，由武汉大学医学院实验动物中心饲料加工厂提供；饮用水为清洁自来水。采用CCl4加乙醇建立肝纤维化大鼠模型。M、K组大鼠分别以40%CCl4橄榄油液腹腔注射，首次剂量为0.5ml/100g体重，以后0.2ml/100g体重，2次/w，并以5%乙醇为唯一饮水，共7w；N组大鼠同期注射等剂量的橄榄油。造模第1天起，K组大鼠即予抗纤软肝颗粒2g/100g/d(中等剂量)灌胃，1次/d；M、N组大鼠同期予等量生理盐水灌胃，共7w。7w末，取M组大鼠，脱颈处死取其肝脏标本，观察病理切片，肝组织可见典型的纤维组织增生及假小叶形成，提示造模成功。

1.3 观察指标与方法

1.3.1 一般情况 观察各组大鼠体重、精神、运动、饮食、大便、皮毛色泽等情况。

1.3.2 肝组织病理学检查 取各组大鼠肝脏，10%甲醛固定制成石蜡切片,进行HE染色,光学显微镜下观察肝脏组织学病理变化。将肝纤维化分为0～4级，0级：无纤维化；1级：纤维结缔组织仅局限于汇管区或汇管区扩大有向小叶发展的趋势；2级：纤维结缔组织增生进入肝小叶2/3并有1级同样的改变；3级：纤维结缔组织进入肝小叶达中央静脉周围；4级纤维结缔组织在全小叶多处弥漫性增生，假小叶形成并有3级同样改变。

1.3.3 肝功能检测 采用全自动生化分析仪，常规生化方法检测血清TP、Alb、Glo、Alb/Glo、ALT、AST。

2 结果

2.1 一般情况 M组大鼠皮毛枯槁、稀疏、暗淡无光，嗜睡少动，进食差，消瘦，部分大鼠出现稀便；N组大鼠皮毛顺滑、浓密、光洁，活跃好动，进食好，体重日渐增加，粪粒正常；K组大鼠状态较N组稍差，比M组明显改善。实验期间，M组大鼠死亡6只，K组大鼠死亡4只，正常对照组大鼠均存活。

2.2 3组大鼠肝脏组织病理学变化情况 HE染色示：N组大鼠肝小叶结构完整，肝细胞索排列规则，在中央静脉周围呈放射状分布，小叶内无细胞变性，无炎性细胞浸润；M组大鼠肝小叶结构破坏，肝索排列紊乱，纤维结缔组织增生，深入、包绕并分割正常肝组织，形成假小叶；纤维间隔内有炎细胞浸润；K组大鼠肝细胞变性坏死及肝纤维化水平较M组明显减轻，炎性细胞浸润及结缔组织形成明显减少，纤维间隔显著变薄，未见明显假小叶。结果见表1。

表1 各组大鼠肝脏组织病理学比较 (n)

与N组比较,▲P<0.05，与M组比较,△P<0.05

2.3 3组大鼠血清肝功能指标检查结果 见表2。

3 讨论

肝纤维化是现代病理学概念，中医原本无此称谓，但据其临床症状 、体征及病理特征，可将其归属于“癥积”、“积聚”、“臌胀”、“胁痛”等病的范畴。肝纤维化的发生虽与多种因素有关，但其本质离不开血瘀、痰浊，两者相互影响[3]。抗纤软肝颗粒是已故国家级名老中医吕继端先生治疗肝硬变的祖传经验方，该方由海藻、鳖甲、牡蛎、丹参、莪术等药组成，具有软坚散结、活血化瘀的功效。方中海藻配牡蛎咸寒软坚散结，又能祛水气。《本草崇原》说：“海藻，主治经脉内外之坚结”。《本草备要》云：“牡蛎，咸以软坚化痰，消老血疝瘕”。鳖甲咸走血而能软坚，又有入络之功，可去恶生新，鳖甲配牡蛎取其软坚兼能养阴。三药合用可磨化久瘀老痰，对血积深痼顽痰尤为适用。配莪术行气破血，消癥化积，与丹参为伍加强活血的作用。

表2 3组大鼠血清肝功能检测结果比较

与N组比较，▲P<0.05；与M组比较，△P<0.05本方特点是通过软坚散结，消痞化积，使肝内瘀血“融化”，再用活血化瘀之品“驱出”，而达到抗肝纤维化的目的[4、5]。

本实验结果表明：CCl4加乙醇可导致肝组织纤维化，可引起肝小叶结构破坏，肝索排列紊乱，纤维结缔组织增生，假小叶形成等病变。抗纤软肝颗粒可延缓并抑制这一进程。抗纤软肝颗粒能够降低肝纤维化大鼠血清ALT、AST含量，升高Alb，降解纤维，起到抗纤维的作用。

[1] 刘鸣昊 ，薛博瑜.近5年来肝纤维化中医证治用药规律的文献研究[J].中国实验方剂学杂志，2011,17( 18):289-292.

[2] 夏海珊 ,陈少茹, 钟月春,等.肝纤维化的发病机制和药物治疗现况[J].中国医药导报，2014，11(18)：162-165.

[3] 聂红明,王灵台. 安络化纤丸抗肝纤维化的研究进展[J].中西医结合肝病杂志，2016，26(3): 185-187.

[4] 杨玲，朱清静，张赤志.软坚消痰活血化瘀法抗肝纤维化的作用机制概述[J].中医药学刊，2005，23(11)：1969-1971.

[5] 张赤志，严红梅，王丽.抗纤软肝冲剂治疗肝硬变31例[J].中西医结合肝病杂志，1999，9 (2)：19-20.

EffectofKangxianRuangangranulesonhepaticfibrosisinducedbycarbontetrachlorideandethanol

YANJun-song1,ZHOUJin-hui1,CHENGLiang-bin2△

1.Departmentofpostgraduatecollege,HubeiuniversityofTraditionalChinesemedicine(WuhanHubei,430061)China

2016-10-28 编辑：韦 怡)

10.3969/j.issn.1005-0264.2017.01.014

国家中医药管理局国家中医临床研究基地业务建设科研专项(No.JDZX2015179)；△通信作者，E-mail：18971241243@163.com