振腹干预对2型糖尿病大鼠血糖的调节作用与对其HPA轴影响的相关性

王 鹤，肖星蕾，赵方晓，陈幼楠，林彩霞

（北京中医药大学针灸推拿学院，北京，100029）

振腹干预对2型糖尿病大鼠血糖的调节作用与对其HPA轴影响的相关性

王 鹤，肖星蕾，赵方晓，陈幼楠*，林彩霞

（北京中医药大学针灸推拿学院，北京，100029）

目的 研究振腹干预对2型糖尿病大鼠血糖的调节与对其HPA轴的影响是否具有相关性。方法 将60只大鼠随机分为对照组10只、模型组50只，对模型组以链脲佐菌素（STZ）腹腔注射合并高糖高脂饲料喂养的方式进行造模，后将符合纳入标准的模型组大鼠分为模型组12只，治疗组12只。对治疗组大鼠行振腹干预，干预结束后将大鼠处死，取材并进行相应检测，对所得数据进行整理分析。结果 治疗结束后，治疗组与模型组相比，FBG水平明显降低，有统计学意义（P＜0.05），肾上腺指数水平明显降低，有统计学意义（P＜0.05），肾上腺CORT浓度明显降低，有统计学意义（P＜0.05），下丘脑CRH浓度明显降低，有统计学意义（P＜0.05）。治疗组与对照组相比，FBG水平及肾上腺指数仍较高（P＜0.05）。结论 振腹干预能有效降低2型糖尿病大鼠的FBG水平，且其肾上腺皮质分泌功能、HPA轴活性也相应降低，说明振腹法调节2型糖尿病大鼠糖代谢可能与其改善了肾上腺皮质分泌功能及HPA轴功能有关。

2型糖尿病；振腹干预；HPA轴；FBG；CORT；CRH

Abstract: Objective Study on whether the regulation of vibration abdominal intervention on type 2 diabetes mellitus rats of blood sugar and the effects on the HPA axis is relevant or not.Methods 60 rats were randomly divided into normal control group 10 and model group 50.Make models with STZ injection combining with high sugar and high fat feeding in the model group.And pick out the rats which comply with the inclusion criteria to divide 12 into model group and 12 into treatment group.Give vibration abdominal intervention to the treatment group rats, then kill them for test.Collect and analyze the data.Results 1.After the treatment, compared with model group, the FBG level of treatment group significantly reduced (P＜0.05), the adrenal index level of treatment group significantly reduced(P＜0.05), the adrenal CORT concentration of treatment group significantly decreased (P＜0.05) and the hypothalamus CRH concentration of treatment group significantly decreased (P＜0.05).2.Compared with normal control group,the FBG level of treatment group is still higher (P＜0.05) and the adrenal index level of treatment group is still higher(P＜0.05).Conclusion Vibration abdominal intervention can effectively reduce the level of FBG in type 2 diabetic rats.It means Vibration abdominal intervention has therapeutic effect on type 2 diabetic rats.The level of secretion of adrenocortical function and activity of HPA axis of the type 2 diabetic rats also reduced accordingly, which means that the regulating effect of type 2 diabetic rats glucose metabolism may be related to improve the secretion of adrenocortical function and the function of HPA axis.

Keywords: type 2 diabetes mellitus; vibration abdominal intervention; HPA axis; FBG; CORT; CRH

北京中医药大学臧福科教授在上个世纪80年代提出振腹疗法(vibration abdominal Intervention)，其方法是以神阙穴为中心，用手掌置于腹部并释放腕痉挛作用于腹部。中医认为振腹法通过刺激任脉、带脉、脾经、胃经、肾经的经穴达到滋补阴津、强肾健脾的功效。振腹手法覆盖的穴位包括神阙、天枢、气海、关元，神阙穴居中下焦之间，具有气通百脉，布五脏六腑的功能，天枢、气海、关元各穴也均有不同作用[1]，经振腹刺激，能够激发经气，调和百脉，培元固本，强运化、促输布，又可调和脏腑，调理肠胃、理气和营、温肾助阳、化气生血，使经络通畅，气机调达，阴阳平衡[2]。临床报道[3-12]表明，振腹法能够通过纠正内分泌而对多种疾病起效，其对糖尿病的治疗效果也得到了临床研究证实[5-6]。本课题组前期的试验研究也已证明振腹法对T2DM大鼠脂代谢及血糖水平均有显著调节作用，血清游离脂肪酸、三酰甘油、血糖水平及胰岛素指数均得到明显改善[13-15]。研究还发现，T2DM患者常伴有不同程度的下丘脑－垂体－肾上腺轴（HPA轴)功能失调，具体表现以基础活性增加、促糖皮质激素昼夜节律紊乱、皮质醇分泌性亢进为主。本实验即由HPA轴入手，研究振腹法对2型糖尿病大鼠血糖的调节作用与其对HPA轴的影响是否具有相关性。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 选用健康7周龄SPF级雄性Wistar大鼠60只，体质量（250±10）g，北京斯贝福实验动物科技有限公司提供，合格号：SCXK（京）2011-0004。饲养条件：温度18～25 ℃，湿度50%～60 %，日光灯光照，自由饮用自来水。普通饲料：清洁级普通大鼠饲料（北京科澳协力有限公司）。高糖高脂饲料[16]：主要成分为66 %基础饲料、15 %猪油、10 %白糖、6 %酪蛋白、3 %蛋黄粉（北京科澳协力有限公司）。

1.1.2 主要试剂 链脲佐菌素（STZ）：美国Sigma公司提供。STZ溶液配制方法：一水合柠檬酸、二水合柠檬酸钠配制成0.1 mmol/L柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液，调节pH至4.4，高压蒸汽灭菌后4 ℃冷藏保存，注射前在避光状态下与STZ配制成2%的STZ溶液，于配置30 min内使用完毕。罗氏全活力型血糖仪及配套血糖试纸：北京健力园医疗器械有限公司提供。ELISA皮质酮试剂盒：德国DRG公司生产，批号：61K025。

1.1.3 仪器设备 振腹治疗仪：课题组根据振腹法原理进行设计，北京拓普斯乐有限公司提供技术支持。仪器构成：振子、束缚带、主机盒、电源线。振子上下振动幅度约2 mm，振动频率为300次/min，220 v交流电源供电。

1.2 方法

1.2.1 分组与造模 60只大鼠适应性饲养1周，采用随机分组法分为对照组10只和模型组50只。对照组大鼠采用普通饲料饲养，模型组大鼠采用高糖高脂饲料饲养，6周后，进行药物造模，所有大鼠禁食不禁水12 h，模型组大鼠腹腔一次性快速注射STZ溶液 30 mg/kg，对照组大鼠腹腔注射同等体积的柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液。对照组大鼠采用普通饲料饲养，模型组大鼠仍然采用高糖高脂饲料饲养，其中，模型组大鼠给予饮用葡萄糖水，以避免低血糖，降低死亡率。造模3 d后检测模型组大鼠随机血糖，对不符合成模标准的大鼠再次腹腔注射STZ 25 mg/kg，方法同上。1周后，所有大鼠禁食不禁水12 h，检测空腹血糖(FBG)，将符合成模标准的大鼠纳入分组。

1.2.2 纳入标准 对照组：空腹血糖在正常范围内的大鼠。模型组：1）参考美国糖尿病协会（ADA）人类糖尿病的诊断标准[17]，随机血糖≥16.7 mmol/L且稳定7 d及以上；2）禁食不禁水12 h后测量大鼠空腹血糖，并对大鼠进行OGTT测试。空腹血糖和餐后血糖均明显升高者纳入造模组。纳入完成后，将符合模型标准的大鼠随机分为模型组12只，治疗组12只。

1.2.3 振腹干预 对照组始终给予普通饲料喂养，不进行振腹干预。模型组始终给予高糖高脂饲料喂养，不进行振腹干预。治疗组始终给予高糖高脂饲料喂养，参照《实验针灸学》选取临床振腹法作用部位，将仪器的振子覆盖于腹部任脉、左右胃经、肾经循行部位，包括神阙、关元、下脘、滑肉门、大横穴等穴位，以束缚带固定，进行振腹干预。治疗隔日1次，持续15 min/次，连续治疗6周。

1.3 取材及指标检测

1.3.1 空腹血糖 测量时间：饮食造模前、药物造模后干预开始前、实验结束后，分别测量1次。测量方法：20：00撤食，禁食不禁水12 h后，采血针在大鼠尾静脉距末端0.5～1 cm处点刺取第2滴血，用罗氏血糖仪及血糖检测试纸快速检测，具体操作按说明书要求进行。

1.3.2 肾上腺皮质醇（ CORT） 治疗周期结束后，早8：00 — 8：30将大鼠处死，在冰盘上取出完整左侧肾上腺，迅速置于液氮中冷藏，测量时使用ELISA皮质酮试剂盒，采用ELISA平衡竞争法进行检测（由北京北方生物技术研究所代为检测）。

1.3.3 下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素（CRH） 治疗周期结束后，早8：00 — 8：30将大鼠处死，破坏颅底骨，将下丘脑作为一团块取出，前面限制在视交叉2 mm，后面至乳头体，侧面从下丘脑裂纹至离其底3 mm的组织，迅速置于液氮中冷藏，测量时使用CRH试剂盒，采用RIA法进行检测（由北京北方生物技术研究所代为检测）。

1.3.4 肾上腺指数 治疗周期结束，早8：00—8：30将大鼠处死，在冰盘上取出右侧肾上腺，将脂肪等组织剥离干净，且不破坏肾上腺皮质，称重。根据肾上腺指数公式计算出结果。

1.4 统计学分析 实验数据采用软件SPSS 20.0进行统计学处理，结果以均数±标准差（x± s ）描述。组间比较，若数据符合正态性分布且方差齐，则采用F检验，若方差不齐，则进行Welch检验或者K个独立样本非参数检验，若不符合正态性分布，则采用K个独立样本非参数检验；组内比较，若差值d符合正态性分布，则进行配对t检验，若不符合正态性分布，则进行Wilcoxon检验，检验结果以P＜0.05为具有统计学意义。

2 结果

2.1 振腹干预对各组大鼠FBG的影响 见表1。

表1 各组大鼠FBG比较(x± s ） mmol/L

2.2 振腹干预对各组大鼠肾上腺CORT的影响 见表2。

表2 各组大鼠肾上腺CORT浓度比较(x± s ）ng/mg

2.3 振腹干预对各组大鼠下丘脑CRH的影响 见表3。

表3 各组大鼠下丘脑CRH浓度比较(x± s ） pg/mg

2.4 振腹干预对各组大鼠肾上腺指数的影响 见表4。

表4 各组大鼠肾上腺指数比较(x± s ） mg/g

3 讨论

各组大鼠FBG的结果表明，振腹法能有效的降低2型糖尿病大鼠的FBG，对其糖代谢紊乱具有一定的调节作用。但治疗后与对照组相比，治疗组大鼠的FBG仍然较高，说明虽然振腹法具有一定的降糖作用，但不能完全将血糖恢复至正常水平。

各组大鼠肾上腺CORT、下丘脑CRH的结果显示，2型糖尿病大鼠存在HPA基础功能亢进，治疗后，治疗组大鼠的肾上腺CORT浓度、下丘脑CRH浓度较模型组明显降低，进一步表明了振腹法可以调节T2DM大鼠CORT、CRH的合成分泌，对其HPA轴的活性具有调节作用。研究表明，慢性应激时存在肾上腺增大，当HPA轴功能亢进时，CORT分泌增加，肾上腺皮质功能活动增强，从而造成组织肥大、重量增加，而当肾上腺皮质的功能活动减弱时，会出现组织萎缩、重量减轻，因此，肾上腺重量的改变，可以粗略地反映肾上腺皮质功能的情况及HPA轴活性改变。本实验选用肾上腺重量与体质量比，即肾上腺指数来大体衡量HPA轴功能的变化。实验结果显示，模型组肾上腺指数明显高于对照组，说明该实验中2型糖尿病大鼠模型肾上腺皮质功能活动增强，存在HPA功能紊乱的现象，治疗后，治疗组大鼠肾上腺指数较模型组明显降低，表明治疗组大鼠的肾上腺皮质功能活动下调，HPA轴功能得到改善，在一定程度上说明振腹法对HPA轴活性具有调节作用。

综上所述，振腹干预能有效降低2型糖尿病大鼠的FBG水平，且其肾上腺皮质分泌功能、HPA轴活性也相应降低，推测振腹法调节2型糖尿病大鼠糖代谢可能与其改善了肾上腺皮质分泌功能及HPA轴功能有关，但该机制尚不明确，还需进一步研究。

[1]蔡明亨.振腹疗法治疗糖耐量低减的临床研究[D].北京： 北京中医药大学, 2013.

[2]苏波.中医振腹对2型糖尿病大鼠血糖和GLP-1分泌影响的实验研究[D].北京： 北京中医药大学, 2013.

[3]林彩霞.振腹法临床应用体会[J].世界中医药, 2009, 4(3)：157-158.

[4]宏达, 臧福科.大成推拿术[M].北京： 中国中医药出版社,1998： 694.

[5]王金涛.松振法为主推拿治疗糖尿病18例[J].山东中医杂志 , 1999, 18(11)： 502.

[6]郭俊海.振腹法治疗糖尿病初探[J].中国实验方剂学杂志,2010, 16(6)： 224-225.

[7]许英姝.脏腑推拿手法治疗原发性痛经的临床疗效观察[D].北京： 北京中医药大学, 2013.

[8]杨国帅.掌振法为主推拿治疗慢性浅表性胃炎(脾胃虚寒型)的临床研究[D].济南： 山东中医药大学, 2014.

[9]彭亮, 李江山, 李铁浪, 等.不同推拿手法对原发性痛经患者血清PGF_(2α)含量及疼痛症状的影响[J].湖南中医药大学学报 , 2012, 32(7)： 66-74.

[10]于长生, 于晓光.振腹配合推拿治疗顽固性心绞痛临床观察 [J].按摩与导引 , 2005, 21(9)： 3-4.

[11]丁海安, 严先贵.浅谈振腹治疗痛经[J].按摩与导引,2005, 21(3)： 34.

[12]成为品.浅谈振腹治疗内分泌紊乱[J].按摩与导引,1999, 15(6)： 3.

[13]陈鹏辉, 杨冰, 季然, 等.振腹对2型糖尿病大鼠血清游离脂肪酸和三酰甘油的影响[J].环球中医药, 2015, 8(9)：1070-1074.

[14]张月.振腹法对2型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响[D].北京： 北京中医药大学, 2015.

[15]赵方晓, 张月, 范德宇, 等.振腹法对2型糖尿病大鼠血糖和胰高血糖素样肽-1分泌的影响[J].世界中医药,2015, 10(5)： 749-756.

[16]YE D, ZHANG ZF, DAI XQ.et al.grape seed proanthocyanidins ameliorate pancreatic beta-cell dysfunction and death in lowdose streptozotocin and high-carbohydrate/high-fat diet-induced diabetic rats partially by regulating endoplasmic reticulum stress[J].nutr metab (Lond), 2013, 10(51)： 1-12.

[17]AMERICAN, DIABETES, ASSOCIATION.Standards of medical care in diabetes-2012 [J].Diabetes Care, 2012, 35(1)： 11-63.

Regulating effect of vibration abdominal intervention on type 2 diabetic rats’blood glucose and the correlation study of the impact of the HPA Axis

WANG He, XIAO Xinglei, ZHAO Fangxiao, CHEN Younan*, LIN Caixia
（School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029, China）

R285.5

A

1003-5699(2017)09-0699-04

2017-02-13）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.05.004

国家自然科学基金青年科学基金项目“振腹法振频对HPA轴的调节作用及其对Ⅱ型糖尿病兔血糖的影响”（81202772）。

王 鹤（1990 -），女，硕士研究生，主要从事推拿学治疗内科疾病机理研究。

*通信作者：陈幼楠，女，副教授，硕士研究生导师，电话-13810123910，电子信箱- chenyounan2010@163.com