氧化石墨烯对大型溞的生物毒性效应研究

石柳，王栋，张瑛，曹迪，孟甜甜，郭溪，周集体

大连理工大学化工与环境生命学部环境学院，工业生态与环境工程教育部重点实验室，大连 116024

氧化石墨烯对大型溞的生物毒性效应研究

石柳，王栋，张瑛*，曹迪，孟甜甜，郭溪，周集体

大连理工大学化工与环境生命学部环境学院，工业生态与环境工程教育部重点实验室，大连 116024

氧化石墨烯(graphene oxide, GO)因其优良的电性能、机械性能，而成为新兴的碳纳米应用材料，但是其制造或应用后排放进入环境水体的潜在生态风险缺少足够的研究，尤其是关于GO生态毒性的基础数据。研究以水生甲壳类动物大型溞(Daphnia magna, D. magna)为受试生物，从急性毒性和慢性毒性两方面考察了GO的生物毒性效应，并结合溞类的光学显微镜观察和体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力以及丙二醛(MDA)含量的测定对GO对大型溞的致毒机理进行了初步探究。研究结果表明GO对大型溞急性毒性的48 h半数致死浓度(48 h-LC50)为84.2 mg·L-1；慢性毒性的21 d半数致死浓度(21 d-LC50)为3.3 mg·L-1。关于GO对大型溞的繁殖毒性，当GO浓度达到1 mg·L-1时能够显著推迟母溞的头胎出生时间，抑制母溞头胎幼溞数、单胎最高产溞数和总产溞数。关于GO对大型溞的致毒机理，研究结果表明消化道堵塞和氧化损伤可能是GO对大型溞的主要致毒途径。上述研究结果为GO在水环境中的毒性效应研究奠定了基础，为GO的工业化应用前景提供了基础的生态毒性数据。

氧化石墨烯；大型溞；急性毒性；慢性毒性；氧化损伤

Received14 January 2017accepted30 March 2017

Abstract: Graphene oxide (GO) has been extensively explored as a promising carbon-based nanomaterial because of its unique electrical and mechanical properties. The versatile manufacture and application of GO made it inevitably release into the aqueous environment. However, limit is known about the potential risk of GO in aquatic environment. To evaluate the bio-toxicity of GO, the acute toxicity and semi-chronic toxicity using Daphnia magna (D. magna) were conducted. The toxicity mechanism of GO to D. magna was investigated preliminarily by the light microscopy, the measurement of SOD and CAT activities and MDA content. The results showed that the 48 h-LC50of GO in acute toxicity tests was 84.2 mg·L-1. The 21 d-LC50in semi-chronic toxicity tests was 3.3 mg·L-1. As to the reproduction of D. magna, the significant delay in the production time of the first brood was found when the concentration of GO reached 1 mg·L-1, as well as the significant inhibition in the offspring number of the first brood, the offspring number of the most productive brood and the total number of offspring. With respect to the toxicity mechanism of GO, the results revealed that gut clogging and oxidative stress might be the main toxicity pathway of GO to D. magna. This study gave an example of the toxicity research for novel chemicals, and provided the basic toxicity information of GO in respect of its industrial application.

Keywords: graphene oxide; Daphnia magna; acute toxicity; chronic toxicity; oxidative stress

氧化石墨烯(GO)是石墨烯经氧化处理后的衍生物，除了具备石墨烯的片层结构的特殊性质外，表面含有大量的羧基、羟基、烷氧基等亲水基团[1]。GO具有优异的物理化学性质，例如较高的比表面能、良好的亲水性、吸附性和机械性能等，被广泛应用于能源、材料学和生物医学等方面[2]。因此，随着GO的大规模应用，其进入水体后造成的生态效应与安全问题不容忽视。

目前关于GO生物毒性的报道中，主要考察了GO对哺乳动物[3]、人体或动物细胞[4-5]的毒性效应，而对水生生物的毒性效应还缺少足够的研究。

关于GO对水生生物的毒性效应研究报道中，所用的受试生物主要有菌类(如大肠杆菌[6]、恶臭假单胞菌[7])、藻类(如月牙藻[1]、铜绿微囊藻[8]及普通小球藻[9-10])、原生动物类(如小眼虫[11])、浮游动物类(如纹藤壶[12]及丰年虾[13])以及鱼类(斑马鱼胚胎[14]及成鱼[15])。然而，GO对通用水生模式生物大型溞的毒理学数据还未见报道。

另外，已有研究中，对于GO的毒性效应，主要关注的是GO短期暴露后的生物毒性效应。如，GO对菌类的毒性作用表现在GO具有一定的抗菌性，造成膜损伤和氧化损伤[6-7]。GO对藻类的毒性作用主要表现在GO能抑制藻类的生长、叶绿素a合成以及使藻细胞内活性氧物种(ROS)含量增加[1,8-10]。GO对原生动物小眼虫的毒性作用主要体现在其会抑制小眼虫生长及使SOD、CAT活力升高[11]。GO对浮游动物(如纹藤壶[12]和丰年虾[13])的毒性研究表明GO达到一定浓度时会使幼虫游动速度降低，死亡率升高。GO对斑马鱼胚胎的毒性作用主要表现在胚胎孵化延迟、心脏水肿等方面[14]。GO对斑马鱼成鱼表现出氧化损伤和免疫毒性[15]。然而，关于长期暴露后GO对水生生物的毒性效应，特别是对水生生物繁殖的毒性效应研究还较少。

为了考察GO在制造或应用后排放进入环境水体所造成的潜在生态风险，本研究以水生甲壳类动物大型溞为受试生物，考察了GO对大型溞的48 h急性毒性和21 d慢性毒性，并通过暴露后溞类的光学显微镜观察及其体内抗氧化酶(SOD和CAT)活力以及丙二醛(MDA)含量的测定来探究GO对大型溞的致毒机理。本研究旨在为在水环境中GO的毒性效应提供研究基础，为GO的工业化应用前景提供生态毒性数据。

1 材料与方法(Materials and methods)

1.1 实验材料

本研究采用的是单层GO粉末，购于南京先丰纳米材料科技有限公司，纯度>99 wt%，直径500 nm～5 μm，厚度0.8～1.2 nm。GO储备液(2 g·L-1)用超纯水配制，超声分散30 min后常温储存备用，储备液均匀分散。其余化学试剂均为国产分析纯试剂，购于中国国药有限公司。

大型溞(Daphnia magna, D. magna )由大连海洋大学水生生物学重点实验室提供，为本实验室连续培养3代以上的单克隆品系。大型溞在曝气(>24 h)自来水中养殖，饲以斜生栅藻。培养条件：温度为(20±1) ℃，明暗时间比为16 h∶8 h，溶解氧DO>3 mg·L-1，pH为6～9。定期用重铬酸钾作为参考物检验实验用溞的敏感性，当大型溞的24 h-EC50(24 h内50%的受试溞运动受到抑制时被测物质的浓度)在0.6～2.1 mg·L-1时，表明该大型溞符合实验要求，可用于毒性实验。暴露前2 h将实验用溞置于充氧饱和的人工稀释水中培养，以适应新的实验条件。采用人工稀释水的原因是为控制实验条件的稳定，避免自来水中的杂质对GO毒性的干扰。

1.2 实验方法

毒性实验用暴露溶液的配制：将GO储备液超声分散30 min后，用充氧饱和的人工稀释水(配制比例如表1所示[16]，用氢氧化钠或盐酸溶液调节pH至7.8左右)将储备液稀释成不同浓度的暴露液。考虑到GO会团聚沉淀，暴露液均为当天暴露前新鲜配制。

GO在超纯水中的粒径表征：粒径表征参照Nogueira等[1]的研究方法进行，用超纯水配制浓度为0.01 mg·L-1(实验中设定最低浓度)的GO分散液，超声分散30 min(与毒性实验中暴露液配制的超声时间相同)，然后用纳米粒度仪(Malvern, Nano-ZS90, England)进行测定。

大型溞的急性毒性实验：实验采用24 h内新生的幼溞，实验方法参照经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则No.202 (2004)《溞类急性活动抑制试验》进行[17]。正式实验根据预实验确定的GO浓度范围进行设置，共设置6个等梯度的实验浓度组和1个空白对照组，每个浓度设置4个平行样。暴露时间为48 h，实验期间不喂食。实验结束后，空白对照组中大型溞的死亡率低于10%，则表明实验结果有效。毒性表征采用48 h-LC50(48 h内50%的受试溞死亡时被测物质的浓度)表示。

大型溞的慢性毒性实验：实验采用24 h内新生的幼溞，实验方法参照经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则No.211 (1998)：《大型溞繁殖试验》进行[18]。根据急性毒性实验结果，确定GO对大型溞无急性毒性浓度范围后设置5个实验浓度组和1个空白对照组，每组10个平行样。暴露时间为21 d，每天喂食，隔天更换实验溶液。实验结束后，空白对照组大型溞的死亡率低于20%且平均每只母溞总产溞量大于60只，则实验结果有效。毒性表征采用21 d-LC50、母溞头胎出生时间、头胎幼溞数、单胎最高产溞数和总产溞数表示。

大型溞体内SOD、CAT活力以及MDA含量的测定：实验用溞为出生3～4 d幼溞。根据急性毒性实验结果，确定GO对大型溞无急性毒性浓度范围后，设置5个实验浓度组和1个空白对照组。暴露48 h后，准确称取大型溞的待测组织的重量，加入适当用量的磷酸缓冲溶液后，在冰水浴条件下机械匀浆，10 000 r·min-1，离心20 min，取上清液(每组3个平行样)，按南京建成生物研究所的试剂盒要求测定总蛋白含量、SOD和CAT活力以及MDA含量。

大型溞的光学显微镜观察：在急性毒性和慢性毒性实验结束后，将暴露后的大型溞用人工稀释水冲洗2～3次后置于光学显微镜(Olympus, Model YS100, Japan)下观察，并用相机(Canon, EOS 760D, Japan)记录结果。

1.3 数据统计与分析

LC50及95%置信区间的计算参照Morrison等[19]的方法，使用SPSS 18.0(IBM，USA)软件中的probit analysis进行。慢性毒性和氧化损伤毒性实验数据采用平均数 ± 标准差形式表示，用OriginPro 9.0(OriginLab，USA)软件绘图，用SPSS 18.0软件中单方差分析(One-way ANOVA)中的土耳其检验(Tukey’s test)进行差异性分析(P < 0.05)。

2 结果(Results)

2.1 GO的粒径表征

经纳米粒度仪分析得出GO在超纯水中的平均粒径为(1 108 ± 51) nm，即平均粒径在1 μm左右。

2.2 GO对大型溞的急性毒性

根据预实验结果，选用不同浓度的GO悬浮液对大型溞进行急性毒性实验，大型溞在暴露48 h后死亡率情况如表2所示。

由表2可以看出，GO浓度小于50.0 mg·L-1时，对大型溞没有表现出急性致死毒性，由此可以认为GO对大型溞急性毒性的最大无影响浓度(no observed effect concentration, NOEC)为50.0 mg·L-1。随着GO浓度从65.0 mg·L-1增加到143.0 mg·L-1时，大型溞的死亡率由10%逐渐增加到100%，表明GO对大型溞的毒性表现出一定的剂量-效应关系。

表2 氧化石墨烯(GO)对大型溞的急性毒性Table 2 Acute toxicity of graphene oxide (GO) to D. magna

经计算得到GO对大型溞急性毒性的48 h-LC50值为84.2 mg·L-1(95%置信区间为81.6～87.0 mg·L-1)。

2.3 GO对大型溞的慢性毒性

在急性毒性研究的基础上，进一步考察了GO对大型溞的慢性毒性。将大型溞暴露在不同浓度的GO悬浮液中，在21 d后统计其母溞死亡率、母溞头胎出生时间、头胎幼溞数、单胎最高产溞数和总产溞数情况，结果如图1所示。

不同浓度GO暴露后的母溞的存活状况如图1(A)所示。大型溞暴露于浓度为0.01 mg·L-1的GO中21 d后没有出现死亡；当GO浓度从0.1 mg·L-1增加到50.0 mg·L-1，大型溞的死亡率由10%逐渐增加到100%。经计算可得GO对大型溞慢性毒性的21 d-LC50值为3.3 mg·L-1(95%置信区间为0.4～15.2 mg·L-1)。由此可以看出，大型溞的21 d死亡率与GO呈现出一定的浓度效应。

在此基础上，考察了GO对大型溞繁殖的毒性效应。不同浓度的GO对母溞头胎出生时间的影响如图1(B)所示。由图中可以看出，当GO浓度为1.0 mg·L-1时，GO会延迟大型溞头胎的出生时间，从8 d延长至10 d；当GO浓度为10.0 mg·L-1时，大型溞在实验周期21 d中均未生第一胎。GO对母溞头胎幼溞数、单胎最高产溞数和总产溞数的影响如图1(C)所示，由图中可以看出，当GO浓度为0.1 mg·L-1时，GO开始对母溞头胎幼溞数和总产溞数表现出抑制作用，数量分别由8只和73只减少到4只和51只；当GO浓度为1.0 mg·L-1时，GO开始对母溞单胎最高产溞数表现出抑制作用，产溞量由24只降低到17只。由此可以看出，GO对大型溞具有一定的慢性毒性，且母溞死亡率、母溞头胎幼溞数以及总产溞量3个指标较为敏感。

图1 GO对大型溞的慢性毒性注：A，母溞死亡率；B，母溞头胎出生时间；C，母溞头胎幼溞数，母溞单胎最高产溞数，每只母溞的总产溞数。 柱形图上不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)。Fig. 1 Chronic toxicity of GO on D. magnaNote: A, Mortality of parent animals; B,Time to production of first brood; C, Number of offspring of first brood, Number of offspring of the most productive brood, Total number of offspring. Different letters above each column indicate statistically significant differences (P<0.05).

2.4 GO对大型溞的致毒机理探究

2.4.1 光学显微镜观察

为探究GO对大型溞的致毒机理，将暴露48 h和21 d后的大型溞置于光学显微镜下进行观察，结果如图2所示。与48 h控制组的图2(A)相比，可以看出暴露于GO中的大型溞的消化道中有深棕色物质积累(见图2(B))，表明GO能够被大型溞直接吞食，并积累在消化道中。与21 d控制组的图2(C)相比，可以看出在喂食栅藻的情况下，暴露21 d后的大型溞消化道内仍有GO积累(见图2(D, E, F, G))。

2.4.2 SOD、CAT活力以及MDA含量的测定结果

为进一步探究GO对大型溞的致毒机理，对暴露在GO悬浮液中48 h后的大型溞体内的SOD和CAT活力以及MDA含量情况进行了测定，结果如图3所示。

暴露在不同浓度GO中的大型溞体内的SOD和CAT活力的变化情况如图3(A和B)所示。当GO的浓度为0.1 mg·L-1时，GO对SOD和CAT活力均表现出显著的促进效应；随着GO浓度的增加，大型溞体内SOD和CAT活力分别由164.8 U·mg prot-1和48.6 U·mg prot-1逐渐增加到237.3 U·mg prot-1和70.6 U·mg prot-1。

暴露在不同浓度GO中的大型溞体内MDA含量的变化情况如图3(C)所示。当GO的浓度为0.1 mg·L-1时，GO对MDA含量表现出显著的促进效应；随着GO浓度的增加，MDA含量由1.3 nmol·mg prot-1逐渐增加到2.0 nmol·mg prot-1。

GO对数浓度分别与对应的大型溞体内SOD和CAT活力及MDA含量的线性拟合曲线如图3所示。通过图3中拟合方程的R2值和P值，可以看出GO的浓度与CAT和MDA的相关性较好，而与SOD的相关性稍差。

3 讨论(Discussion)

本研究通过大型溞的急性毒性实验，给出了GO对大型溞的急性毒性数据(48 h-LC50为84.2 mg·L-1)，对GO的生物毒性数据作了很好的补充。大型溞作为国际上公认的标准受试生物被广泛应用于废水[20-22]、重金属[23]、纳米材料[24-26]等污染物的生物毒性评价中，因此GO对大型溞毒性数据的补充就显得尤为重要。已有文献报道了GO对其他水生动、植物的急性毒性数据，如GO对纹藤壶[12]48 h-LC50值为560 mg·L-1，对丰年虾[13]48 h-LC50值为650 mg·L-1。由此可以看出，与纹藤壶和丰年虾相比，GO对大型溞的急性毒性作用较强，或者说大型溞对GO的急性毒性(48 h)响应比较敏感。另外，96 h的实验结果表明GO对月牙藻生长的96 h-EC50值为20 mg·L-1[1]，对小眼虫生长的96 h-EC50值为3.76 mg·L-1[11]。本研究发现大型溞暴露在浓度为50.0 mg·L-1的GO悬浮液中96 h后没有出现死亡现象，这说明与小眼虫和月牙藻相比，GO对大型溞的亚慢性毒性(96 h)作用较弱。

图2 GO在大型溞体内的摄入情况注：A，空白(48 h)；B，GO浓度为50 mg·L-1 (48 h)；C，空白(21 d)；D～G，GO浓度分别为0.01、0.1、1和10 mg·L-1 (21 d)。Fig. 2 Ingestion of GO by D. magnaNote: A, control (48 h); B, 50 mg·L-1 of GO (48 h); C, control (21 d); D-G,concentrations of GO was 0.01, 0.1, 1 and 10 mg·L-1 respectively (21 d).

图3 GO浓度对大型溞体内SOD和CAT活力及MDA含量的影响注：柱形图上不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)。图中斜线为GO对数浓度分别 与对应的大型溞体内SOD和CAT活力及MDA含量的线性拟合曲线。Fig. 3 Effect of GO concentrations on SOD and CAT activities and MDA content in D. magnaNote: Different letters above each column indicate statistically significant differences (P<0.05). The linear fit was shown as oblique lines between logarithm concentration of GO and SOD and CAT activities and MDA content in D. magna, respectively.

纳米材料中，除GO外，其他碳纳米材料对大型溞的急性毒性已有报道。如有研究表明碳纳米管对大型溞的48 h-LC50值为29.3 mg·L-1[27]；C60对大型溞的48 h-LC50值为7.9 mg·L-1[28]；稳定分散在没食子酸(gallic acid)中的C70即C70-GA对大型溞的96 h-LC50值为0.4 mg·L-1[24]。与本研究结果相比，上述纳米材料对大型溞的急性毒性较GO的毒性强(GO的NOEC为50 mg·L-1)，这说明GO是一种环境较为友好的纳米材料，为其工业化的广泛应用提供了基础数据。

相较于急性毒性来说，慢性毒性也同样应该引起人们的重视。有研究报道GO在环境中的浓度大概为0.01～1 mg·L-1[24]。在此浓度范围下GO对大型溞没有表现出急性致死毒性，但从本研究的结果来看，即使在这么低浓度下，长期暴露后仍然会对大型溞的生殖(如头胎出生时间、总产溞量)产生影响，甚至导致死亡。考虑到生物种群及生态系统的稳定性，慢性毒性研究对污染物的生态风险评价的意义也同样应该引起足够的重视[30]。

关于GO等纳米材料对大型溞的慢性毒性，已有文献报道过其他碳纳米材料对大型溞的慢性毒性。Seda等[24]的研究表明，C70-GA对大型溞慢性毒性的21 d NOEC为0.125 mg·L-1，C70浓度达到1 mg·L-1时，会显著抑制母溞存活率和母溞总产溞量。Mendonça等[31]研究表明金刚石对大型溞慢性毒性的21 d NOEC为0.63 mg·L-1，当金刚石浓度达到1.3 mg·L-1时能够显著抑制母溞总产溞量。由此可以看出，相对于其他的碳纳米材料来说，GO对大型溞的慢性毒性比C70-GA和金刚石的毒性强。

本研究表明GO能够被大型溞直接吞食，并积累在消化道中，因此消化道堵塞被认为是GO对大型溞的可能致毒途径之一。大型溞是一种滤食生物，它在“滤水”的同时能摄入水中尺寸在0.4～4 μm的物质[32]。本研究所用的GO在纯水中的平均粒径为1 μm左右，虽然GO在人工稀释水中会发生团聚，但单独分散的GO平均粒径在1 μm左右，因此这部分GO是能够被大型溞直接吞食的。被吞食的GO容易积累在大型溞的消化道中，很可能造成消化道的堵塞，从而阻止大型溞的正常摄食，表现出体长、繁殖数量等指标的降低，甚至可能引起死亡[27,33-34]。GO容易蓄积在水生生物的肠道中，这个发现在丰年虾的研究中也有报道[13]。有研究认为：在喂食藻类的情况下，大型溞可以排除体内积累的纳米材料。但是，这种排除也只是部分排除，而不是完全的排除。例如，Guo等[16]用碳标记的石墨烯悬浮液对大型溞进行的恢复实验，结果表明，养殖24 h后大型溞体内蓄积的石墨烯含量基本没有变化；同等条件下，饲以栅藻后大型溞体内积累的石墨烯有90%被排出，但是仍有部分残留在体内。Petersen等[35]研究碳纳米管在大型溞消化道中的蓄积情况时也有类似的发现。因此，根据图2中显示的GO在大型溞体内的排除情况，我们推测消化道堵塞是GO对大型溞慢性毒性的可能致毒途径。

除了GO外，其他碳纳米材料在大型溞体内的蓄积情况也有相关的研究报道。如Guo等[16]将新生幼溞置于250 μg·L-1的石墨烯悬浮液暴露24 h后，发现幼溞体内蓄积的石墨烯重量约占小溞干重的1%，随后将暴露后的小溞置于清洁的人工稀释水中进行养殖，24 h后幼溞体内蓄积的石墨烯含量基本没有改变；研究还发现，将已怀卵的母溞在250 μg·L-1的石墨烯悬浮液中暴露24 h后，在新生幼溞体内也会检测出石墨烯。除此之外，Stanley等[27]在研究多壁碳纳米管对大型溞的毒性时，认为堵塞在消化道中的纳米材料可能抑制了大型溞对藻类的摄入，从而影响大型溞的生长和繁殖。

除了消化道堵塞，氧化损伤也被认为是GO对大型溞的可能致毒途径之一。SOD和CAT是生物体内2种重要的抗氧化酶。SOD可以特异性地将O2·-催化分解为H2O2和O2，CAT可以催化H2O2分解为无毒性的H2O和O2，从而将活性氧(ROS)保持在较稳定的水平，保护生物体免受ROS的损害[11]。ROS的量超过了抗氧化清除能力时，会对机体造成氧化损伤，如脂质过氧化。MDA是脂质过氧化的主要产物。生物体内SOD和CAT活力及MDA含量的变化能够阐明污染物的毒性机制。在本研究中大型溞体内SOD和CAT活力升高，表明大型溞清除O2·-和H2O2自由基的能力增强，也表明了GO能够诱导大型溞体内产生过量的活性氧物种(如O2·-和H2O2)。而MDA含量的增加表明产生的过量的ROS已对大型溞造成了脂质过氧化。由此可以看出氧化损伤可能是GO对大型溞的致毒途径之一。

本研究表明GO会使大型溞体内SOD和CAT活力及MDA含量升高。除此之外，也有研究表明GO对其他水生生物也会造成氧化损伤。如，Hu等[11]的研究表明，当GO浓度为2.5 mg·L-1时，能够显著诱导小眼虫体内SOD和CAT活力及MDA含量的升高，这与本研究的结果一致。但是，Mesaric等[13]研究发现，当GO浓度高达500 mg·L-1时对丰年虾体内CAT活力没有显著影响。Zhao等[29]也发现，GO浓度在10～1 000 μg·L-1时，对拟南芥体内SOD和CAT活力均没有显著的影响。另外，这说明GO对生物体内抗氧化酶的影响机制较为复杂，需要进行更为深入的研究。

本研究以大型溞为受试生物，考察了GO对大型溞的急性毒性和慢性毒性，为GO的生态毒性数据提供了补充；GO对大型溞的致毒机理的考察表明消化道堵塞和氧化损伤可能是GO对大型溞的主要致毒途径。本研究的结果为GO的生态风险研究提供了基础数据。同时我们也应看到，由于环境水体中的溶解性有机质、重金属等物质的存在，都可能对排放到水体中的GO的毒性造成影响，因此有必要对影响GO生物毒性的相关物理及环境等因素进行后续的研究。

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TheToxicEffectsofGrapheneOxideonCrustaceanDaphniamagna

Shi Liu, Wang Dong, Zhang Ying*, Cao Di, Meng Tiantian, Guo Xi, Zhou Jiti

Key Laboratory of Industrial Ecology and Environmental Engineering (MOE), School of Environmental Science and Technology, Dalian University of Technology, Dalian 116024, China

10.7524/AJE.1673-5897.20170114007

2017-01-14录用日期2017-03-30

1673-5897(2017)3-416-09

X171.5

A

张瑛(1972-)，女，博士，副教授，主要研究方向为水生态风险评价及健康风险评价。

国家自然科学基金项目(21477014，21261140334)；中央高校基本科研业务费专项资金资助项目

石柳(1991-)，女，硕士研究生，研究方向为水生态风险评价，E-mail: shiliumail@163.com；

*通讯作者(Corresponding author)， E-mail: yzhang@dlut.edu.cn

石柳, 王栋, 张瑛, 等. 氧化石墨烯对大型溞的生物毒性效应研究[J]. 生态毒理学报，2017, 12(3): 416-424

Shi L, Wang D, Zhang Y, et al. The toxic effects of graphene oxide on crustacean Daphnia magna [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2017, 12(3): 416-424 (in Chinese)